‫طرق تنمية وعزل الخمائر‬

‫المعمل الثاني‬
 ‫أهمية عزل الخمائر‬
‫تستخدم بعض عزالت الخمائر بعد تنقيتها النتاج‬
‫• إن‪#‬زيم مث‪##‬ل (الليب‪##‬يز) لتحلي‪##‬ل ال‪##‬دهون وال‪##‬ذي يمكن أن ي‪##‬دخل في ص‪##‬ناعات عدي‪##‬دة أهمه‪##‬ا‬
‫صناعة المنظفات‪.‬‬
‫• وأيضا تستخدم النتاج فيتامين ب المركب‬
‫• انتاج البروتينات‬
‫• استخدام بعض السالالت في الهندسة الوراثية‬
‫• اح‪##‬د أهم اس‪##‬تخدامات الخم‪##‬ائر هي النت‪##‬اج كح‪##‬ول االيث‪##‬انول وه‪##‬و يلي الم‪##‬اء كم‪##‬ذيب ع‪##‬ام‬
‫للمواد العضوية‬
‫يستخدم لعزل الخمائر بيئات مختلفة تحتوي على مواد محفزة لنمو الخمائر من أفضلها‬
‫‪Molybdate agar‬‬
‫‪PDA‬‬
 ‫طرائق عزل الخمائر النقية‬
‫هناك عدة طرق يمكن بواسطتها عزل خميرة نقية من المحلول نذكر منها ما يلي ‪:‬‬
‫‪ -1‬طريقة الزرع من التخفيف‪:‬‬
‫• تس‪#‬تعمل بيئ‪#‬ة غذائي‪#‬ة ( وس‪#‬ط زراعي ) مناس‪#‬بة لنم‪#‬و الخم‪#‬يرة ومحتوي‪#‬ة على كائن‪#‬ات دقيق‪#‬ة‬
‫مختلفة‬
‫• يج ‪##‬ري تلقيح أنبوب ‪##‬ة اختب ‪##‬ار تحت ‪##‬وي على بيئ ‪##‬ة الم ‪##‬رق المغ ‪##‬ذي ال ‪##‬ذائب بواس ‪##‬طة اإلب ‪##‬رة‬
‫الحلقية ‪Loop‬‬
‫• تنقل قطرة من األنبوبة األولى إلى أنبوبة ثانية وثالثة‬
‫• ثم تصب األنابيب الثالث في أطباق بتري‬
‫• تحضن في درجة حرارة ‪ 50‬م لمدة يومين ‪.‬‬
‫• بع‪## #‬دها نالح‪## #‬ظ بواس‪## #‬طة المجه‪## #‬ر المس‪## #‬تعمرات النامي‪## #‬ة على س‪## #‬طح اآلج‪## #‬ار المغ‪## #‬ذي‬
‫الص‪## #‬لب ‪ ،‬وينق‪## #‬ل واح‪## #‬دة منه‪## #‬ا إلى بيئ‪## #‬ة غذائي‪## #‬ة مناس‪## #‬بة بع‪## #‬دما يتم التأك‪## #‬د من نق‪## #‬اوة‬
‫طريقة الشريحة الرطبة‬
‫‪Hansen slide‬‬
‫تتكون من شريحةتشبه شريحةالقطرة المعلقة(معقمة)وغطاءزجاجي‬
‫‪ Cover slip‬مقسم إلى مربعات متساوية تتراوح بين ‪ 16-1‬مربع‬
‫تش‪##‬مل طريق‪##‬ة االس‪##‬تعمال وض‪##‬ع قط‪##‬رة من محل‪##‬ول مخف‪##‬ف يحت‪##‬وي على‬ ‫•‬
‫خاليا قليلة من الخميرة على الغطاء‪,‬ثم يوضع عليها اآلجار السائل‬
‫وتوضع قطرة ماء معقم داخل التجويف ( التقعر )‬ ‫•‬
‫بع ‪##‬د تص ‪##‬لب اآلج ‪##‬ار يوض ‪##‬ع ح ‪##‬ول الش‪# #‬ريحة الش ‪##‬مع ال ‪##‬ذائب إلغالقه ‪##‬ا‬ ‫•‬
‫تماما ‪.‬‬
‫يج‪##‬ري الترك‪##‬يز على خلي ‪##‬ة واح‪##‬دة ويح‪##‬دد مكانه ‪##‬ا بالض‪##‬بط ب‪##‬رقم المرب‪##‬ع‬ ‫•‬
‫وذلك باستخدام المجهر‬
‫ثم تحض‪##‬ن الش‪#‬ريحة في درج‪##‬ة ح‪#‬رارة (‪ 25‬م ) لم‪##‬دة ي‪##‬ومين ‪ ،‬وق‪##‬د تنم‪##‬و‬ ‫•‬
‫الخلي‪##‬ة مكون‪##‬ة مس‪##‬تعمرة ‪ .‬وبع‪##‬د الفحص ينق‪##‬ل ج‪##‬زء من المس‪##‬تعمرة إلى‬
 ‫بواسطة الماصة الدقيقة‬
‫‪Micromanipulator‬‬

‫• باس‪##‬تعمال ماص‪##‬ة دقيق‪##‬ة ج‪##‬دا وبواس‪##‬طة المجه‪##‬ر البس‪##‬يط‬

‫يتم التق ‪## #‬اط واح ‪## #‬دة من خالي ‪## #‬ا الخم ‪## #‬يرة ‪ ،‬ال ‪## #‬تي تنق ‪## #‬ل‬
‫مباشرة إلى بيئة غذائية مناسبة‬
‫• تحضن بدرجة حرارة الغرفة‬
‫• تعت‪## # # #‬بر ه‪## # # #‬ذه الطريق‪## # # #‬ة من أس‪## # # #‬هل وأس‪## # # #‬رع الطرائ‪## # # #‬ق‬
‫المستخدمة‬
 ‫تنميه الخمائر‬

‫النمو عبارة عن الزيادة في عدد الخاليا أو الكتلة‪mass‬‬

‫ف‪#‬إذا ج‪#‬رى تلقيح خالي‪#‬ا خم‪#‬يرة في بيئ‪#‬ة غذائي‪#‬ة (وس‪#‬ط زرعي) مناس‪#‬بة ومحتوي‪#‬ة على‬
‫جمي ‪##‬ع العناص ‪##‬ر الغذائي ‪##‬ة ‪.‬فإن الخالي ‪##‬ا تق ‪##‬وم بامتص‪##‬اص الم ‪##‬واد الغذائي ‪##‬ة الذائب ‪##‬ة مث ‪##‬ل‬
‫الم ‪##‬واد الكربوهيدراتي ‪##‬ة واآلزوتي ‪##‬ة واألمالح المعدني ‪##‬ة عالوة على عوام ‪##‬ل النم ‪##‬و‪.‬وتمر‬
‫الم‪##‬واد الغذائي‪##‬ة الممتص‪##‬ة بع‪##‬دة تح‪##‬والت مختلف‪##‬ة ح‪##‬تى تحص‪##‬ل الخلي‪##‬ة على الم‪##‬واد‬
‫الالزم ‪##‬ة لبن ‪##‬اء بروتوبالزمه ‪##‬ا وخالياه ‪##‬ا الجدي ‪##‬دة ‪,‬كم ‪##‬ا ت ‪##‬ؤمن في ال ‪##‬وقت نفس ‪##‬ه الطاق ‪##‬ة‬
‫الالزم‪##‬ة لتف‪##‬اعالت البن‪##‬اء المختلف‪##‬ة ‪.‬وقد ي‪##‬ؤثر ن‪##‬وع البيئ‪##‬ة الغذائي‪##‬ة ومكوناته‪##‬ا وك‪##‬ذلك‬
‫الظ ‪##‬روف البيئي ‪##‬ة المحيط ‪##‬ة على مع ‪##‬دل ‪,‬وأحيان‪ً# #‬ا على ش ‪##‬كل الخلي ‪##‬ة ول ‪##‬ون الج‪# #‬راثيم‬
‫الالجنس‪#‬ية ‪.‬و تتن‪#‬اول الخم‪#‬يرة غ‪#‬ذاءها بوس‪#‬اطة االنتش‪#‬ار الغش‪#‬ائي عن طري‪#‬ق ج‪#‬درانها‬
‫السيتوبالزمية‬
‫توج‪#‬د طرائ‪#‬ق مختلف‪#‬ة لتنمي‪#‬ة فط‪#‬ر الخم‪#‬يرة ويتوق‪#‬ف اس‪#‬تخدام أي طريق‪#‬ة على ن‪#‬وع الفط‪#‬ر والغ‪#‬رض من تنميت‪#‬ه ‪.‬ويستخدم ع‪#‬ادة بيئ‪#‬ات ص‪#‬لبة أو س‪#‬ائلة تحت‪#‬وي‬

‫على المواد الغذائية المناسبة‪.‬وفيما يلي أهم الطرائق المستخدمة‪:‬‬

 ‫البيئات (األوساط الزرعية ) الصلبة‬
‫‪Solid media‬‬
‫• تس‪## # #‬تخدم البيئ‪## # #‬ات الغذائي‪## # #‬ة الص‪## # #‬لبة (المحتوي‪## # #‬ة على اآلغ‪## # #‬ار أو‬
‫الهالم ) لع‪#‬زل الخم‪#‬يرة ودراس‪#‬ة خواص‪#‬ها المزرعي‪#‬ة وتك‪#‬وين الج‪#‬راثيم‬
‫وكذلك دراسة تأثير الضوء والحرارة ‪.‬‬
‫• يمكن تق‪##‬دير مع‪##‬دل النم‪##‬و باس‪##‬تخدام البيئ‪##‬ات الص‪##‬لبة وذل‪##‬ك بقي‪##‬اس‬
‫قط‪## #‬ر المس‪## #‬تعمرة على ف‪## #‬ترات مختلف‪## #‬ة ‪.‬وقد تف‪## #‬رز بعض الفطري‪## #‬ات‬
‫ص‪#‬بغات ذائب‪#‬ة بالبيئ‪#‬ة الص‪#‬لبة يمكن تمييزه‪#‬ا بتغ‪#‬ير لونه‪#‬ا بإض‪#‬افة نقط‪#‬ة‬
‫من الهيدروجين ‪.‬‬
‫• تس ‪##‬تخدم البيئ ‪##‬ات الص ‪##‬لبة للكش ‪##‬ف على ق ‪##‬درة الخم ‪##‬يرة على انت ‪##‬اج‬
‫حمض أثن‪##‬اء النم‪##‬و وذل‪##‬ك بوض‪##‬ع دلي‪##‬ل (كاش‪##‬ف) يتغ‪##‬ير لون‪##‬ه بتغ‪##‬ير الـ‬
‫‪ PH‬أو بإض‪#‬افة كربون‪#‬ات الكالس‪#‬يوم فيالح‪#‬ظ تغ‪#‬ير الل‪##‬ون أو تش‪#‬كل‬
‫هال‪#‬ة رائع‪#‬ة ح‪#‬ول النم‪#‬و عن‪#‬دما يغ‪#‬ير الفط‪#‬ر درج‪#‬ة ‪ PH‬الوس‪#‬ط ال‪#‬ذي‬
‫ينم‪#‬و في‪#‬ه نتيج‪#‬ة للتح‪#‬والت الغذائي‪#‬ة المختلف‪#‬ة وق‪#‬د تتش‪#‬كل هال‪#‬ة كب‪#‬يرة‬
‫مما يدل على أن الفطر يفرز كمية كبيرة من الحمض‪.‬‬
 ‫البيئات السائلة ‪liquid media :‬‬
‫أ‌‪ -‬المزارع السطحية ‪Surface cultures‬‬
‫• يستخدم في هذه الطريقة دوارق زجاجية توضع فيها البيئات‬
‫الغذائية السائلة ‪,‬ثم تلقح بجراثيم الفطر أو بجزء من المشيجة‬
‫(الميسيليوم)ثم تحضن على درجة حرارة مناسبة‬
‫• يالحظ بعد فترة ظهور المشيجة النامية على سطح البيئة مكونة‬
‫حصيرة من النمو والتي تزداد مساحتها حتى تمأل البيئة كلها‬
‫• من عيوبها أن المشيجة ال تكون متجانسة فيكون جزء من‬
‫الهيفات معرضا للظروف الهوائية مما يؤدي إلى تكوين الجراثيم‬
‫‪,‬ويكون الجزء اآلخر مغمورًا بالبيئة بعيدًا عن الهواء‪.‬‬
 ‫ب‌‪ -‬المزارع المهتزة (الهزازة ‪(:shaken cultures‬‬
‫• توض ‪##‬ع في ه ‪##‬ذه الطريق ‪##‬ة ال ‪##‬دوارق الزجاجي ‪##‬ة (المحتوي ‪##‬ة‬
‫على البيئ‪##‬ة الغذائي‪##‬ة الملقح‪##‬ة في جه‪##‬از ه‪#‬زاز) ‪shaker‬‬
‫ذي س‪#‬رعة مناس‪#‬بة) ح‪#‬تى يمكن ه‪#‬ز البيئ‪#‬ة الس‪#‬ائلة باس‪#‬تمرار‬
‫إلذابة جزء من األوكسجين الجوي فيها ‪.‬‬
‫• يالح ‪##‬ظ هن ‪##‬ا أن النم ‪##‬و يك ‪##‬ون متجانس‪ً# #‬ا ومنتش‪# #‬رًا في ك ‪##‬ل‬
‫البيئ‪##‬ة وال تتك‪#‬ون ج‪#‬راثيم ولكن نحص‪#‬ل على نم‪##‬و خض‪#‬ري‬
‫فقط ‪.‬‬
‫ج‪ -‬المزارع المهواة ‪: stirred aerated cultures‬‬
‫• يس ‪##‬تخدم ب ‪##‬المزارع المه ‪##‬واة وع ‪##‬اء خ ‪##‬اص يس ‪##‬مى‬
‫ب‪#‬المخمر (المفاع‪#‬ل الحي‪#‬وي) يم‪#‬رر بداخل‪#‬ه اله‪#‬واء‬
‫م ‪## #‬ع التقليب وي ‪## #‬دخل اله ‪## #‬واء معقم‪ً# # #‬ا وبكمي ‪## #‬ات‬
‫تتوق‪##‬ف على كمي‪##‬ة الس‪##‬كر المض‪##‬افة وعلى مع‪##‬دل‬
‫نمو الفطر‬
‫• وتفض‪#‬ل ه‪#‬ذه الطريق‪#‬ة إلنت‪#‬اج بعض الن‪#‬واتج الفطري‪#‬ة‬
‫الهام‪#‬ة مث‪#‬ل انت‪#‬اج األنزيم‪#‬ات والمض‪#‬ادات الحيوي‪#‬ة‬
 ‫د‪-‬المزارع المستمرة ‪: continuos cultures‬‬
‫• يستخدم في هذه الحالة األجهزة ذاتها المستخدمة بالمزارع المهواة ولكن يتم‬
‫إضافة البيئة الغذائية باستمرار مع سحب (استجرار) جزء من المزرعة في الوقت‬
‫نفسه بما تحتويه من خاليا الفطر أو نواتجه‬
‫• في هذه الحالة يكون التخمر بشكل مستمر وبسرعة ثابتة‬
‫• تعتبر المزارع المستمرة من الطرائق الهامة بدراسة التخمرات الميكروبية حيث‬
‫يمكن التحكم ( تنظيم أو ضبط) بمعدل اإلضافة أو معدل السحب‪.‬‬
‫العوامل البيئية (الطبيعية و الكيميائية)‬
‫المؤثرة على نمو الخمائر‬
‫يتاثر نمو الخمائر و تكاثرها بعدة عوامل من أهمها‪:‬‬
‫‪ .1‬درجة الحرارة‬
‫‪ .2‬المــاء (الرطوبة)‬
‫‪ .3‬الحموضة (‪)PH‬‬
‫‪ .4‬التهوية (االوكسجين)‬
‫‪ .5‬الضغط‬
‫‪ .6‬نوع الغذاء‬
‫‪ .7‬مواد مانعة للنمو‬