1.

Dùng que cấy vòng lấy một khuẩn lạc nhúng vào ống nghiệm chứa môi trường LB
lỏng nuôi lắc ở 37oC, trong 24 giờ để giữ giống vi khuẩn. Dùng que cấy ria nhúng
vào ống trên sau đó ria lên môi trường thạch LB nuôi trong tủ ấm ở 37oC, trong 24
giờ.
2. Lấy 1 khuẩn lạc pha loãng trong 10ml nước muối sinh lý, so sánh độ đục tương
đương với dung dịch chuẩn Mcfarland chuẩn 0,05 độ đục tương đương nhau thì
dịch pha loãng đạt yêu cầu.
3. Đĩa thạch đã đổ môi trường MH agar có độ dày 4mm (20ml MHA).
4. Cho vào 100µl dịch vi khuẩn đã pha loãng vào đĩa. Dùng que tăm bông đã vô trùng
trang đều dịch canh trường.
5. Mặt thạch khô và rít thì tiến hành dừng trang. Để ráo trong 15 phút.
6. Dùng đầu tuýp vô trùng để đục các lỗ thạch tương ứng với chứng âm (DMSO
10%), chứng dương (Ampcillin 10mg/ml), mẫu acid 100%, mẫu acid 50%, mẫu
acid 20%, mẫu acid 10%, mẫu acid 5%.
Nạp vào mỗi lỗ 100µl dịch tương ứng với chứng âm (DMSO 10%), chứng dương
(Ampcillin 10mg/ml), mẫu acid 100%, mẫu acid 50%, mẫu acid 20%, mẫu acid
10%, mẫu acid 5%
7. Để yên 2 giờ ở nhiệt độ phòng trên bề mặt phẳng để các chất có thể khuếch tán
vào trong môi trường. Ủ 37oC, 24 giờ.

Hoạt tính kháng khuẩn của mẫu acid bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch được xác
định bằng công thức:

DK (mm) = D – d

Trong đó:
D: đường kính vòng vô khuẩn.
d: đường kính lỗ thạch.
Nhận diện vi khuẩn S. aureus và S. epidermidis: Mẫu bệnh phẩm cấy trên môi trường
MSA, ủ ở 37o C sau 24 giờ, quan sát sự xuất hiện của khuẩn lạc. Khuẩn lạc xuất hiện,
chọn những khuẩn lạc có màu trắng hoặc vàng, cấy phân lập nhiều lần để có dòng thuần.
Các dòng phân lập được kiểm tra hình thái và sinh hóa bằng nhuộm Gram, thử phản ứng
catalase, thử coagulase. Kết quả, nếu vi khuẩn có hình cầu, Gram dương, catalase dương
tính được xác định là Staphylococci. Nếu nhóm Staphylococci làm biến đổi màu môi
trường MSA từ đỏ sang vàng và phản ứng coagulase dương tính được xem là S. aureus.
Nếu nhóm Staphylococci không làm thay đổi màu môi trường MSA và phản ứng
coagulase âm tính được xem là S. epidermidies.