KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC NHÓM NGHIÊN CỨU: Nguyễn Quốc Khang

PHÒNG THÍ NGHIỆM SINH HÓA

BẢNG KẾ HOẠCH CHI TIẾT THÁNG 6.2024

Tên đề tài: NGHIÊN CỨU QUÁ TRÌNH LÊN MEN PHẾ PHẨM VỎ CANH DÂY BẰNG HỆ VI SINH VẬT SCOBY CÓ BỔ
SUNG DỊCH CHIẾT QUẢ NHO. ỨNG DỤNG TRONG CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN NƯỚC UỐNG LÊN MEN.

Thời gian Nội dung công việc Hóa chất Thiết bị sử dụng
Tuần 1 Nuôi Cấy Vi Sinh Vật Từ SCOBY
(thứ 3,6 ) · Nuôi cấy vi khuẩn và nấm men trên môi trường chọn lọc:

- Chuẩn bị môi trường nuôi cấy: Sử dụng các loại môi trường thạch
chọn lọc phù hợp cho từng nhóm vi sinh vật như thạch MRS (de Man,
Rogosa, and Sharpe) cho vi khuẩn axit lactic, thạch Sabouraud Dextrose
cho nấm men, và thạch GYC (Glucose Yeast Calcium Carbonate) cho vi
khuẩn axit axetic.

Phương pháp nuôi cấy: Lấy mẫu từ SCOBY và pha loãng, sau đó
dàn trải lên các đĩa thạch chọn lọc và ủ ở nhiệt độ phù hợp (thường từ 25-
37°C)
Nước muối sinh lý (NaCl
0.9%),Cồn Ethanol
· Lấy Mẫu Từ SCOBY

 Sử dụng pipet hoặc que cấy vô trùng để lấy một mẫu nhỏ từ
 SCOBY. Mẫu bao gồm cả vi khuẩn và nấm men.

· Pha Loãng Mẫu

 Chuẩn bị dung dịch đệm vô trùng trong các ống nghiệm.

 Chuyển một lượng nhỏ mẫu SCOBY vào ống nghiệm đầu tiên chứa
Thạch MRS
dung dịch đệm (pha loãng 10^-1). (DeMan,RogosaandSharp
 Lắc đều và chuyển một lượng nhỏ từ ống nghiệm đầu tiên sang ống e),Thạch Sabouraud
nghiệm thứ hai chứa dung dịch đệm (pha loãng 10^-2).
 Lặp lại quá trình này để đạt được các mức pha loãng cần thiết (10^-
3, 10^-4, ...).

· Dàn Trải Mẫu Lên Đĩa Thạch

 Lấy một lượng nhỏ dung dịch từ mỗi ống nghiệm pha loãng và dàn
trải đều lên bề mặt đĩa thạch bằng que cấy vô trùng.
 Sử dụng các loại thạch chọn lọc phù hợp với loại vi sinh vật cần
nuôi cấy:

o Thạch MRS: Nuôi cấy vi khuẩn lactic.

o Thạch Sabouraud: Nuôi cấy nấm men.

· Ủ Ở Nhiệt Độ Phù Hợp

Đặt các đĩa thạch vào lò ủ vi sinh ở nhiệt độ 25-37°C tùy thuộc vào
 loại vi sinh vật:

o Vi khuẩn lactic: 30-37°C.

o Nấm men: 25-30°C.

 Thời gian ủ: 24-48 giờ hoặc lâu hơn nếu cần.

Tuần 2 Đếm mật độ vsv của SCOBY bằng buồng đếm hồng cấu ( Buống đếm Nước cất - Kính hiển vi
(thứ 3,6) Neubauer) - Buồng đếm Neubauer
- Bước 1: Pha loãng mẫu bằng nước cất với các nồng độ: 10 -1, 10- - Lamen
2
, 10-3… - Pipet Pasteur
- Bước 2: Rửa sạch: - Ống nghiệm
+ Buồng đếm với nước cất, lau khô với giấy và tránh làm trầy xước.
+ Lamen với cồn, lau khô với giấy và tránh làm trầy xước.
- Bước 3: Đậy lamen lên buồng đếm sao cho lamen nằm giữa.
- Bước 4: Lắc đều ống nghiệm pha loãng mẫu. Nhỏ dung dịch
mẫu vào hai đầu lamen cho đến khi dung dịch mẫu dàn đều
trong buồng đếm, dùng giấy lau nhẹ phần dung dịch thừa dính
trên lamen.
- Bước 5: Đặt lên bàn soi dưới kính hiển vi.
- Bước 6: Điều chỉnh vị trí buồng đếm trên kính.
- Bước 7: Dùng lần lượt ống kính để thấy rõ tế bào vsv.
- Bước 9: Căn chỉnh vị trí buồng đếm sao cho thấy rõ ô trung tâm
của block trung tâm bao gồm 16 ô nhỏ.
- Bước 10: Mật độ tế bào:
+ Nếu mật độ tế bào quá nhiều, dày đặc và không thể đếm được:
 dùng mẫu pha loãng có nồng độ thấp hơn.
+ Nếu mật độ tế bào quá ít: dùng mẫu pha loãng có nồng độ cao
hơn.
+ Số tế bào hiện diện ở ô trung tâm nếu đếm được từ 5 – 10 tế bào:
thích hợp.
+ Đếm theo hình zigzag và tính tổng số nấm men ta quan sát được.
Mật độ vsv được tính theo công thức:
N
Mật độ nấm men = −6 (CFU/mL)
4. 10 . D

Trong đó D : hệ số pha loãng

N : tổng số lượng vsv đếm được trong 1 ô
4.10-6 : là thể tích của mỗi ô trong 25 ô nhỏ của block
trung tâm

Tuần 3 Đo pH của Scoby: - Máy đo pH

(thứ 3,6) - Chuẩn bị mẫu gồm 50ml hoặc 50g sản phẩm.

- Cho 50ml vào becher 250ml sau đó rửa điện cực và dùng giấy lau khô
điện cực trước khi đo mẫu.

-Lắc đều mẫu rồi nhúng nhẹ điện cực và khoáy nhẹ để đảm bảo sự đồng
nhất, tiếp tục điều chỉnh khi được pH khoảng 4.0 đến 4.5.

Xác định độ chua của Scoby:

- Lắc đều dịch mẫu.
- Dùng Pippette hút 10ml từ dịch mẫu, chuyển vào Erlen 50ml. - NaOH 0,1N - Erlen 50ml
- Thêm 10ml nước cất và chuẩn độ bằng dung dịch NaOH 0,1N với chỉ thị - Phenolphthalein - Burette
Phenolphthalein. - Pippette
- Dung dịch NaOH 0,1N được cho vào Burette 25ml. - Ống hút cao su
VNaOH x 100
ĐộT =
10

Trong đó:
- Độ chua được xác định bằng độ Tecne ( Độ T)
- 10 là chỉ số ml từ dịch mẫu
- VNaOH chỉ số chuyển màu