‫& ‪ Beijing Solarbio Science‬؛ شركة‪ Solarbio (D8930‬تم شراء ملح البوتاسيوم د ‪-‬لوسيفيرين من‬

‫يبلغ وقت امتصاص الدواء ‪ 15-10‬دقيقة‪ ،‬وال يمكن الكشف عن النشاط اإلشعاعي وبقاء ‪).‬بكين‪ ،‬الصين ‪Technology Limited،‬‬
‫الخلية‪ .‬قبل المالحظة‪ ،‬تم حقن ‪ 15‬مجم‪/‬مل من محلول البوتاسيوم لوسيفيرين في كل فأر داخل الصفاق بتركيز ‪ 10‬مجم‪/‬جم من كتلة‬
‫الجسم‪ .‬بعد ‪ 5‬دقائق‪ ،‬تم حقن الفئران بـ ‪ %1‬بنتوباربيتال صوديوم (‪ 50‬مجم‪/‬كجم) داخل الصفاق وفًقا لوزن الجسم‪ ،‬وتم مالحظة نمو‬
‫‪ Bruker‬؛ شركة‪ In-Vivo Xtreme (Xtreme BUX00081‬الورم من خالل التصوير الحيوي باستخدام نظام‬
‫‪).‬بيليريكا‪ ،‬ماساتشوستس‪ ،‬الواليات المتحدة األمريكية ‪Corporation،‬‬

‫اختبار التدفق الخلوي‬

‫‪ BD‬؛‪ (BD FACS Aria II‬تم إجراء تحليل خارج الجسم الحي لمجموعات مختلفة من الخاليا التائية باستخدام مقياس التدفق الخلوي‬
‫لدراسة الخاليا المناعية في الطحال واللمف‪ ،‬تم حصاد األنسجة ‪).‬سان خوسيه‪ ،‬كاليفورنيا‪ ،‬الواليات المتحدة األمريكية ‪Biosciences،‬‬
‫سان دييغو‪ BioLegend، ،‬الكتالوج‪100326 :‬؛( ‪ CD3-cy5.5‬من الفئران في مجموعات مختلفة وتم صبغها بأجسام مضادة لـ‬
‫( ‪ CD4-PE‬ومضادات ‪ BioLegend)،‬الكتالوج‪100712 :‬؛( ‪ CD8a-APC‬ومضادات ‪)،‬كاليفورنيا‪ ،‬الواليات المتحدة األمريكية‬
‫وفًقا لبروتوكوالت الشركة المصنعة‪ .‬باختصار‪ ،‬تم قطع األنسجة إلى قطع صغيرة ووضعها في )‪ BioLegend‬الكتالوج‪100408 :‬؛‬
‫متجانس زجاجي يحتوي على محلول ملحي فوسفاتي منظم (درجة الحموضة ‪ )7.4‬مع ‪ %2‬من مصل الجنين البقري المعطل بالحرارة‪.‬‬
‫ثم تم تحضير معلق خلية واحدة بالضغط اللطيف باستخدام المتجانس دون إضافة إنزيمات هضمية‪ .‬أخيًر ا‪ ،‬تم صبغ الخاليا بأجسام مضادة‬
‫لتحديد الخاليا ‪ُ Anti-CD45-FITC‬م وسومة بالفلورسنت بعد إزالة خاليا الدم الحمراء باستخدام ُم حلل خاليا الدم الحمراء‪ .‬تم استخدام‬
‫‪ CD3+CD4−CD8+‬والخاليا التائية المساعدة هي )‪ (CTLs‬التائية‪ .‬بناًء على هذه المجموعات‪ ،‬كانت الخاليا التائية السامة‬
‫‪ anti-CD45-‬على التوالي‪ .‬لتحليل الخاليا التائية القاتلة الطبيعية‪ ،‬تم صبغ الخاليا في اللمف بأجسام مضادة ‪CD3+CD4+CD8−‬و‬
‫‪anti-49b-‬و ‪ BioLegend)،‬الكتالوج‪100326 :‬؛( ‪anti-CD3-cy5.5‬و ‪ BioLegend)،‬الكتالوج‪103108 :‬؛( ‪FITC‬‬
‫كانت جميع الكواشف وأجهزة ‪ CD45+CD3−CD49b+.‬وفًقا للبروتوكوالت القياسية مثل )‪ BioLegend‬الكتالوج‪103516 :‬؛( ‪APC‬‬
‫تم تحضير معلق خلوي واحد من العقد الليمفاوية ‪ Biolegend (BD Biosciences).‬قياس التدفق الخلوي المستخدمة من‬
‫باستخدام نفس البروتوكول المستخدم في أنسجة الطحال‪ .‬تم تخفيف جميع األجسام المضادة المستخدمة في تجاربنا بمقدار ‪ 200‬ضعف‪ .‬تم‬
‫لمخططات التلوين المختلفة في الملف اإلضافي ‪ : 1‬البيانات األصلية ‪ ،1‬الملف اإلضافي ‪ FACS‬تقديم جميع استراتيجيات البوابة وبيانات‬
‫‪ : 2.‬البيانات األصلية ‪2‬‬

‫انزيم مرتبط المناعي فحص‬

‫‪ BMG LABTECH،‬؛‪ (SpectroNano S/N 601-1175‬المواد الكيميائية واألجهزة الرئيسية‪ :‬تم شراء طيف متعدد االستخدامات‬
‫‪ (PT512)،‬لدى الفئران )‪ (TNF-α‬لعامل نخر الورم ألفا )‪ (ELISA‬ومجموعة اختبار المناعة المرتبطة باإلنزيم ‪)،‬أوفنبرج‪ ،‬ألمانيا‬
‫ومجموعة اختبار المناعة المرتبطة ‪ (PI508)،‬لدى الفئران )‪ (IFN-γ‬ومجموعة اختبار المناعة المرتبطة باإلنزيم إلنترفيرون جاما‬
‫‪ Beyotime‬من شركة )‪ BCA (P0012‬ومجموعة اختبار البروتين ‪ (PI326)،‬لدى الفئران )‪ (IL-6‬باإلنزيم إلنترلوكين ‪6‬‬
‫تم طحن أنسجة الطحال لدى الفئران ‪(Shanghai BiYunTian Biotechnology Co. Ltd., Shanghai China).‬‬
‫تم جمع الدم من مقلة عين ‪ IFN-γ.‬من ثالث مجموعات بعد العالج‪ ،‬ثم تم استخدام اختبار المناعة المرتبطة باإلنزيم لقياس مستويات‬
‫الفئران ونقله إلى أنبوب مضاد للتخثر‪ .‬بعد الحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين‪ ،‬تم طرد الدم بسرعة ‪ 1000‬جم لمدة ‪20‬‬
‫‪.‬في المصل ‪ IL-6‬و ‪ TNF-α‬باستخدام العصارة الخلوية (المصل) لقياس مستويات ‪ ELISA‬دقيقة‪ ،‬وتم إجراء اختبار‬

‫معالجة العينات واستخراج الحمض النووي من البراز‬

‫تم جمع عينات البراز في الصباح وتخزينها عند درجة حرارة ‪ 80-‬درجة مئوية حتى استخالص الحمض النووي‪ .‬تم استخراج الحمض‬
‫‪)،‬ألمانيا ‪ QIAamp ® DNA Stool Mini Kit (Qiagen، Hilden،‬النووي الميكروبي من عينات البراز باستخدام مجموعة‬
‫‪S‬من جين ‪ V3–V4 16‬وفًق ا لبروتوكول الشركة المصنعة‪ .‬بعد التحديد الكمي‪ ،‬تم إجراء تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل لمنطقة‬
‫‪-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3).‬العكس‪-CCTACGGGNGGCWGCAG-3، 5 :‬األمام‪ (5 :‬الميكروبي باستخدام بادئات ‪rRNA‬‬
‫بعد الرحالن الكهربائي‪ ،‬تم تنقية منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل على هالم أجار بنسبة ‪ %1.2‬باستخدام مجموعة استخالص الجل‬
‫باستخدام )شنغهاي‪ ،‬الصين( ‪ Genesky Biotechnology, Inc.‬تم تسلسل المكتبات بواسطة ‪QIAquick (Qiagen).‬‬
‫‪ MiSeq Benchtop.‬جهاز تسلسل‬

‫تحليل المعلومات الحيوية‬

‫تم فرز التسلسالت الخام في عينات مختلفة ‪ Genesky Biotechnologies, Inc.‬تم إجراء تحليل المعلوماتية الحيوية بمساعدة‬
‫‪ CUTADAPT‬عن طريق مطابقة الباركود‪ .‬بعد ذلك‪ ،‬تم تقليم تسلسالت البادئات والباركود باستخدام‬
‫وتحليلها باستخدام ] ‪ FLASH [ 34‬تم دمج القراءات المعالجة باستخدام ‪(cutadapt.readthedocs.io/en/stable/#).‬‬
‫إلى ملف ‪ OTU‬لتحويل جدول ‪ MOTHUR‬تم استخدام ‪ (OTU).‬إلنشاء جدول وحدة تصنيف تشغيلية ] ‪ UPARSE [ 51‬خط أنابيب‬
‫عبر جميع عينات السماد من ‪ OTU‬إدخال مناسب لمزيد من تحليل ألفا وبيتا [ ‪ .] 53 ، 52‬تمت مقارنة المستويات النسبية لثراء‬
‫المرجحة لتحليل اإلحداثيات األساسية ‪ UniFrac‬خالل منحنى التخلخل‪ .‬لمقارنة االختالفات بين العينات المختلفة‪ ،‬تم حساب مسافات‬
‫وهي خوارزمية الكتشاف المؤشرات ‪ (LEfSe)،‬وحجم التأثير )‪ (LDA‬تم استخدام تحليل التمييز الخطي ‪(PCoA) [ 54 ، 55 ].‬‬
‫الحيوية عالية األبعاد‪ ،‬لتحديد العوامل المهيمنة المسؤولة عن االختالفات بين ثالث مجموعات [ ‪ .] 56‬وأخيًر ا‪ ،‬تم تصور خريطة حرارية‬
‫‪ R pheatmap.‬لمجتمع البكتيريا باستخدام حزمة‬

‫إحصائيات‬
‫‪ t‬واختبار )‪ (ANOVA‬وتم إجراء تحليل التباين أحادي االتجاه ‪ SPSS 23.0.‬تم إجراء التحليل اإلحصائي باستخدام برنامج‬ ‫للطالب‬
‫ذات داللة إحصائية ‪ p < 0.05‬إلجراء مقارنات بين المجموعات المتعددة‪ .‬وتم اعتبار القيمة‬
 ‫السرطان مرض جهازي معقد‪ .‬وباعتباره مكوًنا أساسًيا في الطب الصيني التقليدي‪ ،‬فإن الوخز باإلبر هو عالج طبي مثبت سريرًيا للعديد‬
‫من األمراض‪ ،‬كما أن له تأثيرات وقائية ألنه يوازن الجسم‪ ،‬مما يسمح له بتنظيم نفسه‪ .‬بالنسبة لمرضى السرطان‪ ،‬يتم استخدام الوخز‬
‫باإلبر على نطاق واسع كعالج تكميلي لتعزيز الجهاز المناعي وتقليل اآلثار الجانبية للعالج اإلشعاعي والعالج الكيميائي‪ .‬ومع ذلك‪ ،‬فقد‬
‫‪.‬حددت دراسات قليلة كيف يعمل الوخز باإلبر ضد السرطان‪ ،‬وخاصة في تنظيم البكتيريا المعوية للفئران المثقلة باألورام‬

‫ُطرق‬
‫لقد قمنا بعالج الفئران المصابة بورم ساركوما العظام باستخدام الوخز باإلبر في نقاط الوخز باإلبر المختلفة ومجموعات نقاط الوخز باإلبر‪،‬‬
‫وبعد ذلك قمنا بتحديد تأثيرات الوخز باإلبر على نمو الورم باستخدام تقنية التصوير في المختبر‪ .‬باإلضافة إلى ذلك‪ ،‬تم تحليل البكتيريا‬
‫‪.‬المعوية لفهم التأثيرات العالجية الشاملة والجهازية للوخز باإلبر في الفئران المصابة بورم ساركوما العظام‬

‫نتائج‬
‫يمكن أن يؤدي عالج الوخز باإلبر إلى تأخير نمو الورم وتغيرات البكتيريا المعوية في الفئران المصابة بأورام ساركوما العظام‪ .‬بالتفصيل‪،‬‬
‫تم تأجيل فقدان وزن الجسم وتطور حجم الورم لدى الفئران عن طريق وخز نقاط الوخز باإلبر المحددة‪ .‬باإلضافة إلى ذلك‪ ،‬أدى عالج‬
‫‪ Candidatus‬و ‪ Firmicutes‬و ‪ Bacteroidetes‬الوخز باإلبر إلى تأخير تغييرات الوفرة النسبية لبكتيريا‬
‫‪،‬على سبيل المثال( على مستوى الشعبة‪ .‬عالوة على ذلك‪ ،‬تم تنظيم الوفرة النسبية للعديد من البكتيريا ‪Saccharibacteria‬‬
‫باستخدام عالج الوخز باإلبر‪ ،‬كما تم تأجيل اتجاه التغيرات ) ‪ Aestuariispira‬و ‪ Acetatifactor‬و ‪Catabacter‬‬
‫‪.‬البنيوية لهذه البكتيريا على مستوى الجنس مقارنة بنموذج مجموعة الفئران المثقلة باألورام‬

‫خاتمة‬
‫تشير نتائجنا إلى أن الوخز باإلبر قد يوفر عالًج ا جهازًيا للسرطان‪ .‬وتشجع نتائجنا على إجراء أبحاث جديدة وموسعة حول تأثيرات الوخز‬
‫‪.‬باإلبر على التغيرات في الميكروبيوم المعوي المرتبط بتطور السرطان‬

‫خلفية‬
‫السرطان هو مشكلة صحية عامة رئيسية في جميع أنحاء العالم وهو سبب رئيسي للوفاة في كل من البلدان األكثر واألقل تقدًم ا اقتصادًيا [‬
‫‪ .] 1‬وفًقا لذلك‪ُ ،‬تظهر أحدث التقديرات أن جميع البلدان تواجه تحديات هائلة في إدارة العبء المتزايد والكبير جًدا للسرطان‪ ،‬والذي‬
‫سيزداد فقط في المستقبل [ ‪ .] 2‬لذلك‪ ،‬أصبح التحقيق في السرطان مجااًل ساخًنا في البحث العلمي‪ ،‬وقد تم استخدام العديد من التقنيات‬
‫الطبية الحيوية الجديدة (مثل علم الجينوم‪ ،‬وعلم البروتينات‪ ،‬وعلم التمثيل الغذائي) في هذا المجال [ ‪.] 8 ، 7 ، 6 ، 5 ، 4 ، 3‬‬
‫في اآلونة األخيرة‪ ،‬أظهرت دراسات متزايدة أن ميكروبات األمعاء تلعب دوًر ا مهًم ا في تنظيم صحة اإلنسان والمرض من خالل الحفاظ‬
‫على توازن األمعاء [ ‪ .] 10 ، 9‬يرتبط خلل ميكروبات األمعاء بالعديد من األمراض‪ ،‬بما في ذلك أمراض الجهاز الهضمي [ ‪، 11‬‬
‫‪ ] 14 ، 13 ، 12‬والسرطان [ ‪ .] 16 ، 15‬للكائنات الحية الدقيقة تأثيرات مهمة على السرطان؛ على سبيل المثال‪ ،‬تم التعرف‬
‫وفيروس الورم الحليمي البشري تسبب السرطان [ ‪ C ، 18 ، 17‬و ‪ B‬على أن بكتيريا هيليكوباكتر بيلوري وفيروسات التهاب الكبد‬
‫‪ .] 20 ، 19‬باإلضافة إلى ذلك‪ ،‬أظهر عدد متزايد من الدراسات المقارنة وجود اختالفات في تكوين ميكروبات األمعاء بين مرضى‬
‫السرطان واألفراد األصحاء‪ ،‬وغالًبا ما يتسبب حدوث السرطان في حدوث تغييرات في البكتيريا المعوية أو يصاحبها [ ‪23 ، 22 ، 21‬‬
‫]‪ .‬وتشمل تلك السرطانات المبلغ عنها مع تغيرات في البكتيريا المعوية ليس فقط سرطانات الجهاز الهضمي (مثل سرطان المعدة وسرطان‬
‫القولون والمستقيم) [ ‪ ،] 16 ، 15‬ولكن أيًض ا أنواع أخرى من السرطان (مثل سرطان البنكرياس والكبد والبروستات والثدي) [ ‪24‬‬
‫‪ .] 29 ، 28 ، 27 ، 26 ، 25 ،‬ومع تقديم األبحاث لألدلة وتوسيع فهمنا لآلليات المسرطنة‪ ،‬تقدم الدراسات حول البكتيريا المعوية‬
‫‪.‬المزيد من الفرص لتطوير عالجات لتشخيص السرطان وإدارته‬

‫وفي الوقت نفسه‪ ،‬ونظًر ا النتشار حاالت السرطان على نطاق واسع في جميع أنحاء العالم‪ ،‬وخاصة في الصين [ ‪ ،] 1‬يتم استخدام عدد‬
‫متزايد من العالجات التكميلية والبديلة في عالج السرطان وإدارته‪ .‬الوخز باإلبر هو عالج تكميلي مهم يعتمد على نظريات ومبادئ الطب‬
‫الصيني‪ ،‬وله تطبيقات واسعة وهو آمن واقتصادي ومريح مع آثار جانبية قليلة [ ‪ .] 30‬حتى اآلن‪ ،‬تم استخدام العالج بالوخز باإلبر‬
‫على نطاق واسع لعالج أمراض مختلفة‪ ،‬مثل األلم [ ‪ ] 31‬ومرض االنسداد الرئوي المزمن [ ‪ ] 30‬وسرطان الثدي [ ‪] 32‬‬
‫والربو [ ‪ ] 33‬والتهاب األنف التحسسي [ ‪ ] 34‬وضعف اإلدراك الخفيف [ ‪ .] 35‬وقد جذب استخدام الوخز باإلبر لعالج‬
‫مجموعة متنوعة من الحاالت المرتبطة بالمرض انتباه العلماء في جميع أنحاء العالم‪ .‬في التقليد‪ ،‬يتم استخدام الوخز باإلبر لعالج األمراض‬
‫الناجمة عن انسداد "تشي" و"شيويه" [ ‪ ،] 36‬مما يؤدي إلى تأثير عالجي جيد للوخز باإلبر على األلم [ ‪ ،] 31‬بما في ذلك آالم‬
‫السرطان [ ‪ .] 37‬تم التحقيق في األساس الفسيولوجي للعمل المسكن للوخز باإلبر باستخدام العلوم والتكنولوجيا الحديثة‪ ،‬وقد ُتعزى‬
‫‪ N -methyl- D -‬التأثيرات المسكنة للوخز باإلبر إلى تعديل نظام إشارات ‪-5‬هيدروكسي تريبتامين والنظام األدرينالي ونظام إشارات‬
‫وما إلى ذلك [ ‪ .] 31‬باإلضافة إلى ذلك‪ ،‬يعد الوخز باإلبر عالًج ا شامًال ومتكاماًل ‪ .‬مع ‪aspartic acid/AMPA/kainate‬‬
‫تطور تكنولوجيا الجينوم‪ ،‬تمت دراسة التأثير العالجي للوخز باإلبر في المزيد من األمراض (على سبيل المثال‪ ،‬أمراض الجهاز الهضمي)‪،‬‬
‫وتم اكتشاف بعض عالمات البروتين واأليض لإلشارة إلى تأثير الوخز باإلبر باستخدام تحليل البروتينات وتحليل األيض [ ‪.] 39 ، 38‬‬
‫عالوة على ذلك‪ ،‬حاولت العديد من مراكز األبحاث في أوروبا والواليات المتحدة دمج الوخز باإلبر مع عالج السرطان التقليدي [ ‪، 40‬‬
‫‪ .] 41‬حالًيا‪ ،‬يركز استخدام الوخز باإلبر في السرطان على تحسين األعراض السريرية لمرضى السرطان وتقليل اآلثار الجانبية الناجمة‬
‫عن العالج اإلشعاعي والعالج الكيميائي [ ‪ .] 44 ، 43 ، 42‬ركزت بعض الدراسات على موت الخاليا السرطانية والتعبير عن‬
‫من أجل اإلشارة إلى التأثير العالجي للوخز باإلبر على حيوانات نموذج )‪CDK4‬و ‪، CyclinD1‬على سبيل المثال( الجينات والبروتينات‬
‫الورم [ ‪ .]47 ، 46 ، 45‬ومع ذلك‪ ،‬فإن البحث حول ما إذا كان الوخز باإلبر يمكن أن يؤخر نمو ونقائل األورام في الجسم الحي‬
‫محدود‪ ،‬كما أن األدلة الطبية الحيوية لعالج الوخز باإلبر للسرطان تحتاج أيًض ا إلى مزيد من االستكشاف‪ .‬في اآلونة األخيرة‪ ،‬ربطت بعض‬
‫الدراسات بين تأثيرات الوخز باإلبر والتغيرات في البكتيريا المعوية لدراسة التأثيرات التنظيمية للوخز باإلبر (أو الكي) على السمنة والتهاب‬
‫القولون التقرحي [ ‪ .] 50 ، 49 ، 48‬اقترحت هذه الدراسات أن ميكروبات األمعاء قد تكون هدًفا جديًدا لتأثيرات عالج الوخز‬
‫باإلبر‪ .‬لذلك‪ ،‬فإن دراسة تنظيم البكتيريا المعوية جنًبا إلى جنب مع التأثيرات العالجية للوخز باإلبر على السرطان في الجسم الحي قد توفر‬
‫‪.‬وجهة نظر جديدة لفهم التأثير العالجي للوخز باإلبر على السرطان‬

‫في هذا البحث‪ ،‬عالجنا الفئران المصابة بورم ساركوما العظام باستخدام الوخز باإلبر‪ ،‬وحددنا تأثيرات الوخز باإلبر على نمو الورم باستخدام‬
‫تقنية التصوير في المختبر‪ .‬باإلضافة إلى ذلك‪ ،‬تم تحليل البكتيريا المعوية لفهم التأثيرات العالجية الشاملة والجهازية للوخز باإلبر في‬
‫الفئران المصابة بورم ساركوما العظام‪ .‬أظهرت النتائج أن عالج الوخز باإلبر يمكن أن يؤخر نمو الورم وتغيرات البكتيريا المعوية في‬
‫‪.‬الفئران المصابة بورم ساركوما العظام‪ ،‬وبالتالي توفير رؤى جديدة في التحقيق في عالج الوخز باإلبر‬

‫المواد واألساليب‬
‫الحيوانات‬
‫اإلناث (‪ 18-16‬جم؛ تتراوح أعمارها بين ‪ 8-6‬أسابيع) وإيوائها في مركز الحيوانات التجريبية بجامعة ‪ BALB/c‬تم التعامل مع فئران‬
‫تشانغتشون للطب الصيني ( جيلين‪ ،‬الصين)‪ .‬وقد وافقت لجنة األخالقيات بجامعة تشانغتشون للطب الصيني على البروتوكوالت (رقم‬
‫‪)20180107.‬‬

‫زراعة الخاليا وإنشاء نموذج فأري لساركوما العظام‬

‫الكامل ‪ Dulbecco's Modified Eagle's Medium‬لدى الفئران في وسط ‪ K7‬تم الحفاظ على ساللة خاليا ساركوما العظام‬
‫عند درجة حرارة )‪ Hyclone‬؛‪ (FBS‬مضاًفا إليه ‪ %10‬من مصل الجنين البقري )‪(Hyclone، South Logan، UT، USA‬‬
‫‪ 37‬درجة مئوية‪ .‬تم حصاد الخاليا بعد الوصول إلى نقطة التقاء قريبة‪ .‬لم يتم االستمرار في التجارب إذا كانت قابلية الخاليا للبقاء أقل‬
‫من ‪ ،%90‬كما تم تقييمها من خالل تلطيخ التريبان األزرق‪ .‬تم إنشاء مجموعات التحكم (ن = ‪ ،10‬تطعيم غير ورمي)‪ ،‬والنموذج (ن‬
‫= ‪ ،10‬عالج غير بالوخز باإلبر)‪ ،‬وعالج الوخز باإلبر (ن = ‪ ،10‬مجموعات نقاط الوخز باإلبر المحددة ومجموعة نقاط الوخز باإلبر‬
‫‪ K7 (3 × 10‬المركبة‪ ،‬كل مجموعة بها عشرة حيوانات)‪ .‬باختصار‪ ،‬تم حقن الفئران في مجموعات النموذج والعالج تحت الجلد بخاليا‬
‫بينما تم حقن مجموعة التحكم تحت الجلد بالمحلول الملحي وحده‪ .‬بدأ عالج الوخز ‪)،‬خاليا في ‪ 100‬ميكرولتر من المحلول الملحي ‪6‬‬
‫باإلبر للفئران في مجموعة العالج عندما وصل حجم الورم إلى حوالي ‪ 70‬مم ‪ .3‬تم تقسيم عملية العالج بأكملها إلى ثالث مراحل‪:‬‬
‫كانت المرحلة األولى (من األيام ‪ 0‬إلى ‪ ،5‬بإجمالي ‪ 6‬أيام) هي المرحلة األساسية‪ ،‬والتي كانت الفترة بعد زرع الورم وقبل العالج؛‬
‫والمرحلة الثانية (من األيام ‪ 6‬إلى ‪ ،12‬بإجمالي ‪ 7‬أيام)؛ والمرحلة الثالثة (من األيام ‪ 14‬إلى ‪ ،20‬بإجمالي ‪ 7‬أيام) كانت فترة عالج‬
‫‪Baihui‬و )‪ Shenshu (BL23‬الوخز باإلبر‪ ،‬مع عدم وجود عالج في اليوم ‪ .13‬تم إجراء الوخز باإلبر في نقاط الوخز باإلبر‬
‫مرة واحدة يومًيا لمدة أسبوعين‪ .‬تم قياس األقطار القصيرة والطويلة لزرع العظم ) الشكل ‪Zusanli (ST36) (1‬و )‪(DU20‬‬
‫تحت الجلد ووزن الفئران كل يومين لمدة أسبوعين‪ .‬قم بقياس القطر القصير والقطر الطويل للورم (مم) باستخدام الفرجار كل يومين لمدة‬
‫أسبوعين‪ .‬تم حساب حجم الورم بالمعادلة التالية‪( :‬القطر القصير) ‪( × 2‬القطر الطويل)‬