A SZENT ISTVN AKADMIA SZKFOGLAL ELADSAI j folyam Szerkeszti: STIRLING JNOS OESSH ftitkr KELLERMAYER MIKLS AZ L SEJT

Elhangzott a Pzmny Pter Katolikus Egyetem Jog- s llamtudomnyi Karnak Dsztermben 2008. mrcius 28-n (Az elhangzott elads bvtett, szerkesztett vltozata)

Budapest 2009.

KELLERMAYER MIKLS AZ L SEJT

Lehet egybe rni s kln is. Nyelvtanilag mindkett helyes. A szkfoglal eladsom brin s itt, annak rsos szvegben, az l sejt kln rt vltozatt hasznlom. Teszem ezt azrt, mert gy a lnyeg, az let, ami a 45 ves kutat munkm egyetlen igaz, kvetkezetes krdse, taln megfelelbb, taln fokozottabb hangslyt kap. Sejt, amelyik l, amelyik mg nincs sztszedve, amelyik mg nincs fixl szerekkel megbntva volt s van megszakts nlkl a gondolataim elterben. Akkor is, ha a ksrletek vgzsekor magam is arra knyszerltem, hogy megljem, hogy fixl szerekkel szerkezeti vizsglatra alkalmass tegyem, hogy megfessem, hogy molekulris sszettelk megismershez sztszedjem, gondolatban azonban mindenkor megbonthatatlan egysgben tartottam ket. gy emlkszem 45 ves kutat plym sorn tartsan soha nem estem abba a hibba, st taln gy kellene fogalmaznom: abba a bnbe, amibe sajnos a sejtbiolgia, a sejtlettan, vagy ltalnosabban az egsz lettudomny f ramlata szinte a kezdetektl egyre inkbb belesodrdott, az n. sszeraksdiba. Br l sejtet lettelen molekulkbl, lettelen sszetevkbl soha senki nem tudott ltrehozni, st elpusztult sejtet se tudott soha senki jra lv vltoztatni, feledve ezt a tnyt, elmletben egyre inkbb ez trtnt s trtnik. Ma gy is lehetne fogalmazni, hogy az l sejtek elmletbeli sszeraksa maga a modern lettudomny. Ma azt kell megllaptani, hogy az lettudomny, a sejtbiolgia, a sejtlettan a lnyeget, az letet illeten, valamifle sszeraksdi kpzeletvilg. Tnynek, feltrt igazsgnak elfogadott elmletek, hipotzisek kavalkdja.

Nyilvnvalan ebbl fakad, hogy ma az lettudomny, a sejtbiolgia, a sejtlettan keretben nem krdezik, nem illik krdezni a legfontosabbat, azt, hogy mi az let? (what is life?), mi az lv szervezds lnyege?, mi az anyag l llapota?(what is the living state?). Aki mgis kitart ennek a leglnyegibb krdsnek a krdezsben, aki valjban csak ezt krdezi, ezt kutatja, kirekesztsre, mondjuk ki nyltan, mrtr sorsra szmthat. Az lettudomnynak tbb ilyen mrtrja is van. rdemes lenne a legkiemelkedbbeket mind felsorolni. Itt azonban, a tr- s idhiny miatt csak egyet, a legkivlbb magyar lettan tudst, Szent-Gyrgyi Albertet emltem. A Nobel-dj, amit fiatal korban a C-vitaminrt kapott, nem mentette meg, hogy lete vgn be ne zrjk a laboratriumt. Neve alatt dollr millikat, st millirdokat gyjtttek a rkkutatsra, mgis 1986. szeptember 30-n bezrtk a laboratriumt az Amerikai Egyeslt llamokban, a Woods Hole-i Tengerbiolgiai Intzetben. Hrom htre r, 1986. oktber 22-n megllt a szve dobogni. Igaz, 93 ves volt ekkor, mgis a halla hirtelen jtt, vratlan volt, egyrtelmen okozati kapcsolatba hozhat a kegyetlen, igazsgtalan tettel, laboratriumnak bezrsval. Megbntettk, mert letnek utols harmadban visszatrt a leglnyegibb krdshez, a what is life?, a mi az let krdshez. Azt hangoztatta, akkor kerlnk kzelebb a rk gygytshoz, ha jobban megismerjk az lv szervezds lnyegt. Amikor arrl faggattk, hogy mirt nem rja le, mit fog tallni, vagyis mirt nem r plyzatokat, s leginkbb, mirt nem r kzlemnyeket, csak makacsul azt ismtelgette, kzelednk a rk lnyegnek megismershez, a rkos betegek gygythatsghoz. Amikor a hatalmasok, a pnzelosztk trelme vgkpp elfogyott, s kiknyszertettk belle a vlaszt, hogy mgis, mire alapozza, hogy a kutatsai alapjn azt mondhatja, kzelednk a rk gygythatsghoz, szemkbe nzett s ezt mondta: Azrt, mert kezdem rteni mirt barnul meg a megsebzett alma, s mirt nem az p. A mi az let? What is life: krdsre pedig a hress vlt mondsval egyszeren csak gy vlaszolt: The

life is water dancing to the tune of solids (Az let a vz tnca a szilrd dallamra). A bntets termszetesen nem maradt el, pedig letnek ebben az utols harmadban, amikor mr csak a mi az let? krdshez ragaszkodott, egy egszen j vilgot, az elnevezsben, a szubmolekulris biolgit (amit, ma sem tudunk mg igazn felfogni) kezdett letre kelteni. (Mindezeket rszben Ralph W. Moss: Free Radical-Albert Szent Gyrgyi and the Battle over Vitamin C, Paragon House Publ., New York, 1988. knyvbl lehet megtudni ami magyar fordtsban Szent-Gyrgyi Albert cmmel 2004-ben a Typotex, Budapest kiadnl jelent meg, ill. szemlyes kzlsknt Peter Gascoyne-tl, utols munkatrstl hallottam 1987. nyarn, Houstonban.) (1, 2, 3, 4) A sejtbiolgia, a sejtlettan, ltalnosabban az lettudomny az egyik legfiatalabb tudomny. Teljes egyetrts van abban, hogy az lvilggal kapcsolatos kutatsok, felismersek a tudomny rangot a sejtek felismersvel rtk el. Pontosabban fogalmazva, azzal a felismerssel, hogy minden llny sejtekbl pl fel. Hogy a sejt az lvilg tovbb nem oszthat egysge. Vagyis a fldi let nem ms, mint az l sejtek ltvilga. Vannak egyetlen sejtbl ll llnyek, ezek az egysejtek s vannak a tbbsejt, a soksejt llnyek. A sejtek s a hozzjuk tartoz elemi ismeretek felfedezst kt termszettudshoz, Matthias Jacob Schleidenhez (1804-1881) s Theodor Schwannhoz (1810-1882), az munkssgukhoz kapcsoljuk. (5, 6, 7, 8, 9) Ez termszetesen teljessggel nem helyes! Sohasem helyes ugyanis egy j ismeretvilgot egyetlen szemlyhez, vagy akr nhnyhoz rendelni. Egy-egy felfedezst termszetesen mindig egyetlen kutat tesz, de a paradigma vltsnak, az j ismeretvilgnak, az j tudomnynak mindig sok-sok szereplje, ltrejttnek elzmnye, trtnelme van. gy van ez az l sejtek ismeretvilgval, az lettudomnnyal is.

1. bra. Matthias Jacob Schleiden (1804-1881) a botanika professzora Jenban s Frankfurtban. Theodor Schwann (1810-1882) krboncnok Berlinben, majd az anatmia s lettan professzora Louvain-ban s Liege-ben. Trsszerzk a Beitrage fr Phytogenese folyiratnl, ahol a sejt elmletket kzz tettk (Forrs: H. Hillman and P. Sartory: The Living Cell, Packard Publish., 1980.) (5)

Kezdve azzal, hogy maga a nv, sejt, cell sem Schleidentl s Schwanntl szrmazik, hanem Robert Hooktl. Ezt a tnyt Joseph G. Gall nagyon szp kpes sszelltsbl vett idzettel s kppel kvnom bizonytani. (Joseph G. Gall: A Pictorial History-Views of the Cell The American Society for Cell Biology, 1996., p. 10.) (10)

2. bra. Az idzet els mondata magyar fordtsban: Robert Hooke hasznlta a sejt, cell szt azoknak a kis cellknak, vagy prusoknak lersra, amelyeket parafa vkony metszeteiben ltott mikroszkpjval.

3. bra. Ez Hook hres rajza, amit parafa metszeteinek mikroszkpos vizsglatai alapjn ksztett, s amely a Royal Society of London gisze alatt, 1665-ben kiadott, Micrographia cm knyvben jelent meg. (Megj.: A sejtek, cells, amelyeket a parafa metszetekben ltott termszetesen csak a cellulz falak, amelyek kzl az l sejtek mr rgen eltntek.)

Az l sejtek eredetre vonatkoz, ma is rvnyes felismerst, tnymegllaptst, a hres nmet krboncnok professzornak, Rudolf Ludwig Virchow-nak (1821-1912) tulajdontjuk. A megllaptsa gy hangzik: Omnis cellule e cellula. l sejt csak l sejtbl keletkezik! Ez a tny ktelezen elvezet az els egyetlen sejthez, a legsibb ssejthez, a minden l kzs shez. De valjban volt-e ilyen els l sejt, legsibb ssejt? Krdeznnk, taln krdezzk is

jra, meg jra flnken, vagy hatrozottan. A vlasz viszont egyrtelm. Volt! Kellett lenni. ppen a kutatsok, az llnyek kutatsa, az igaz megfigyelsek miatt egyrtelm a vlasz. Volt els, mert az let kt alapvet, az lettelen vilgtl eltr, lnyegi tulajdonsga, hogy folytonos s vltozkony. Ez az egyszeri kezdetre mutat r. gy is fogalmazhatunk, hogy bizonytja azt. Folytonossg ugyanis csak ismtld jdonkpzdssel, nreprodukcival s rkvetkez oszlssal valsulhat meg. Ezrt kellett lenni s volt is egy, egyetlen els, amely gy klnlt el a krnyezettl, a vztl, hogy kzben jra termelte sajt sszetevit, azaz nmagt s utna oszlani kezdett. Valami klns okbl, felfoghatatlan knyszerbl kifolylag ez az jdonkpzds s oszls megszakts nlkl folyik immr 4 millird ve itt a Fldn. Ady szavaival: Az let szent okokbl lni akar.(11) Az l sejteknek a legklnbzbb vltozatban ez a 4 millird ves folytonos ltezse az egyike annak a valaminek, amit LET fogalommal jellnk. A tny, hogy az els llny, az els l sejt nreprodukcija, majd oszlsa volt a kezdet, egyben azt is jelenti, hogy az let, az lvilg lte trsas ltezs, mert az els oszls utn mr legalbb kett volt, s utna egyre tbb s tbb. Teht az let trsas ltezs, mg pedig nszablyoz trsas ltezs. A rendelkezsre ll lettrben az l egyedek szma vissza szablyozza a szaporods mrtkt. Ez az llnyek ltezsnek egyik alap trvnye. Az jdonkpzds, az nreprodukci s az oszls folytonossgnak megtartsa mellett, ahogy mr leszgeztk a vltozkonysg az let msodik lnyegi jellemzje. Visszatekintve a 4 millird vre egyet ktsgtelenl meg kell llaptani, hogy a vltozkonysgnak irnyultsga volt. Elttnk, az szlelni kpes, taln 200-300 ezer ves llny, az ember eltt az eredmny, a sokszn lvilg trulkozik fel. Vagyis mi lthatjuk, felfoghatjuk, megrthetjk, hogy a csodlatos lvilg ltrejtte volt maga a cl. Az eredmny, a vltozatossg, az lvilg sokflesge, idegen szval a biodiverzits valban elkprztat. Nehz elfogadnunk, de

mgis kell, hogy az lvilg soksznsge, a biodiverzits a legmagasabb fokon akkor lehetett, amikor kzlnk az els, gy 200-300 ezer vvel, vagy akr 2-4 milli vvel ezeltt ide, a Fldre rkezett. Az ember, ha nem is a kezdetektl, de mr j ideje kpes, akr elre tervezetten is mdostani az llnyeket, gy elvileg gazdagabb, szebb is tehette volna az lvilgot, mgis sszessgben a gondatlansga, vagy mg inkbb a kapzsisga s nimdata miatt, inkbb lerontotta, mra mr tragikus mrtkben lerontotta az lvilg soksznsgt, a biodiverzitst. Ezzel viszont rtott, folytonosan rt. Teljes bizonyossggal rt! Elsdlegesen nmagnak, utdainak, de elvontan az egsz vilg, tle fggetlen rtkvilgba is rontst hozott. Ami nem ms, mint bn! Struktrv vlt bn, bnben ls, rtkvlsg, az egsz lvilgra kiterjed letellenes diktatra, letellenes zsarnoksg. Zsarnoksg, amelyre teljessggel rvnyes: Illys Gyula: Egy mondat a zsarnoksgrl cm verse ill. a vers idzete: hol zsarnoksg van, mindenki szem a lncban; belled bzlik rad, magad is zsarnoksg vagy; Az lvilg 4 millird ves folytonossga s vltozkonysga valami egsz klnset eredmnyezett. Lakhatv tette a Fldet szmunkra, emberek szmra. Lett atmoszfra, leveg rteg a Fld kzvetlen felsznn, alacsony CO2-vel s 21% oxignnel. Felette vd zonpajzs a Napbl s mshonnan a vilgrbl rkez rvid hullmhossz, szmunkra rtalmas elektromgneses sugarak kiszrsre. A Fld felsznn s a felszni rtegeiben lett des vz. Az idjrs kedvezen szablyozott vlt. Igen, az lvilg alaktotta a Fldet szmunkra lakhat helly, den-kertt. Mindez azt jelenti, ahogy mr korbban leszgeztk, hogy a vltozsoknak valban clja, valban irnya volt. Sokan szeretnk, s tudomnyosnak is vlik, az els l sejt ltrejttt s belle az

10

eltelt 4 millird v alatt, az lvilg ltrejttt vletlennek, sorozatos vletlennek tartani. Ez persze azt jelenten, hogy irnya lenne a vletlennek, a vletleneknek. Clirnyos vletlen, clirnyos vletlen sorozat persze nevetsges abszurdits, nellentmonds. sszegezve, teht az els llnytl, az nmagt reproduklni, oszlani s vltozni kpes llnytl, a legsibb ssejttl, Darwin elnevezsben a progenitortl a vltozsok clirnyossgt senki nem tagadhatja. St, ma mindenkinek lnyegileg kell tudnia, megrtenie, felfognia fggsgnket az lvilgtl, klnsen az rintetlen erdktl, az serdktl. Az rts, az lvilg ltalunk okozott megsebzettsge oly nagy, az id viszont, ameddig mg gygytani lehet, oly rvid, hogy ma kslekeds nlkl mindenkinek az lvilg gygytsn kell gondolkodni, munklkodni. Teht vltozs kell az emberisg letvitelben, a kizskmnyol letvitelrl a gygyti letvitelre vlts nlkl ugyanis, ppen az lvilgban okozott puszttsok miatt, mr ebben az vszzadban lakhatatlann tehetjk a Fldet nmagunk szmra. Ugyanis be kell ltnunk esendsgnket, be kell ltnunk, hogy mi emberek az l fk, a virul, zldell erdsgek eltartottjai vagyunk! Itt a fldi ltnkben ez a rnk, emberekre vonatkoz egyik legalapvetbb igazsg. A jelentsge miatt fontos ismtelni, hogy volt kezdete az letnek, volt egyetlen l s. Hvhatjuk legsibb ssejtnek is azt az llnyt, amelyik elkezdte nmagt jdonkpezni, majd oszlani. Olyanokk oszlani, amelyek tovbbra is megriztk jdonkpzdsi s oszlsi kpessgket, de kzben vltozni is kpesek voltak. A nagy krds, amit a jelenben l sejtek vizsglatakor feltesznk s szeretnnk a legigazabbul megvlaszolni, hogy mi volt, ill. mi az az anyagi szervezds, ami kzs, ami 4 millird ve folytonos. Hiszen az let egyszerre jelenti a folytonossgot s a vltozkonysgot, s mindkett htterben anyagot, atomokat, molekulkat kell ltnunk, amelyekre az anyagi vilg trvnyei teljes bizonyossggal ugyangy rvnyesek, mint az lettelen vilgban.

11

Ha a ma hasznlt tanknyveket, kziknyveket, s a ma megjelen tudomnyos kzlemnyeket ezen krds megvlaszolsa cljbl tanulmnyozzuk, elkerlhetetlenl arra a kvetkeztetsre jutunk, st ktsgtelenl az a cljuk, hogy felttlenl arra jussunk, hogy a sejtfelszni membrn a kzs az els sejttl minden sejtben. A sejtfelszni membrn az, ami az els sejttl kezdve elklnti az l sejtet a krnyez kzegtl, a szabad vztl, a sejteket krlvev vizes oldattl. A modern tanknyvekbl s a kzlemnyek risi radatbl szinte ktelez azt kiolvasni, hogy a sejtfelszni membrn a felttelezett, hipotetikus pumpival s csatornival biztostja a bels vztr, a bels szabad oldat (cytosol) sszettelnek eltrst a kls vizes oldat sszetteltl. (5, 6, 7, 8, 9) Vagyis a sejtfelszni membrn biztostan az l sejtek legalapvetbb sajtossgt, nevezetesen azt, hogy nem olddnak fel az ket krlvev vzben, hogy sszettelk, br legtmegesebb sszetevjk a vz, eltr a krlttk lv vizes kzeg sszetteltl. Vagyis az elmlt vtizedekben megjelent knyvek, kzlemnyek azt sugalljk, hogy az l sejtek leglnyegibb eleme, ami magt az lv szervezdst is jelenti, a sejtfelszni membrn. A tudomnyos kzlemnyek s knyvek sokasgnak zenett gy is lehetne ma sszegezni, hogy az l sejtek, az llnyek soksznsgt a genetikai anyag, a DNS, RNS s az ltaluk meghatrozott (kdolt) fehrjk adjk, de a lnyeg, az let maga a membrnban van. Ha mlyen belegondolunk valahogy a sejttan is, ahogy az Schleiden s Schwann megllaptsaibl elindult a tbb, mint 150 ves tjra, a membrnra ptett. Ami teljesggel helytelen. A membrnra ptett sejttan, lettan ugyanis egyrtelmen rossz, hamis irnyba vitte az lettudomnyt, hiszen a tny, tny, rk igazsg: Az l sejt nem egy membrnnal krlvett szabad oldat rendszer, amelyben a szabadon oldott molekulk szabadon diffundlva keresglik egymst! (12-15) Ha alaposabban megvizsgljuk a kezdetet, Schwann megfogalmazsban a sejt membrnnal hatrolt folyadkkal telt reg. Robert Hook kpei is, br ezek a nvnyi sejtekre

12

jellemz sejtfalat mutatjk, a membrnnal krlvett folyadkkal teli reg tves nzetet tmogattk, indtottk tjra. A sejttan 150 ves trtnete sorn az egyes sejteket bort membrnokrl kzlt tudomnyos cikkek radata s a tbb, mint 10 Nobel-dj, amelyet a membrnhoz rendelt elmletekrt adtak, sokkal kzelebb llnak a miszticizmushoz, mint a valsghoz, az igazsghoz. Nevek, elmletek, hipotzisek kavalkdja. Ez az llts akkor is igaz, ha a fram tudomnyban a nevek, az elmletek tnyknt vannak elfogadva, hirdetve, tantva. A sejtfelszni membrnokra vonatkoz kzlemnyek sokasga mellett, alig lehet megtallni azokat a kzlemnyeket, kutatsi eredmnyeket, amelyek a kezdetektl, azaz 150-180 ve mindig is voltak, s amelyek nem a membrnban fedezik fel azt az anyagi szervezdst, ami az elstl, teht 4 millird ve minden sejtre jellemz. (12-20) Ez a kzs lnyegi, anyagi szervezds nem a membrn, hanem az egsz, az lv szervezdtt anyag, a vz s a fehrjk, a vz s a makromolekulk, dinamikus kzs rendszere, a protoplazma! Az els lerja valsznleg Felix Dujardin, aki 1835-ben sarcode-nak, l zselnek nevezte. Maga a protoplazma elnevezs Hugo von Mohltl (1846), illetve Jan E. Purkinjetl (1840) szrmazik. A protoplazma valjban az aminosavak polimerje, vagyis a fehrje a hozz szorosan ktd vzmolekulk s bizonyos ionok, fleg K+ ionok s ms molekulk egyttes komplexuma. Albert Frey-Wyssling (1900-1968) az 1953-ban kiadott, Submicroscopic morphology of protoplasm cm mvnek 178. oldaln (13) ezt rja: The physical properties, fluidity, plasticity and elasticity of cytoplams must be attributed to the character of the junctions between submicroscopic particles. The more these are dissolved, the more liquid the cytoplasm becomes. However, the junctions must never all be weakened at the same time. In others words, the cytoplasm must never become a true sol in which all particles can move freely. Certain bonds are always

13

preserved and these cause the elastic properties. The dissolution of all junctions would result in the death of the cytoplasm by liquefaction. (Magyar fordtsban: A citoplazma (protoplazma tlem) fizikai tulajdonsgai, a folykonysg, a plasztikussg s a rugalmassg a szubmikroszkpikus rszecskk (makromolekulk tlem) kzti kapcsolatokbl ered. Minl inkbb sztszakadnak ezek a kapcsolatok a citoplazma annl inkbb elfolysodik. Az sszes kapcsolds azonban soha nem szakadhat meg. Ms szval a citoplazma soha sem vlhat valdi oldatt, olyann, ahol a rszecskk (makromolekulk tlem) szabadon mozoghatnnak. Az sszes kapcsolat megszakadsa valdi oldatt folyadkk vls ltal a citoplazma hallt jelenten). Ma a protoplazma elmlet legkiemelkedbb l kpviselje Gilbert Ling. (15, 18-20) Szerinte s a sajt kutatsaim alapjn szerintem is, az let kzponti szereplje az aminosavak polimerjei, a fehrjk, amelyeknek szerinte is s szerintem is 3 llapotuk van, s amelyek dinamikusan vltoz, de lland kapcsolatban vannak egymssal, a vz molekulkkal s ms molekulkkal, ionokkal is. gy is lehetne mondani, hogy az l sejten bell a sajtos llapotban (l llapotban) lv fehrjk dinamikusan vltoz hlzatot alkotnak. Gilbert Ling az egymssal dinamikusan kapcsold fehrjk 3 llapotra: nyugalmi, aktv s halott elnevezst hasznlja. n a 3 llapotot inkbb gy szeretem nevezni: l, natv s denaturlt. (14, 21, 22) Ami szmomra a fontos, hogy sajt kutatsi eredmnyeim egyszerre vannak sszhangban Gilbert Ling felfedezseivel s Szent-Gyrgyi Albert letnek utols harmadban tett kijelentseivel, vagyis az l sejteken bell a fehrjkre ms kapcsoldsi (asszocicis) s ms fizikai, kmiai, s leginkbb energetikai tulajdonsgok jellemzk, mint a sejtekbl kikerlt vagy kivett, egymstl elvlasztott, azaz oldatba vitt fehrjkre. Hogyan, mikor, hol s mirt jtt ltre az els l sejt? Szeretnnk krdezni, szeretnnk ezekre a krdsekre, mindegyikre, cfolhatatlan, igaz, egzakt, tudomnyos vlaszt adni, kapni. De nem tudunk! Elszr is azrt nem, mert nem

14

tudunk idben oda vissza menni. Msrszt azrt, mert ha a vizsgldsunk azt bizonytja, hogy egyszer, egyetlen formban jtt ltre az els l sejt, a megismtelt ltrehozsa eleve kizrt. Elmleteket gyrtani az egyetlen kzs s, a legsibb ssejt ltrejtthez s prhuzamosan a trvnyhez, amely az egsz lvilg belle val kibontakozst irnytotta, termszetesen lehet. Az ember lnyege, szabadsga, szabad fogalomalkotkpessge ad r lehetsget. Ugyanakkor meglehetsen leleplez, valamifle istent-jtsz tett ez. Semmikpp se lehet, lehetne tudomnyosnak nevezni. Mgis a tanknyvek, s ltalnossgban az elfogadott (established), anyagilag tmogatott, fram tudomny szintjn ppen ez a szomor valsg. A problma az egyes elmletekkel az, hogy a vletlent istentik, mintha lehetne irnytott vletlen. Ugyanis brmikor keletkezett is az els egyetlen sejt, a legsibb ssejt, egy jabb ltrejttnek a valsznsge a kezdettl eltelt vmillirdok sorn, ahogy az elhullsuk utn mr szerves makromolekulk, nukleinsavak s fehrjk is voltak a vizekben egyre ntt. St, ez a valsznsg mg tovbb fokozdott, szinte korltlann vlt mra a kutatatk laborjban. Hiszen itt az l sejtek szes alkotja rendelkezsre llhat, mgsem sikerlt soha senkinek, jllehet nyilvnvalan mindig prbltk, l sejtet lettelen molekulkbl, sejtalkotkbl ltrehozni. rdemes jra azt is leszgezni, hogy elhalt sejtet se sikerlt soha senkinek jra lv tenni. Teht az igazsg, az rk igazsg az, hogy az els l sejt ltrejtte s a terv, a trvny, ami az ebbl az els l sejtbl val kibontakozst, az lvilg kifejldst, megvalsulst vezrelte, a tudomny eszkzeivel, a tudomny kvetelmnye (kritriuma) szerint, soha nem ismerhet meg! Az els l sejt ltrejtte s belle az lvilg kibontakozsa, megvalsulsa teht rk titok, misztrium. A tudomny szmra is az! Az, hogy 4 millird vvel ezeltt egyszer egyetlen l sejt, a minden l kzs se, a legsibb ssejt ltrejtt s utna soha-soha egyetlen se, magtl se s ember ltal se, kizrja azt az ismtelten megjelen hamis, flrevezet, tudomnytalan gondolkodst, ami azt sugallja, hogy ott, ahol

15

vz van elbb, utbb szksgszeren megjelenik az let. Nem! Az let egyszer, egyetlen formban, szervezdsben indult el. Azrt olyan fontos ennek az igazsgnak az elfogadsa s hirdetse, mert csak ennek elfogadsa szabadthatja meg az lettudomnyt a hamis elmletek kavalkdjtl, a tudomny vilgba bekltztt tves, hamis dogmktl, blvnyoktl (pl. a molekulris evolci vagy a membrn-pumpa szabad oldat hipotzistl is). Csak a kezdet s a 4 millird ves kibontakozst, megvalsulst (ha gy akarjuk nevezni, az evolcit) vezrl trvny soha meg nem ismerhetsgnek elfogadsa adhatja vissza az lettudomny igazsgt s szabadsgt, vagyis az lettudomny tudomnyossgt. Azt, hogy volt els egyetlen l sejt, a minden l kzs se, ma mr ppen a tudomnyos felfedezsek miatt, nem lehet tagadni. Nagyon rdekes, hogyan szerepel ez a tny az egyik legkzkedveltebb sejtbiolgiai kziknyvben, a Geoffrey M. Cooper and Robert E. Hausman: The Cell A Molecular Approach 3rd ed., ASM Press, Washington, 2004., 4. oldaln. (23)

16

The Origin and Evolution of Cells Cells are divided into two main classes, initially defined by whether they contain a nucleus. Prokaryotic cells (bacteria) lack a nuclear envelope; eukaryotic cells have a nucleus in which the genetic material is separated from the cytoplasm. Prokaryotic cells are generally smaller and simpler than eukaryotic cells; in addition to the absence of a nucleus, their genomes are less complex and they do not contain cytoplasmic organelles or a cytoskeleton (Table 1.1). In spite of these differences, the same basic molecular mechanisms govern the lives of both prokaryotes and eukaryotes, indicating that all present-day cells are descended from a single primordial ancestor. How did this first cell develop? And how did the complexity and diversity exhibited by present-day cells evolve? The First Cell It appears that life first emerged at least 3.8 billion years ago, approximately 750 million years after Earth was formed (Figure 1.1). How life originated and how the first cell came into being are matters of speculation, since these events cannot be reproduced in the laboratory. Nonetheless, several types of experiments provide important evidence bearing on some steps of the process.
4. bra. Az alhzott mondatok magyar fordtsa: az sszes ma l sejt leszrmazottja az els egyetlen snek. Hogyan jtt ltre ez az els sejt? s hogyan alakult ki az az sszetettsg s soksznsg, amit a ma az l sejtek kpviselnek? gy tnik, hogy az let 3,8 millird vvel ezeltt kezddtt, megkzeltleg 750 milli vvel azutn, hogy a Fld (a Naprendszer megjegyzs tlem) kiformldott. Hogy jtt ltre az let, hogy jtt ltre az els l sejt csak a spekulcik trgya lehet, mivel ezeket az esemnyeket a laboratriumban nem lehet reproduklni, megismtelni.

Ugyancsak nagyon figyelemre mlt Richard Dawkinsnak, a ma l legismertebb, leghresebb neodarwinistnak a megllaptsa az els egyetlen l sejtrl, a minden l kzs srl, a legsibb ssejtrl. (24) Br a knyve, a River out of Eden, amelyet fordtsban: Folyam az

17

denkertbl cmen 1995-ben magyarul is kiadtak, msrl szl, ms az zenete, a 20. oldalon, a 12. sorban mgis ez ll: Minden fldi llny egyetlen kzs stl szrmazik, ehhez nem frhet ktsg. Egyetlentl, amely ksrletileg nem megismtelhet, nem modellezhet, amelyen mrseket vgezni nem lehet. Teht a tudomny szmra, a tudomny eszkzeivel, soha nem ismerhet meg. Ez, ennek kell lenni az lettudomny szilrd, legszilrdabb alapjnak, kiindulsi pontjnak. Nem tehetett mst, ezt a tnyt, br elrejtve, knyszeredetten Richard Dawkinsnak is el kellett ismerni. Nagyon fontos, a sejtbiolgia, st az egsz lettudomny szempontjbl meghatroz jelentsg Charles Darwin vlekedse az lvilg eredetrl, az els egyetlen l sejtrl, a legsibb ssejtrl. (25, 26, 27) Az 1859-ben elszr kiadott, majd ltala mg tszr trt s kzztett A fajok eredete cm f mvben az utols oldalon (magyar fordtsban) szrl, szra ezt rja: Nagyszersg van abban a felfogsban, amely szerint a Teremt az letet a maga klnbz erivel eredetileg csak nhny, vagy csak egyetlen formba lehelte bele; s mialatt a bolygnk a nehzkeds megmsthatatlan trvnye szerint keringett, ebbl az egyszer kezdetbl vgtelen sok szpsges s csodlatos forma bontakozott ki s bontakozik ki most is. Az egyetlen kzs st, ami nyilvnvalan az els l sejtet, a legsibb ssejtet jelenti, Darwin progenitornak nevezi. Ennek ltrejttrl nem azt mondja, amit minden termszettudsnak, akr akarja, akr nem, mondania kell, ppen azrt, mert ksrletileg nem ismtelhet meg, hogy a tudomny szmra pont ez a keletkezs s a kibontakozst vezrl trvny eredete, soha nem ismerhet meg, hanem azt, hogy az els l sejtet, a progenitort s a kibontakozst, belle az egsz lvilg ltrejttt irnyt megmsthatatlan trvnyt, a Teremet Isten teremtette. Ugyanakkor Darwin hatrozottan szembe szll azokkal, akik a Biblit, az idejben s valjban brmikor termszettudomnyos mnek tekintik, hirdetik. Az let keletkezsnl, az els l sejt, a progenitor ltrejttnl s a

18

kibontakozst vezrl trvny megalkotsnl Darwin nem tagadja a teremtst, a Teremt Istent. Ellenkezleg kinyilvntja, hogy a Teremt teremtette az els l sejtet, az elnevezsben a progenitort s a belle megvalsult kibontakozst, vagyis az lvilg ltrejttt vezrl trvnyt, de a sok, sok llnyt nem gy fajai szerint, ahogy azt az ember brmikor szlelheti (az idejben is s most is), hanem egyetlen egybe. Ez Darwin felfedezse! Dbbenetesen nagyszer felismers ez! Ezrt a felismersrt mltn lehet, st kell Darwint az lettudomny legnagyobb, legmeghatrozbb szemlyisgnek tekinteni. ppen az igazsg miatt, ami az igaz tudomny lnyege, ismtelten le kell szgezni, hogy A fajok eredete fmvben Darwin nem beszl evolcirl, meg sem emlti ezt a fogalmat, hanem kibontakozsrl, teremti terv megvalsulsrl szl. Az evolcit, mint fogalmat elszr az 1871-ben kiadott msodik f mvben, Az ember szrmazsa cm knyvben hasznlja. (28) Itt, ebben a msodik mvben, ami lnyegileg elmlet-, hipotzis-kavalkd, szemben az elsvel, ami dnten a sajt kutatsaira ptett tudomnyos m, fleg az emberrel foglalkozik. Azt a tves kiindulsi pontot kveti, hogy az egyes emberek, pont gy, ahogy a tbbi ms egyedi llny, fajba sorolhatk. Ezen nzet szerint az egyes emberek, mint minden ms egyedi llny faj keretben, fajhoz tartozs ktelez parancsa alatt lnek. Darwinnak tves ez a feltevse s a kortrsainak, valamint a ksbbi kvetinek is az az elmlete, hogy a tbbi ms egyedi llnnyel egyezen, az egyes embereknek is van ktelez faji ltkerete, tves. Nincs! Egyltaln nincs! Minden ember Darwin eltt is tudta, s ma is tudja, de maga Darwin is tudta, hogy az egyes embereknek, szemben minden ms llnnyel, nincs ktelez rvny faji ltkerete. Az ember ugyanis szabad! Az ember (minden egyes ember) az egyedli ltez az anyagi vilgmindensgben, aki fel van szabadtva a termszeti trvny, jelesl a fajhoz ktttsg ktelez trvnye, parancsa all. Az persze ktsgtelen, hogy az ember (minden egyes ember) is llny. Teht egyedi, mint minden llny, de egyedisgben, egyedlien felszabadtott

19

a trvny automatikus parancsa all. Ezrt mondjuk, hogy az ember szemly, olyan llny, akinek a lthez, az egyedisghez, az egyedi felszabadtottsghoz titok, misztrium tartozik. A tbbi ms egyedi llnyhez kln, kln nem tartozik titok. De, a fontossga miatt ismtelten megllaptjuk, hogy soha meg nem ismerhetsgi hatr tartozik az els l sejt, a progenitor ltrejtthez s a trvnyhez, ami a kibontakozst, az egyetlenbl, az lvilg megvalsulst, ltrejttt vezrelte, irnytotta. Jelentsge miatt hangslyosan ismtelni kell a rnk, emberekre rvnyes legfbb igazsgot is, azt, hogy csak az emberi szemly rendelkezik a termszeti trvny automatikus rvnyeslse alli felszabadtottsggal, azaz tbblet misztriummal. A legfbb bizonytk erre az lltsra az, hogy az ember az egyedli llny, aki meg tudja lni a meg nem szletett tdait. Eszkzt tud gyrtani, hogy mg az anyamhben meglje magzatait. Akr mindegyiket! Magyarorszgon tragikus mdon vtizedek ta kt megfogant magzatbl az egyiket megljk. Ennek az igazsgnak a bvebb kifejtse azonban mr nem trgya a szkfoglalmnak, csupn azrt kerlt tnyszer megllaptsknt ide, mert minden egyes ember lete is egyetlen sejttel kezddik. Minden egyes emberi szemly letnek is van egy, egyetlen sejt, a megtermkenytett petesejt, zigta (sajt elnevezsemben: N SEJT) fzisa. Mieltt a sajt kutatsi eredmnyeim rvid sszefoglal bemutatsra rtrnk, 10 pontban felsorolom az l sejt legalapvetbb sajtossgait. Azokat, amelyek kivtel nlkl mind kellenek ahhoz, hogy egy sejt ljen. Alapigazsgok ezek, amelyek nem kapnak kell hangslyt az lettudomnyban, se a mvelsben, se a mdin keresztli terjesztsben, se a tantsban: 1. Az l sejt ltezse vzhez kttt. Az let legalapvetbb felttele a vz, ami egyben az l sejt legtmegesebb sszetevje is. Egyszerre szerkezeti elem s kzeg is. Az l sejten bell a vzmolekulk dnt hnyada makromolekulkhoz, leginkbb fehrjkhez kapcsolt.

20

2. Az l sejt dinamikusan elklnl a krnyezettl, azaz az sszettele eltr a krnyezete sszetteltl. 3. Az l sejt klnbsget tesz kt egyrtk kation a K+ s a Na+ ionok kzt. Teszi ezt gy, hogy sokszorosan tbb K+ van bent, mint kint, viszont a Na+ az l sejten kvl tmegesebb, mint bell. 4. Az let kemizmusa pp annyira szervetlen, mint szerves. 5. Az l sejt az sszes sszetevit, belertve nmagt pontosan jra termeli (reproduklja), ugyanakkor vltozsra (differencildsra) is kpes. 6. Az l sejtnek (a ma lknek) kt ris molekula (makromolekula) rendszere van. A purin s a pirimidin bzisokbl felpl polimer, a nukleinsavak s az aminosavakbl felpl polimer, a fehrjk rendszere, amelyek alapjt adjk annak, hogy az l sejteknek kt memria tra van. A nukleinsavak bzis sorrendjhez kapcsolt, un. lineris memriatr. Ez a fehrjk alapfelptettsgt, az aminosavak-sorrendjt hatrozza meg. A msodik a tr memria (spatial memory), amely a dinamikusan egymshoz kapcsolt fehrjkhez kttt, s amely az l sejteken belli reakcik tr id koordintk kzti megvalsulst vezrli. 7. Az lethez folytonos energia utnptls szksges. Az l sejtek energia-gazdlkodsa sokrt, viszont az let univerzlis energiaforrsa a Nap. 8. Az l sejtek kt f csoportba sorolhatk aszerint, hogy van vagy nincs sejtmagjuk. Az llnyeknek is kt f csoportja van, egysejtek s tbbsejtek. A tbbsejtek a maggal rendelkez sejtekbl plnek fel, de bennk szoros egyttlsben (szimbizisban) egysejtek sokasga is l. 9. Az l sejteknek (a ma lknek) lipoidokban gazdag perifris znjuk van, amelynek felptettsgre szmos elmlet szletett, s amelyet a tudomny nyelvn sejtfelszni lipoid membrnnak neveznek. Az

21

l sejtek belsejben a sejtfelsznhez hasonl lipoid gazdag znkkal (membrnokkal) elklntett szervecskk (organellumok) vannak, de vannak lipoid rteg (membrn) mentes, csupasz organellumok is. Ilyenek pl. a fehrjket jdonkpz gyrak, a riboszmk is. 10. Az egsz l sejt s az egyes sszetevi klnbz mozgsokat vgeznek. Azaz a sejtnek s a rszeinek is sajtos mechanikja van. Minden behatsra mindig az egsz sejt vlaszol, akr trendezdssel, akr mozgsllapot vltozssal, akr nagysgnak (volumennek) megvltoztatsval. sszefoglalva, az l sejt (mindegyik!) egyetlen kzs stl szrmazik s olyan programozott, fizikai, kmiai, mechanikai (dinamikusan mkd) rendszernek, specilis gpezetnek foghat fel, amelyben a vz egyszerre oldszer s egyszerre szerkezeti elem.

Vz molekula

22

5. bra. A vz molekula dipol karakter, mert benne a kt hidrogn atom asszimetrikusan kapcsoldik az oxign atomhoz. Szent-Gyrgyi Albert megfogalmazsban a vz a legklnlegesebb anyag (szubsztancia) az egsz univerzumban. (4)

bra. A peridusos rendszer els oszlopban egyms alatt

6.

23

helyezkedik el a 22.9898 atomsly ntrium (Na) s a 39.0983 atomsly klium (K). Az l sejt legalapvetbb tulajdonsga, hogy klnbsget tesz kzttk. Felhalmozza a K-ot s kiszortja magbl a Na-ot.

Technikailag az l sejtek, l szvetek vz s K, Na tartalma knnyen, pontosan meghatrozhat. Ha slymrssel meghatrozzuk centrifuglssal sszetmrtett sejtek vagy l szvet darabok slyt (nedves slyt), majd szrtssal eltvoltjuk az sszes vizet (ezt laboratriumi krlmnyek kztt knnyen el tudjuk rni), s jabb slymrssel meghatrozzuk a vztelen slyt (a szraz slyt). A kett klnbsge megadja a sejtek vztartalmt. A K s a Na meghatrozsra is rzkeny, pontos mr mdszer, a lngfotometria ll rendelkezsnkre. A kt mrt (vz tartalom s K, Na tartalom) rtket ltalban (valsznleg a tudomnyossg ltszatnak kedvrt) elosztjuk. Ettl kezdve egysgnyi (kg vagy liter) vzben lv K+-ionrl s Na+-ionrl, vagyis vizes oldat koncentrci rtkrl beszlnk. Az l sejtekre ltalban, de a soksejt llnyeket, emlsket, benne termszetesen a mi testnket felpt 1014 nagysgrend sejtekre klnsen is, az intracellulris (sejten belli) K+ = 140170mmol/kg vagy liter rtk szerepel. A sejteken bell a Na+ = 5-15 mmol/kg vagy liter koncentrci rtkek az elfogadottak. Szemben az l sejteket krlvev oldat, az un. extracellulris vz, vagy szvettenyszetek esetben a tenyszt mdium K+ = 3,5-5mmol/kg s Na+ = 135-145mmol/kg koncentrci rtkeivel. Az gy szmtott s egymssal szembe lltott koncentrci rtkek azt sugalljk, hogy kt eltr koncentrcij oldat (sejten belli s sejten kvli) klnl el egymstl, nyilvnvalan a sajtos sejtfelszni membrn ltal. Ms megfogalmazsban, a szmtott rtkek azt sugalljk, hogy az l sejtek felszni rtege (sejtfelszni membrnjuk) a K+ s Na+-ionokra s valjban minden vz oldkony ionra, molekulra egyenltlen megoszlst tart fenn az ket krlvev

24

oldattal szemben. Szmszeren 30-40-szer magasabb K+ koncentrcij oldat lenne gy bent, mint kint. Viszont 10-20szor magasabb a Na+ koncentrcija kint, mint bent. Termszetesen ez a feltevs csak akkor igaz, ha az l sejten bell a vz molekulk pont olyan fizikai-kmiai llapotban lennnek jelen, mint a sejten kvl, s mindkt vztrben (az extracellulris s az intracellulris vzben) a K+ s a Na+-ionok egyformn szabadon lennnek oldva. Itt van az l sejtekrl kialakult s ma ltalnossgban elfogadott s tantott, azaz uralkod nzet s sokak, kztk a sajt ksrleteimmel is igazolt tnyek kzti alapvet ellentmonds. A tanknyvek, a vezet folyiratokban megjelen tudomnyos kzlemnyek dnt tbbsge azt sugallja, hogy az l sejtek belsejben szabad elektrolit oldat van. A sejten belli kzeg neve, a cytosol nv is szabad sejten belli, i.e. intracellulris oldatot sugall. Azt sugallja, hogy a vz gy van jelen az l sejten bell, mint kvl, vagyis gy, mint a folykban, a tavakban, az esben, a csapvzben, vagy a ksrleti lombikokban. Tovbb azt, hogy a sejten belli K+ s Na+, egytt a belthatatlanul sok vzoldkony ionnal, molekulval a szabad intracellulris vzben szabadon van oldva. Teht a mrsi eredmnyekbl szmtott koncentrci rtkek gy a valsgot mutatjk. Ehhez az llsponthoz tartozik az a manapsg mr tnynek, tanknyvi ttelnek kezelt elmlet, felttelezs, miszerint a sejten belli s kvli oldat sszettelben mutatkoz eltrseket a sejtek felsznn lv ketts lipoid rteg membrn a klnbz csatornival s pumpival tartja fenn. Ahogy mr utaltam r, ezzel az n. tbbsgi nzettel szemben ll egy hatrozott kisebbsg. Azok, akik a sajt ksrleti megfigyelseikkel bizonytjk, hogy az l sejteken bell a vz molekulk nem szabadok, s az ionok, klnsen a K+- ionok nincsenek szabadon oldva a sejten belli vzben. Egyrtelm bizonytkok vannak arra, hogy a vz az l sejten bell nem csak, mint oldszer, hanem mint dinamikus szerkezeti elem van jelen. A vz molekulk sajtos mdon kapcsoldnak a makromolekulris rendszerekhez, klnsen a

25

specilis llapotban lv (un. l llapot living state) fehrjkhez. Tovbb azt, hogy az ionok, klnsen a K+-ionok nincsenek szabadon oldva a l sejten belli vzben, hanem rvid tvolsg (short-range) elektrosztatikus klcsnhatsban vannak a fehrjk kitntetett, un. magas elektron srsg (high electron density) helyeihez. (3, 4, 12, 13, 15, 17, 18, 19, 29) A 45 ves kutatmunkm alapjn ehhez a kisebbsghez tartozom. A Pcsi Orvostudomnyi Egyetemen a 3. ves tanulmnyaim befejezse utn, 1962. szn jelentkeztem tudomnyos dikkrsnek a Krbonctani Intzetbe. Az intzet igazgatja Romhnyi Gyrgy professzor r bolondtott meg az eladsain, a gyakorlatokon s a vizsgn feltett krdseivel, tant szavaival. Kzvetlenl Jobst Kzmr professzor rhoz, akkor adjunktushoz lettem beosztva. Itt, ezen a helyen mondok ksznetet mindkettjknek, hiszen szleim, felesgem, gyermekeim, csaldom, bartaim mellett k ketten voltak az letemet leginkbb meghatroz szemlyisgek. Az els feladatom az l sejtek magjaiban a gnek, a DNS szerkezeti sajtossgainak vizsglata volt a Romhnyi-fle precipitcis toluidinkk fests utn polarizcis mikroszkppal. Az mr tudott volt, hogy a sejtmagokbl izollt DNS fonalak intenzv ketts trst mutatnak. Ez a ketts trs jelentsen felersthet volt klnbz festkekkel, klnsen a Romhnyi-fle precipitcis toluidinkk festssel. p, intakt sejtek magjain bell viszont, a DNS mg a Romhnyi-fle festsi reakci utn sem mutatott ketts trst. Optikailag izotrp volt. Vizsglatainkat elsdlegesen egy ltalunk bevezetett mdszerrel nyert prepartumokon, fedlemezeken tenysztett egyrteg (monolayer) sejtkultrkon vgeztk. (30) Ezeken a prepartumokon a sejtek minden mechanikai behats, metszs nlkl, a legklnbzbb fixls mellett, festetlenl s fests utn kzvetlenl vizsglhatk fnymikroszkpban, interferencia mikroszkpban, polarizcis mikroszkpban s fluoreszcens mikroszkpban is.

26

15

7. bra. Egyrteg (monolayer) HeLa sejtkultra fny s polarizcis mikroszkpos felvtele. A sejteket szrtsos fixls utn a Romhnyi-fle precipitcis toluidinkk reakcival festettk. Az ssz. nagyts 800x-os. (30)

Az itt bemutatott felvtelen t, un. interfzisban lv sejt mellett kt sejt az oszls fzisban, mgpedig metafzisban lthat. Az ugyanazon lttr polarizcis mikroszkpos (keresztezett nikolok melletti l. stt httr) felvteln azt lehet megfigyelni, hogy az oszl sejtekben a kromoszmk (pontosabban a kromoszmkban a DNS filamentumok) ketts trk (fnyesek). Az interfzisban lv sejtek magjai (pontosabban a sejtmagokban a DNS filamentumok) viszont optikailag izotpok (sttek). (A citoplazmban lthat ketts trs - fnyes struktrk - htterben az RNS sajtos

27

elrendezdse ll. Ez a megfigyels nem trgya a szkfoglalnak, kln tanulmnyok rsze). Az eredeti krds az volt, hogy mirt izotrp a DNS az p, l sejtek magjn bell, mikor az izollt DNS fonalak intenzv ketts trst mutatnak. A szvettenyszeteken vgzett vizsglatainknl, az a tovbbi krds merlt fel, hogy mirt s hogyan vlik ketts trv a DNS a sejtoszlskor a mitotikus kromoszmkon bell. gy gondoltuk, kzelebb kerlhetnnk mindkt krds megvlaszolshoz, ha izollt sejtmagokon vgeznnk vizsglatokat. Ekkor, vagyis a 60-as vek els felben tbb sejtfeltrsi, sejtmagizollsi mdszer vlt ismertt. Mindegyikhez valamifle fizikai behatst, homogenizlst alkalmaztak. Neknk viszont a fizikai behatsokat kerlnnk kellett, mert azt talltuk, hogy a sejtek enyhe fizikai srtsekor, pl. kenet ksztse sorn is a sejtmagok, ill. a bennk lv DNS knnyen kettstrv vlik. St, azt is bizonytottuk, hogy amikor egy sejt elpusztul a magja, ill. a magjban lv DNS fonalak kettstrkk vlnak. ppen akkor, amikor 1963-1964-ben a szvetkultrkon a polarizcis mikroszkpos vizsglatainkat elkezdtk, jelentek meg az els kzlemnyek ionos s nem ionos detergensek alkalmazsrl a sejtfeltr mdszerek hatkonyabb ttele cljbl. Kezdetben a homogenizlshoz hasznlt oldatokba tettk bele a detergenseket. Az egyik ilyen kzlemnyben, ahol egy specilis nem ionos detergenst hasznltak (a detergens neve, Nonidet P40 volt), az elllt cg neve s cme is fel volt tntetve. Azonnal rtam egy kr levelet a cgnek. Csodval hatros mdon, a vasfggnyn keresztl nhny htre r kt tgely (belthatatlanul sok ksrlet elvgzshez elegend) detergenst kaptam ajndkba. A Nonidet P40 detergens, ami kmiailag polyoxoethylen szobahmrskleten viszkzus folyadk. Vzben, fiziolgis s oldatokban s cukor oldatban is tkletesen jl olddik. A ksrleteinkhez a hivatkozott kzlemnyt kvetve, mi is 0.10.2%-os koncentrciban hasznltuk.

28

letem egyik legnagyobb lmnye volt, amikor elszr (az ide vonatkoz kzlemnyeket tvizsglva, meglehetsen nagy bizonyossggal llthatjuk, hogy elsknt a vilgon) azt lthattam, hogy minden mechanikai behats nlkl a detergens eltvoltja, feloldja a sejtmagok krli citoplazmt. (31-35) Lnyegben azt szleltem, ami itt a 8. brn lthat. Az j mdszert in situ sejtmag izollsi mdszernek neveztk el s ezen a nven kzltk is le.(31)

8. bra Egy rteg (monolayer) HeLa sejtek interferencia mikroszkpos felvtele detergens kezels eltt (l llapot) s 20 perces detergens (NP40) kezels utn. A detergenst egy szvettenyszt alap oldatban, Hankes oldatban

29

oldottuk s 0.1% koncentrciban alkalmaztuk. Az itt lthat ksrletet perfzis mikr kamrban vgeztk. (x800)

A nem ionos detergensekkel (kezdetben Nonidet P40el, majd ksbb Triton X 100-al) lecsupasztott sejtmagokon szmos ksrletet vgeztnk s szmos eredeti megfigyelst tettnk. (33) Klnsen izgalmasak, rdekesek s felettbb jak voltak a polarizcis mikroszkpos vizsglatokkal szerzett megfigyelseink. Amikor a detergenst fiziolgis koncentrcij (290mosmol) szvettenyszt mdiumban, izotnis pufferben, vagy egyszeren csak NaCl s KCl oldatban alkalmaztuk, a lecsupasztott sejtmagokban (kivtel nlkl mindegyikben) a DNS intenzv kettstrst mutatott a Romhnyi-fle precipitcis toluidinkk fests utn (9. bra) (32, 34, 35)

17

9. bra. Nonidet P40 detergenssel izollt sejtmagok fny s polarizcis mikroszkpos kpe Romhnyi-fle precipitcis toluidinkk fests utn (A detergens

30

koncentrcija 0.1% volt, s Hankes oldatban volt oldva) (x800)(34)

Amikor a detergenst 0.25-0.3 mol/l koncentrcij (290mosmol krli) cukoroldalban oldva hasznltuk, a citoplazma eltvoltsa (a detergenses citolzis) ugyancsak bekvetkezett. A sejtmagokon bell a DNS viszont optikailag izotrp volt a Romhnyi-fle precipitcis toluidinkk fests utn is. Viszont ketts trv vlt, ha az izollt (lecsupasztott) sejtmagokat soldatba vittk t. Fordtva is igaz volt, izotrpp vlt a DNS, amikor a soldatbl az izollt magokat cukor oldatba tettk. Mindez azt mutatta, hogy az izollt sejtmagokon belli DNS polarizcis mikroszkposan regisztrlhat szerkezetvltozsa ionerssg fgg s reverzibilis. Izotnis soldat s ugyancsak izotnis cukor oldat klnbz arny keverkeivel be is tudtuk titrlni azt a Na+, ill. K+ ion koncentrcit, ahol a DNS polarizcis mikroszkpban regisztrlhat reverzibilis szerkezet vltozsa, azaz izotrpbl anizotrp s vissza, bekvetkezik. Az a kation (Na+, K+) koncentrci rtk, ahol a sejtmagok intenzv kettstrkk vltak, azaz az sszes mag struktrkban a DNS anizotrpp vlt 70 mmol/l krli ssz kation (K+ vagy Na+, vagy K+ s Na+) koncentrcinl volt. rdekes kiegszt megfigyelsnk, hogy a magvacskkat (nukleoluszokat) krlvev, un. nucleolus associated chromatinban a DNS 70 mmol/l koncentrcinl valamivel alacsonyabb ionerssgnl vlt kettstrv.(32,34) A DNS ionerssgtl fgg reverzibilis szerkezet vltozst, vagyis az izotrp/anizotrp tmenetet cukor oldatban (detergens nlkl) izollt thymus sejtmagokban is megfigyeltk. (10. bra). A thymus lymphocyta sejtmagokon belli DNS ionerssgtl fgg reverzibilis szerkezet vltozsa (izotrp/anizotrp tmenet) pont azoknl a koncentrci rtkeknl kvetkezett be, mint a detergenssel izollt szvettenyszeti sejtmagok esetben. (35)

31

18

10. bra Cukor oldatban, detergens nlkl izollt, majd Hankes oldatba tvitt thymus limphocyta sejtmagok fny s polarizcis mikroszkpos kpe a Romhny-fle precipitcis toluidinkk fests utn. (x800) (35)

Az idpont, 1962. sze, amikor a sejtmagokon belli DNS szerkezeti sajtossgainak kutatst, mint tudomnyos dikkrs a Pcsi Orvostudomnyi Egyetem Krbonctani Intzetben elkezdtem, klns idpont volt. Ekkor, 1962. decemberben kapta meg Francis Harry Compton Crick, James Dewey Watson s Maurice Hugh Frederick Wilkins a fiziolgiai s orvostudomnyi Nobel-djat a DNS ketts spirl szerkezeti modell kidolgozsrt. A DNS modell lersa jelents tett volt. Ugyanakkor mind a mai napig folyik a vita, kik rdemeltk volna meg inkbb a Nobel-djat a gnekkel, a DNS-sel kapcsolatos kutatsaikrt, felfedezseikrt, mint k hrman. Taln nem is annyira az a kifogs, hogy mirt kapott ez a 3 kutat Nobel-djat, hanem inkbb az, hogy a tbbi dnt felfedezsrt, amelyek nlkl se a DNS modellt

32

megszerkeszteni, se arra a tudsra szert tenni, amit ma a gnekrl tudunk, tantunk, nem lehetett volna, mirt nem osztottak ki tovbbi Nobel-djakat. A dnt felfedezsek sora, amelyekrt a jelentsgk miatt felttlenl Nobel dj jrt volna, kt olyan felfedezvel, Robert Brown-al s Friederick Miescher-rel kezddik, akik termszetesen azrt nem kaptak Nobel-djat, mert nem is kaphattak, mivel jval a Nobel-dj alaptsa eltt tettk, s kzltk felfedezseiket. A sejtmagokkal, s indirekt mdon a DNS-el kapcsolatos els lnyeges felismers Robert Brown, aki 1831-ben eladta s 1833-ban elszr rta le, nevezte el a sejtmagot, a nucleus-t, mint az akkori fnymikroszkpban is lthat, bzikus festkekkel festhet, sejten belli testecskt, organellumot. Az igazsg az, hogy valsznleg legelszr Antony van Leeuwenhoek 1682-ben, az ltala ksztett mikroszkpban egysejt llnyeket vizsglva figyelte meg s rajzolta le a sejtmagot. St, Franz Bauer nvnyi sejtekben, mint azok jellegzetes alkotjt rajzolta le a magjukat, azonban a nv adsa, s az, hogy bzikus festkekkel festdnek, Brown nevhez kapcsolt, az rdeme. A msodik dnt felfedezs a svjci kutat, Friederich Miescher. volt az, aki 1869-ben elsnek izollt fonalakat a sejtekbl. Mivel felismerte, hogy ezek a fonalak a sejtek magjbl szrmaznak, nuklein-nek nevezte el. Az izollt nuklein fonalak kmiai sszettelt, vagyis azt, hogy cukrot, pentzt s bzisokat (purin s pirimidin bzisokat) valamint foszftot tartalmaznak, Phoebus Aaron Theodore Levene rta le elszr 1919-ben. Teht ezrt a felfedezsrt mr lehetett volna, st jelentsge miatt kellett is volna Nobel-djat adni. Az els rntgen diffrakcis felvtelt az izollt nucleinrl (DNS-rl) William Thomas Astbury ksztette 1937-ben. Azt, hogy baktriumok fertz kpessgrt egy tvihet anyag transforming principle felels 1928-ban elvgzett ksrleteiben Frederich Griffith bizonytotta elszr. A teljes bizonysgot Oswald Theodore Avery s munkatrsai 1949-ban szolgltattk arra, hogy Griffith ksrleteinl a transzforml anyag (transforming principle) DNS. k se kaptak Nobel-

33

djat, pedig az lettudomny tern aligha van ennl jelentsebb, fontosabb felfedezs. Mg kt lnyeges felfedezst, ill. szemlyt kell a DNS ketts spirl kimunklsa szempontjbl megemlteni. ltalnos vlemny ugyanis, hogy az felfedezseik nlkl a DNS ketts spirl modellt lehetetlen lett volna kidolgozni, s valban ezekre a felfedezsekre ptve szletett meg a modell. A kt meghatroz felfedez: Rosalind Elsie Franklin s Erwin Chargaff. Franklin kisasszony rntgen krisztalogrfiai vizsglatait vrus DNS mintkon vgezte. Megfigyelsei tettk elszr ktsgtelenn a DNS ketts spirl alapszerkezett. Chargaff pedig a bzis prosodst bizonytotta egyrtelmen. Ugyan Levene vizsglatai mr felvetettk, de a ktsgtelen bizonytkokat Chargaff adta az adenin-thimin (AT) s a guanin-citozin (GC) bzis prosodsra. A DNS fonalak bels rendezdsnek, szerkezetnek a hidrogn hidakkal sszekapcsolt bzis prok s kvl a foszft csoportokkal sszekapcsolt cukor (dezoxiribz) az alapja, lnyege. Mindez azt jelenti, hogy 1962-ben s a rkvetkez 6-7 vben, amikor a sejtmagokra vonatkoz polarizcis mikroszkpos vizsglataimat vgeztem, mr tudott volt, hogy az informcit, az rkletes tulajdonsgokat tviv anyag (a gnek) nem ms, mint a dezoxiribonukleinsav makromolekula, a DNS. Kmiailag hrom f alkotja van: 1., bzisok (purin s pirimidin), 2., cukor, pentzok, ribz s dezoxiribz, 3., foszft. Szerkezett tekintve ketts spirlban elrendezett fonal, ahol a bzisok trvnyszer prostsban hidrogn hidakkal vannak sszekapcsolva. A bzisokhoz kapcsold dezoxiribz molekulk a 3. s 5. sznatomjaival vltakozva, foszfttal vannak stabilizlva, lncc fzve gy, hogy minden foszftbl egy szabad negatv csoport nylik ki a lncbl. Innen ered a DNS lnc negatvitsa, vagyis bzikus karakter festk molekulkkal trtn festhetsge. A DNS polimr (fonal) 2226 ngstrm (2,2-2,6 nanomter) szles. Egy-egy ismtld egysg, nukleotida (bzis-cukor-foszft) tmrje 3,3 ngstrm. Tudott (meghatrozhat), hogy az egyes fajok

34

sejtmagjaiban mennyi DNS, hny bzis (nukleotida) van s az is, hogy a DNS kromoszmkba rendezett. Teht a sejtmagokban annyi folytonos DNS fonal van, ahny kromoszma. Az egyes kromoszmkon belli DNS fonal hossza ppen az elmondottakbl, a meghatrozhat nuklotida szmbl s tmrjkbl, megtlhet. Az ide vonatkoz kzlemnyek, s a tanknyvekben szerepl adatok szerint, a klnbz soksejt llnyek sejtjeinek egyes kromoszmiban lv DNS fonalak hossza 3-6 cm is lehet. Az emberi (human) sejtek magjaiban, 46 kromoszmval szmtva, a DNS fonalak ssz hossza 1,5-3 m-nek tlhet. Ebbl kvetkezik, hogy 40-45 vvel ezeltt, amikor a polarizcis mikroszkpos vizsglatainkat vgeztk, de valjban ma is, a legnagyobb talny, hogy a 1.5-3 mter ssz (kromoszmaknt 3-6 cm) hosszsg DNS fonalak, hogyan lehetnek elrendezve, bepakolva a 4-5 mikromter tmrj lymphocyta magokban vagy a 10-15 mikromter tmrj szveti, ksrleteinknl, szvettenyszeti sejtek magjaiban? A polarizcis mikroszkpos szleleteink mg fokoztk a talnyt. Hogyan lehet visszafordthat mdon (reverzibilisen) kettstr, optikailag anizotrp a DNS az oszl sejtek kromoszmiban s az izollt sejtmagokban a 70mmol/l ssz kation (K+ + Na+) ionkoncentrcinl? A DNS melyik szakaszn s hogyan kvetkezik be a polarizcis mikroszkpban oly lesen felismerhet, reverzibilis szerkezet vltozs, amikor a magok s a kromoszmk mretben, alakjban lnyeges vltozst nem szleltnk a prhuzamos fnymikroszkpos vizsglatok sorn? A tancstalansgunk miatt az els kzlemnyeinkben nem is tettnk, mert nem is tehettnk mst, mint csupn lertuk a jelensget s felhvtuk a figyelmet a DNS-hez kapcsold fehrjk esetleges szerepre az ltalunk szlelt szerkezetvltozsokban s ltalban a sejtmagon belli DNS strukturlis s funkcionlis organizcijban. A DNS fonalak sejtmagon belli elrendezsre vonatkoz, tletem szerint legalapvetbb felfedezst, egy akkor fiatal, velem egyids hzaspr, Ada s Donald Olins tettk

35

1972-74-ben. Szemlyesen is tallkoztam velk 1973. tavaszn egy konferencin Getlinburgban, Tennesse llamban, USA. A nagyszer felfedezsket, mg kzls eltt, ott, ezen a konferencin mutattk be elszr. (A kzlemnyk, amelynek cme: Spheroid chromatin units - nu bodies, 1974-ben a Science folyiratban jelent meg). Az elektron mikroszkpos felfedezsk lnyege, hogy a DNS fonalak alap elrendezdse az l sejtek magjn bell olyan, mint a gyngyk zsinron (beads on a string). Nemhogy Nobel-djat nem kaptak a felfedezskrt, hanem, ahogy ez sokszor megtrtnik, mg nem is az elnevezsk, hanem az utnuk vizsgl, P. Oudet ltal adott nv, a nucleosoma lett a gyngyk (beads) neve. (23, 37) A gyngyk valjban hiszton fehrjk (az 5 hiszton kzl 4, prosval), azaz oktamr (8-as), amely kr a ketts szl DNS ktszer van rcsavarodva. Az a felfedezs, hogy a DNS fonalak ktszer rtekerednek a hiszton fehrje oktamerekre s ezek egymst kvetik, valamint az a tny, hogy ez az alapszerkezet az oszl kromoszmkban is megmarad, arra sarkalt bennnket, hogy a polarizcis mikroszkpos szleleteinket egy j modellbe foglaljuk ssze (l. 11. bra). (40, 41) A modellnk lnyege, amely tletnk szerint jl jelzi a valsgot, az, hogy a polarizcis mikroszkpos vizsglatok sorn szlelhet reverzibilis szerkezetvltozs az n. linker DNS-en, azaz a gyngyket a nucleosomkat sszekt DNS szakaszokon kvetkezik be. Ugyanis, ha a hiszton oktamrekre csavarodott DNS ktdse stabil, mint, ahogy valban az, a szerkezet vltozs csak ezen a DNS szakaszon kvetkezhet be!

36

11. bra DNS sejtmagon belli szerkezet vltozsnak modellje a polarizcis mikroszkpos szleleteink alapjn (40)

A modell f rtke, hogy elfogadhat magyarzatot ad a tnyre, nevezetesen arra, hogy a DNS reverzibilis (visszafordthat) mdon kettstrv vlhat a mitotikus

37

kromoszmkban s az izollt sejtmagokban is a kritikus 70mmol/l krli egyrtk kation koncentrcinl. A hiszton oktamrekre, nucleosomkra felcsavarodott DNS, mivel a ktdse ezekhez a fehrjkhez ers, nem disszocil le a ksrleteinkben hasznlt, un. fiziolgis ion erssgnl. gy a nucleosmkra rcsavarodott DNS nem jtszhat szerepet az ltalunk szlelt kettstrsben, sem a kromoszmkban, sem az izollt sejtmagokban. Tovbbi szempont mg ahhoz, hogy a polarizcis mikroszkpban kettstr struktrt szleljnk, a fnymikroszkp feloldsi hatrt, azaz 0,1 mikromter (100 nanomter) hosszsgot elr/meghalad fonalas (lineris) elrendezs struktra kell. Az egyes linker DNS szakaszok ugyan rvidek (ltalban nem hosszabbak, mint 5-15 nanomter), viszont md van r, s bizonyosan ez a valsg, hogy tbb linker DNS egy vonalba van rendezve. Ezt a rendezst, mint ahogy a sejtek magjban minden ms rendezdst is elsdlegesen a magmtrix fehrjk vezrelhetik. A magmtrix fehrjknek bizonytottan meghatroz szerepk van a chromatin trendezsben, pl. a magvacskk (nucleolusok) kialaktsban is, de sejtosztdskor a kromoszmk mozgatsban is. Tl ezen, a modellnk msik, taln az elbbinl is fontosabb zenete, hogy a linker rgiban a H1 hiszton fehrje a sajtos tulajdonsga, a ketts disszocicis karaktere ltal valban szerepet jtszhat a folding-unfolding, a DNS 70 mmol/l kation koncentrcinl bekvetkez, a polarizcis mikroszkpban jl megfigyelhet sszehajtogatott-kinylt szerkezet vltozsban. Mindebbl arra a bizonyossgra lehet, st kell eljutni, hogy az l sejtek magjn bell a DNS mentn nincs egy lland 150-170 mmol/l egyrtk kation (K+ + Na+) koncentrcij szabad elektrolit oldat. A DNS, a gnek nincsenek llandan kitve egy ilyen szabad elektrolit oldat hatsnak. Nem frdenek egy 150-170 mmol/l K+-ion koncentrcij szabad elektrolitban. (41, 42) Ellenkezleg, kell lenni egy loklis vz struktra, szabad ion szint szablyoz mechanizmusnak. Ez a szablyoz mechanizmus pedig nem lehet mshoz rendeltek, mint a nagy

38

mennyisgben jelen lv, n. lazn kttt (loosely bound) magfehrjk csoportjhoz. Ezeknek a lazn kttt magfehrjknek mi egy j nevet, ion-zsilip fehrjk (ionsluice proteins) elnevezst javasoltunk. (41-43) A lazn kttt sejtmag fehrjk, az un. interfzisban (G1, S, G2 sejt ciklus fzisokban) nagy mennyisgben vannak a sejtmagokban, viszont sejtoszlskor (M fzisban) elhagyjk a kromoszmkat. Ezzel, a feltevsnk szerint, megteremtdik a lehetsg, hogy a DNS kzvetlen kzelben, pontosabban a nucleosomkat sszekt, n. linker DNS-nl loklisan, mikr krnyezetben a 70mmol/l kation (K+ + Na+) koncentrcit meghalad koncentrcij szabad elektrolit lehessen, amelynek hatsra bekvetkezik a szerkezetvltozs, a DNS kinylsa (unfolding), azaz az izotrpbl anizotrpp, ketts trv vls. Mindebbl kvetkezik, hogy a polarizcis mikroszkpos szleleteinket meglehetsen jelentsnek tarthatjuk, akkor is, ha mindezidig nem kellen kztudottak, nem kellen idzettek. Ugyanis, mind a mai napig ezek a vizsglataink az egyedli bizonytkok arra, hogy sejtoszlskor nem csupn kondenzldik a chromatin, hanem a DNS alapvet szerkezet vltozsa is bekvetkezik. A norml fnymikroszkpban s az elektronmikroszkpban csak az sszetmrlst, a kondenzldst lehet regisztrlni, a DNS bels szerkezet vltozst egyedl csak a mi polarizcis mikroszkpos vizsglataink bizonytjk. Tovbb mind a mai napig nincs magyarzat arra, hogy a sejtoszls kb. 1 rs fzisa (az M fzis) alatt, mirt van teljes genetikai csend. A sejtbiolgiai kutats egyik legszilrdabb, ma is megmagyarzhatatlan felismerse, amit radioaktvan jelzett bzisokkal (nukleotidkkal) brki ellenrizhet, hogy a sejtoszls 1 rs fzisban (M fzis) se DNS, se RNS jdonkpzds nincs, holott a szksges felttelek, a templt is (a DNS) s a szksges enzimek is bsgesen jelen vannak az osztd sejtekben is. A vlemnynk szerint (ez olvashat ki a rajzolt modellnkbl is) a zsilip, az (ion-sluice), vagyis a loklis ion szint szablyoz rendszer, a lazn kttt sejtmag

39

fehrjk a mitotikus kromoszmkban s az izollt sejtmagokban 70mmol/l egyrtk kation koncentrci felett ledisszociltak, nincsenek a linker DNS-en. Ennek kvetkeztben ezen a szakaszon, loklisan, mikr dimenziban mr lehet 70mmol/l kation koncentrcit meghalad, akr 120170 mmol/l (az l sejtek bels millijre szmtott) koncentrcij szabad elektrolit. Ennl, a 70 mmol/l rtket meghalad loklis kation koncentrcinl az amino-carboxyl csoportok sztkapcsoldhatnak, disszocildni kpesek, azaz a DNS-t s RNS-t szintetizl szerel lnc fehrje komplexek szt lehetnek kapcsolva s fordtva sszekapcsoldhatnak loklisan, ha a szabad ionszint loklisan a kritikus 70 mmol/l koncentrci rtk al cskken. Ebbl kvetkezik, hogy a lazn kttt fehrjk az ion zsilip tulajdonsgukkal, vagyis a vz s K+ kt kpessgkkel vezrelni kpesek a DNS s RNS szintetikus apartus tr s id koordintk kzti ltrejttt. Teht magt a DNS s RNS tr-id koordintk kzti jdonkpzdst. sszegezve a kutat munkm els, 6-8 ves fzist, vagyis a DNS sejtmagon belli szerkezeti sajtossgainak polarizcis mikroszkpos vizsglatt, arra a lnyegi bizonyossgra jutottam, hogy a DNS fonalak, a gnek az l sejtek magjain bell nem frdenek, nincsenek, nem lehetnek kitve, egy 140170 mmol/l kation (K+ + Na+) koncentrcij szabad elektrolit oldatnak. Ekkor ugyanis a DNS fonalak soha nem lehetnnek izotrpok a polarizcis mikroszkpban! gy arra a kvetkeztetsre kellett jutnunk, hogy a DNS kzvetlen kzelben van, kell lenni valamifle ion-szint szablyoz mechanizmusnak. A sejtmagon bell a DNS, pontosabban a DNS-hiszton komplex kzvetlen kzelben a lazn kttt magfehrjk ltszottak szmunkra elssorban felelsnek a loklis szabad ion-szint szablyozsrt. De ismerve a sejtmagok szerkezett, a mag membrn nagy prusait, bizonyos volt s bizonyos ma is, hogy a sejtmagokon belli szabad ionszint szablyozs nem lehet elvlasztott az egsz l sejten belli szabad ion-szint szablyozstl. Teht mr a

40

kutatplym els veiben vilgos volt szmomra, hogy a kettt egytt kell nekem is kutatnom. Valjban ezt tettem egsz letemen t. Mindenesetre az els s legfontosabb feladat az volt, hogy a lazn-kttt (loosely-bound) sejtmag fehrjkrl minl tbbet megtudjunk. Kzlk legalbb egyet specifikusan is vizsglhassunk. A lazn kttt sejtmag fehrjk vagy kzlk egynek a kutatst nevezhetem a kutati letplym msodik fzisnak. Bizonytja ezt az is, hogy az orvostudomny doktora fokozat elnyersrt 1985-ben rt rtekezsem cme: A lazn kttt sejtmag fehrjk biolgiai sajtossgai. (41) Mieltt azonban a lazn-kttt sejtmag fehrjkre s a sejten belli K fizikai-kmiai llapotra s az intracellulris vz struktrkra vonatkoz vizsglataimat rszletesebben bemutatnm, egy jelentsnek tlhet kutatsi mellktermkemrl szeretnk szmot adni. Mr tbb, mint 3-3,5 v telt el, hogy 1964-ben elszr a Nonidet P40 detergenssel, minden mechanikai behats nlkl, az egyrteg (monolayer) struktrkon, mikroszkp alatt kzvetlenl is megfigyelheten (lsd. 8. bra), leoldottuk a citoplazmt a sejtmagok krl, amikor egyszer csak, villmcsapsknt vetdtt fel bennem a krds: de mirt maradnak a sejtmagok a helykn, ha eltvoltottuk krlttk a citoplazmt? Mi tartja az izollt sejtmagokat a helykn? A krdsre megfelel vlaszt tallni nagyon kritikus volt, hiszen mr le is kzltk, hogy egy j, n. in situ sejtmag izollsi mdszert fedeztnk fel. (31) A knz krds felvetdst kveten, klnbz festsekkel a ksrletek egsz sort vgeztem el, hogy vgl is megtalljam mi tartja az izollt sejtmagokat a detergens kezels, azaz a citoplazma detergenses eltvoltsa utn is a helykn. A fnymikroszkpos vizsglatok az egyes festsek utn rendre eredmnytelenek voltak. Detergens kezels s fests utn fnymikroszkpban a magok izolltnak, csupasznak, azaz tisztnak mutatkoztak. Ekkor az az tletem tmadt, hogy a DNS s RNS elklntsre hasznlt acridine-orange festket, ill. festsi eljrst prbljam

41

ki. Azt a mdostst alkalmaztam, hogy a festst a szoksos hidrogn ion koncentrci (pH 3.5-4) mellett magasabb pH rtknl is elvgeztem. Megfestettem a detergenssel kezelt egyrteg sejtkultrkat, majd egy Zeiss gyrtmny (keletnmet) fluoreszcens mikroszkpban vizsgltam. Mr az els prepartum vizsglatakor lenygz, dbbenetes ltvnyban volt rszem! gy gondolom ez volt letem taln legnagyszerbb kutati lmnye. A zlden fluoreszkl sejtmagokat rozsdabarna hrom dimenzis vkony fonal hlzat vette krl. (44) A mikromter csavar vltoztatsval a hlzat, mint egy hrom dimenzis pkhl trulkozott fel. A hlzat a sejtmagok krl ppen akkora volt, mint a sejt. Sajnos, abban az idben csak gyenge minsg fekete-fehr felvtelre volt lehetsgem. gy a felvtel, amit akkor ksztettem nem adta, nem adja vissza teljessggel az lmnyt, a valsgot. Mgis a tny, az tny. Az a fluoreszcens mikroszkpos felvtel, amit a 12. brn lehet ltni az els kp a vilgon a hrom dimenzis detergens rezisztens citoszkeletonrl, az l sejten belli, a detergens kezels utn visszamarad, a sejtmagot kipnyvz hromdimenzis fehrje vzrl.

42

27

12. bra Monolayer HeLa HeLa sejtkultra Hankes oldatban oldott 0.1% Nonidet P40 kezels s acridine-orange fests utn. Fluoreszcens mikroszkpos felvtel x800

Bizonytottuk (tripszin emsztssel), hogy a sejtmagokat helyben tart hlzat valban fehrje, amely alkalikus kzegben (pH8 felett) fehrje emszt enzimek nlkl is sztesett. A magok lesztak a fedlemezekrl. Sajnos a detergens kezels utn visszamarad fehrje vzra vonatkoz szleletnket nem kzltk le azonnal. Ugyan benne van az 1972-ben rt, Adatok az izollt sejtmagok chromatin struktrinak felptshez cm kandidtusi rtekezsemben, (35) kzlsre elszr csak az amerikai tanulmnyutam (1972/73) utn, 1975-ben kldtk be a Nature-hoz. Kr, hogy a Nature nem kzlte le, hanem specilis sejtbiolgiai folyirathoz ajnlotta. Mg ebben az vben, 1975-ben ugyan megjelent a kzlemnynk a Histochemistry folyiratban, ez azonban mr nem volt elg ahhoz, hogy a detergens rezisztens

43

citoszkeleton felfedezsrt, els megfigyelsrt az elismerst a tudomnyos irodalomban teljessggel mi kapjuk meg. Az szlels utn nyolc v ksssel jelent meg a kzlemnynk, mgis, a jelek szerint nem csak maga az szleletnk az els, hanem a kss ellenre a mink az els hrads is a sejtmagokat kipnyvz detergens rezisztens citoszkeletonrl. (44) Specilis ellenanyagokat hasznlva, az egyik legrszletesebb lers a sejtek fehrje vzrl, vagyis a detergens rezisztens citoszkeletonrl Mary Osborn-tl szrmazik. Az 1977-ben megjelent kzlemnykben korrektl utalnak r, hogy a vz els megfigyelse, felfedezse a mi rdemnk. (45) Tle kaptam ajndkba a 13. brn lthat felvtelt.

28

13. bra Mary Osborn ajndka. Detergens rezisztens citoszkeleton, cytokeratin. Monolayer epitelilis sejtek detergens kezels s fluoreszcein izocianttal konjuglt anticytokeratin fests (reakci) utn. Fluoreszcens mikroszkpos felvtel (x800)

44

Akr ezt, Mary Osborn felvtelt nzve, akr a citoszkeleton 3 f sszetevje, a mikrotubulris rendszer, a kzti (intermediate-, 100 tmrj) filamentumok vagy az aktin tartalm mikrofilamentumok kzl brmelyiket feltntet kpeket nzve, az a krds tolul mindig elm, s gondolom mindenki el, hogy hol van, hov kpzelhet el a sejtfelszni ketts rteg lipoid membrn? Nzve az egymsba tnyl fonalakat hova kpzeli, hova kpzelheti el brki a sejtfelszni folytonos ketts lipoid rteg membrnt? Azok, akik hirdetik, azok, akik hiszik azt az elmletet, hogy az l sejteket egy folytonos ketts rteg lipoid membrn veszi krl, vajon hogyan szemllik ezeket a kpeket? Hiszen nyilvnval, hogy egymsba tr finom fehrje hlzat kapcsolja egymshoz a sejteket. Lehetetlen, hogy az l sejtek folytonos lipoid membrnnal be lennnek zrva, hogy a folytonos fehrje hlzaton keresztl ne kommuniklnnak, ne beszlgetnnek egymssal az l sejtek. Nha arra gondolok, mi lett volna, ha az izollt sejtmagokat a fedlemezhez kapcsol fehrje mtrix felfedezsekor, 1968 szn, irnyt vltok? Ha felhagyok a lazn kttt sejtmag fehrjk s az intracellulris ion-milli szablyozs kutatsval? Ha a detergens rezisztens citoszkeleton kutatsra trek t? Bizonyra lennnek rla tovbbi sajt felismerseim. Taln ismertebb lennk, hiszen els felismersvel jval megelztem azokat, akiknek a nevhez rendelik ma ltalban, a detergens rezisztens citoszkeleton felfedezst. Ami elgondolkodtat, hogy a rengeteg nagyszer rszlet, a gynyr kpek, amiket a sejtvzrl az elmlt 40 vben kzltek, nincs rtkn kezelve. Nincs az rtknek, jelentsgnek megfelelen bemutatva a dikoknak oktatott tananyagban. Ltezse tny akkor is, ha az l sejteken bell bizonyosan nem gy van jelen, mint, ahogy a detergens kezels s valamelyik fluoreszcens immunreakci utn feltrulkozik. Egy biztos, a citoszkeleton felfedezse utn az l sejtrl kialaktott s oktatott kp, a folytonos kettsrteg lipoid membrnnal krlvett szabad oldat, cytosol kp, a

45

tanknyvekben nem vltozott! Vajon mirt? A valsg, a sejten belli folytonos fehrje vz felfedezse rthetetlen mdon nem vltoztatta meg a nyilvnvalan tves, hamis uralkod sejt szemlletet. Mirt? llandan ezt krdezem n is. Mirt nem? Pontos vlaszom nincs, de meg vagyok arrl gyzdve, hogy mindkett, az l sejtekrl s az emberi szemlyrl a tudomny nevben, a tudomny vilgban kialaktott hamis elmlet kavalkd, nagyban felels az lvilg s maga az emberisg ellenes rtsokrt, a nagy bajokrt, amibe az emberisg mostanra belesodrdott. Nem trtem le a vlasztott kutatsi trl, az l sejtek bels ion-milijnek kutatsrl, s ezt nem bnom, a sok-sok kudarc ellenre nem bntam meg. A kutatmunkm msodik fzisban, lazn kttt sejtmag fehrjkre irnyul vizsglatainknl, elszr az interferencia mikroszkpos mdszer segtsgvel meghatroztuk ugyanannak a sejtmagnak az ssz szrazanyag tartalmt az l, intakt sejten bell, majd a citoplazma detergenses eltvoltsa utn. (33) Amikor detergenst szvettenyszt oldatban, vagy fiziolgis s oldatban oldottuk, a maganyag vesztesge 65-70%. Cukor oldatban ez a vesztesg kisebb, 50% krli volt. Kiegszt vizsglatokkal bizonytottuk, hogy a detergenses citoplazma eltvolts sorn nincs DNS vesztesg. Az intakt sejtek magjban a DNS tartalom pont annyi, mint a citoplazma eltvoltsa utn az izollt magokban. A jelents, 50-70%-os maganyag vesztesg lnyegben fehrje vesztesg. Ugyan a magok RNS tartalmnak fele eltvozik az izolls, azaz a detergenses citolizis sorn, az alacsony mennyisgk miatt a sejtmagok ssz szrazanyag tartalmnak cskkensben az RNS vesztesg nem jtszik meghatroz szerepet. A sejtmagokbl eltvoz fehrjk egy rszt az ide vonatkoz irodalomban szabadon oldott, nuclear sap fehrjknek tekintik. Hogy a teljes maganyag 70%-t kitev fehrjk valjban hogyan vannak jelen, hogyan kapcsoldnak egymshoz s a sejtmagok fix struktrihoz, vitathat. Egy biztos, nem szabadon diffundlnak, de a

46

kapcsoldsaik, a ktdsk, a sejtmagokon bell, ppen a sajt megfigyelseinek alapjn is llthat, nem egysges. (41-43) Az a frakci, amelyik a sejtmagokban maradt, amikor a detergens izotnis cukor oldatban volt oldva, de kiolddott izotnis s oldatban, nyilvnvalan ersebben kapcsoldott a sejtmagok chromatin struktrihoz, mint azok, amelyek mr az apolros cukor oldatban is kiolddtak. Talltunk is egy fehrjt, az SV40 vrus induklt tumor sejtek magjban lokalizld, tumor specifikus fehrjt, a 80.000 dalton mlsly nagy T-antignt, amelyrl, ahogy a kvetkezkben kimutatsra kerl, mi bizonytottuk, hogy a lazn kttt, (loosley bound) sejtmag fehrjk csoportjba tartozik. (46) Ezzel nem csak az rdem volt a mink, a bizonyossg, hogy a T-antign a lazn kttt magfehrjk csoportjba tartozik, hanem vizsglata ltal mlyebb betekintst is nyertnk ezen sejtmag fehrjk funkcijba, ill. eszkzt talltunk a munka elmleteink (munka hipotziseink) helyessgnek vagy helytelensgnek eldntshez. Az SV40 vrus induklt daganat sejtek T-antign sejtmag fehrjivel kapcsolatos kutatsainkat 1973. tavaszn Janet Butel professzor asszonnyal Houstonban (USA) a Baylor College of Medicine-n kezdtem el. ennek a kutatsi terletnek az egyik elindtja, legismertebb szemlyisge. A professzor asszonynak az SV40 vrussal induklt tumorokbl tolthat szvetenyszete, monolayer sejtkultrja volt, amelynek a H-50 jelzst adtk. Ha ezeket a sejteket fiatal, 4 hetesnl nem idsebb hrcsgk bre al oltottuk, megtapadtak s bellk gyorsan nvekv daganatok fejldtek ki. A daganatok kifejldsnek ideje alatt a hrcsgk vrben a tumor specifikus sejtmag fehrje, a 80.000 dalton mlsly nagy T-antign ellen ellenanyag, antiglobulin halmozdik fel. gy a tumoros hrcsgk vr plazmja (szruma) (els antitest) s fluoreszcein izocianttal jelzett anti hrcsg immunglobulin (msodik antitest) felhasznlsval kitn mdszer llt rendelkezsnkre a T-antign fluoreszcens mikroszkpos vizsglatra. Mr az els megfigyelsek nagyon biztatak

47

voltak. Ugyanis, ahogy remltk, ill. feltteleztk, a kt lpcss, un. indirekt immunfluoreszcens vizsglatainkban azt talltuk, hogy a T-antign jelen van az interfzis sejtmagokban, viszont elhagyja a kromoszmkat a sejtoszls fzisban. Ekkor a citoplazmban lesz kimutathat (lsd 14. bra).

20

14. bra H-50 sejtkultra indirekt immunfluoreszcens kpe. Az els antitest tumoros hrcsg vr szruma, ill. a benne lv anti T-antign globulin. A msodik antitest fluoreszcein izothiocyanttal jelzett, nylban termelt anti-hrcsg immunglobulin (IgG) (x800)

Azt, hogy az SV40 vrus induklt tumor sejtek magjban lv nagy T-antign fehrje valban a lazn kttt (loosely bound) sejtmag fehrjk csoportjba tartozik mg Houstonban bizonytottuk. A T-antign alacsony ionerssg mellett, izotnis cukor oldatban, a citoplasma detergenses

48

eltvoltsa utn is, az izollt sejtmagokban maradt. Viszont Hankes oldatban, vagy brmely izotnis (290 mosmol krli) soldatban, elektrolitban mobilizldott, eltnt a sejtmagokbl. Miutn 1974-ben hazatrtem Amerikbl az egyves tanulmnyutamrl, Szcs Gyrggyel, kivl virolgus kutat bartommal elhatroztuk, hogy H-50 sejtkultrval, amit magammal hoztam s csirke vrsvrsejtekkel (vvs) sejthibrideket hozunk ltre, s bennk tanulmnyozzuk a Tantignt. (47) Ekkor ugyanis mr ismert volt Henry Harrisnek, az Oxfordi Egyetem (Sir William Dunn School of Pathology, University of Oxford) patholgus professzornak nagyszer felfedezse. Az 1960-as vek msodik felben vgzett ksrleteiben azt tallta, hogy daganat sejtek ellt Sendai vrus kivonattal, a legklnbzbb sejtekkel, akr csirke vrsvrsejtekkel (vvs) is, fuzionlhatk, sejthibridekk, sokmag rissejtekk alakthatk. (48) Az inaktv csirke vvs magok ezekben az ris sejtekben aktivldtak, megduzzadnak s bennk jra DNS s RNS szintzis indult be. Mi a H-50 tumor sejtjeinkkel egyrszt reproduklni akartuk Henry Harris megfigyelseit, msrszt arra a krdsre kvntunk vlaszt kapni, hogy a fuzionlt, tbb magv ris sejtekbe belekerlt csirke vvs magokban is megjelenik-e, felhalmozdik-e a nagy T-antign fehrje? Ha igen, mikor s sszefggsbe hozhat-e a csirke vvs magok morfolgiai s funkcionlis vltozsaival? A kzs ksrleteink Szcs Gyrggyel szmos j, felettbb rdekes s rtkes felismerst eredmnyeztek. Elszr is sikerlt Henry Harris ksrleti megfigyelseit reproduklnunk, vagyis sikerlt tbb magv rissejteket a H-50 daganat sejtek s magvas csirke vrsvrsejtek fuzionlsval ltrehoznunk. (lsd 15. bra) (47)

49

21

15. bra rissejt, amelyben 3 H-50 daganat sejt mag s 3 jelentsen megnagyobbodott vrsvrsejtmag lthat. Egy stten festd, kicsi csirke vvs mag az ris sejt felsznn kvl maradt. Ez nem nagyobbodott meg, gy a sejtekbe jutott magok megnagyobbodsnak mrtke jl lthat. A sejthibrid H-50 tumor sejtek s csirke vvs sejtek szuszpenzijval Sendai vrus extraktummal kszlt, majd 30 rs uttenyszts kvetkezett. Giemza fests. Fnymikroszkpos felvtel (x800)

ppen gy, ahogy Henry Harris s utna mg msok ksrleteinl, a daganat sejtekkel fuzionlt csirke vrsvrsejtek magjai, a ltrejtt ris sejteken bell aktivldtak, megduzzadtak s bennk jra beindult a DNS s RNS jdonkpzdse. A DNS jdonkpzdst 3H-thimidin beplsnek autoradiogrfis analzisvel tudtuk remekl kvetni. Ami szmunkra a legdntbb volt, hogy pont akkor, amikor a csirke vvs magok duzzadni kezdtek, s genetikailag

50

aktvakk vltak, azaz a DNS jdonkpzdse kimutathatv vlt, megjelent bennk a T-antign (lsd 16. bra)

22

16. bra H-50 daganat sejtekbl s csirke vrsvrsejtekbl Sendai vrus extraktummal ltrehozott sejthibrid 30 rval a fzi utn. Indirekt immun fluoreszcens reakci utn fluoreszcens mikroszkpos felvtel. (x800)

A sejtek fuzionlsa utn az ris sejtek belsejbe kerlt csirke vrsvrsejt magok duzzadsa ksleltetve kvetkezett be. A ksedelem pontosan azt bizonytja, hogy a magok duzzadsa nem valami ozmotikus, oldat fizikai trtns eredmnye. Ez alatt a ksedelem alatt a T-antign se jelent meg bennk s az autoradiogrfis vizsglatok szerint a 3H-thimidin beplse, vagyis a DNS szintzise se kezddtt el. (lsd 17. s 18. bra)

51

23

17. bra H-50 daganat sejtek s csirke vrsvrsejtek fzijval ltrehozott ris sejt. A fzi utn 6 rs uttenysztst vgeztnk itt. 3H-thimidin bepls, fekete szemcsk (grains) lthatk a kt tumorsejtmag felett, mg a hrom kicsi vvs mag felett nincsenek szemcsk. Giemza fests (x800)

A sejtfzis ksrleteink egyrtelmen bizonytottk, hogy a T-antign fehrje megjelense sszefggsben van a sejtmagok duzzadsval s a DNS szintzis beindulsval, azaz az inaktv sejtmagok aktivldsval. Megtlsnk szerint nem lehet ktsges, hogy a daganatsejtek citoplazmjbl bizonyos fehrjk, kztk, ahogy kimutattuk, a T-antign fehrje, valamilyen program szerinti bejutsa, felhalmozdsa a csirke vvs magokba az elsdleges felttel, hogy a genetikailag inaktv, kicsi, zsugorodott magok jra megduzzadtak, aktivldtak, bennk a DNS jdonkpzdse jra visszatrt. Az, hogy mindhrom esemny egymshoz idben kzel, de jelents, akr 6-10 rs ksssel kvetkezik be, kizrja, hogy abban valamifle

52

sejten belli (intracellulris) oldat vndorls, oldat diffzi jtszana meghatroz szerepet. Viszont felvetette azt a krdst, hogy az ltalunk elsknt megfigyelt, a 70-es vek kzepre mr egyre jobban ismert citoszkeletonnak lehet-e szerepe valamelyikben, vagy esetleg mindhromban, hiszen megalapozott volt a felttelezsnk, hogy egymshoz kapcsolt mechanizmusokrl van sz? Amikor a krdst felvetettk az is ismert volt, hogy colchicin nev toxikus alkaloida gtolja a citoszkeleton egyik f sszetevjnek, a mikrotubulris rendszernek a funkcijt. Logikus volt feltenni azt a konkrt krdst, hogy a ksleltets fzisban, azaz a fzi utn nhny rval, pl. 6 rval a colchicin meggtolja-e a T-antign megjelenst, a magok duzzadst s a DNS szintzis beindulst, azaz a 3H-thimidin beplst a fuzionlt ris sejtekbe bekerlt csirke vvs magokban. Erre a krdsre a vlasz, s valjban a fzis ksrleteink sszefoglalsa olvashat le a 18. brn szerepl tblzatbl.

The effect of colchicine treatment on size, t-antign positivity and 3H-Thymidine incorporation in nuclei of H 50-chick erythrocyte heterokaryons
SIZE OF NUCLEI H-50 N. 351,96 167,1 N=27 ERY. N. 46,08 + 13,4 N=25 T-ANTIGN H-50 N. ERY. N.
3

H-THIMIDINE ERY. N.

H-50 N.

CONTROL (30 HR. AFTER FUSION) 10-4 M COLCHICINE (6 HR. WITHOUT 24 HR. WITH

+++++

+++++

+++++

+++

384,47 135,7 N=42

17,91 + 3,7 N=44

++++

NO

++

NO

53

COLCHICINE) 18. bra Ennek a tblzatnak az adatai a Cell Biology Int. Rep. 2. vf., 1. sz., 19-24 old.(1978) szmban megjelent kzlemnynkben szerepelnek.(47) A H-50 daganatsejtek s a csirke vrsvrsejtek fzija utn 30 rig uttenysztett tbbmagv rissejtek a kontrollok. Ezekkel vettettk ssze azokat, ahol a fzit kvet 6. rban cholchidint adtunk a tenyszetekhez, s mg 24 rn t gy tenysztettk tovbb. 30 rval (l. kontroll) a csirke vvs magok jelentsen megduzzadtak, bennk a T antign megjelent s a 3H-thimidin bepls autoradiogrfis vizsglat szerint a DNS szintzis beindult. A colchicin kezels mindhrmat meggtolta s cskkentette az ris sejteken bell a daganatsejtmagokban foly DNS szintzist is.

Sajnos, ahogy a detergens rezisztens citoszkeleton felismerse, ezek a ksrleti megfigyelseink se kaptak eddig kell elismerst, ill. felismerst a tudomnyos irodalomban. Pedig ezek a megfigyelseink nem kisebbet bizonytanak, mint azt, hogy a sejtmagokon belli genetikai folyamatok, elsdlegesen a DNS szintzis, a citoplazmbl a magba jutott fehrjk ltal vezrelt s ezek a fehrjk nem egyszer diffzi tjn jutnak be s halmozdnak fel a sejtmagokban, hanem valamifle citomatrix-vezrelt, citomtrix-fgg mechanizmus ltal. gy tnik, hogy egy programozott jrarendezds (rearrangement) vezrli a sejtmag s a citoplazma kzti fehrje megoszlst. Ms megfogalmazsban, ezek az eredmnyeink is ellene szlnak annak, hogy az l sejtek belsejt egy fehrjkben gazdag szabad oldatnak, solnak, cytosolnak lehetne felttelezni, mint ahogy az az uralkod sejt szemllet miatt a tanknyvekben s a kzlemnyek dnt hnyadban ma mg szerepel. A kezdetnl, ahogy mr jeleztem, a polarizcis mikroszkpos vizsglatainkkal prhuzamosan interferencia mikroszkpos vizsglatokat is vgeztnk. Ez a mdszer lehetv teszi egyetlen sejt, st sejten bell kln a sejtmagok trfogatnak s szrazanyag tartalmnak a meghatrozst. gy

54

alkalmasnak grkezett a daganat sejtekkel kialaktott ris sejtekbe bekerlt csirke vvs magok trfogat s szrazanyag tartalom vltozsainak kzvetlen mrsre is. Itt a fzi utn 4 rval s 24 rval vizsgltuk a vrsvrsejtmagokat. (lsd 19. bra)

Erythrocyte nuclei in H-50 cell hybrid 4h n Area (2) Dry mass (g x 10-12) 18 17,3 + 4,1 18,9 + 4,3 24h 17 36,2 + 4,7 27,1 + 3,6 0,75 + 0,10

Concentration (g x 10-12/ 1,10 + 0,08 2)

19. bra H-50 tumor sejt - csirke vrsvrsejt hibrideken bell a vrsvrsejtmagok interferencia mikroszkpos analzisvel nyert mrsi eredmnyek. A fzi utn 24 rval a magok trfogata s szrazanyag tartalma lnyegesen nagyobb, mint 4 rval a fzi utn. Ugyanakkor az egysgnyi felletre szmtott szrazanyag (koncentrci) cskkent.

55

Az interferencia mikroszkpos vizsglataink jl kiegsztettk az autoradiogrfis s fluoreszcens mikroszkpos vizsglatainkat. Az, hogy a csirke vrsvrsejt magok duzzadsa nagyobb mrtk, mint az anyag felvtel, azt jelenti, hogy a sejtmagokba bekerlt fehrjk fajlagos vzkt kpessge nagyobb, mint a zsugorodott, kicsi, genetikailag inaktv magokban lv fehrjk. St, azt is jelentheti, hogy a csirke vrsvrsejt magokban az oda bejutott, s ott felhalmozdott fehrjk olyan szerkezeti vltozson mennek t, aminek kvetkeztben tbb vizet ktnek meg, mint a korbbi helykn, a citoplazmban. gy azt is lehet mondani, hogy a megduzzadt magok genetikai aktivldsban a loklis fehrje-vz struktrk meghatroz szerepet jtszanak. Nem szabad elfelejteni azt a rgi sejtbiolgiai ismeretet sem, hogy a sejtmagokban a genetikai aktivits, vagyis a DNS s RNS jdonkpzds a fellazult, magasabb vztartalm un. euchromatinban zajlik s nem az alacsonyabb vztartalm, kompakt heterochromatinban. A chromatin fellazulsa (a heterochromatineuchromatin tmenet) teht nem lehet msnak az eredmnye, mint a loklisan felhalmozott fehrjk konformci (szabad energia szint) vltozsa ltal vezrelt vz rendezdsnek, vagyis a rendezett, kttt vz molekulk felhalmozdsnak eredmnye. A lazn kttt sejtmag fehrjk, mint amilyen a T-antign magfehrje is, sejtmagon belli felhalmozdsakor a vz molekulk megktsvel prhuzamosan a K+ ionok is ktdnek a fehrjk sajtos, magas elektron srsg helyeihez. Teht loklisan lecskken a szabad kation, fleg K+ ion koncentrci arra a szinte, ahol a specifikus enzimekbl karboxil-amino sktsekkel sszekapcsold szerel lncok, a DNS-t, RNS-t szintetizl appartusok ltrejhessenek. Mindez azt jelenti, hogy a lazn kttt magfehrjk, az ion-zsilip a szabad kationszint regull sajtossgukkal teremtik meg a felttelt a tr-id koordintk kztti DNS s RNS jdonkpzdshez.

56

Felvethet mg, hogy mindazon esemnyekben, amit kzs nvvel genetikai aktivldsnak neveznk, s ami nem ms, mint a DNS s RNS szintzis beindulsa, vghezvitele, az egyes specifikus s nem specifikus fehrjk, mint mechanikai gpezetek is rszt vesznek. Magban a mechanikai munkban a vz ppen a f sajtossgaibl, a dipol karakterbl fakadan, vagyis a rendezhetsgbl, ill. a szabadsgi foknak hely s id koordintk kzti vltoztathatsgbl fakadan, mint mkdtet er (driving force) is szmba vehet. sszegezve az SV40 vrus induklt tumor sejtek magjban kimutathat tumor specifikus fehrjre, a 80.000 dalton mlsly T-antign magfehrjre vonatkoz kutatsaink eredmnyeit szmunkra a legdntbb az volt, hogy bizonytottuk a lazn kttt (loosely bound) magfehrjk csoportjba tartozst. gy vizsglatval a lazn kttt magfehrjk ltalnos tulajdonsgainak pontosabb megismershez jutottunk kzelebb. Az l sejteken bell a vz rendezse, tbb rteg megktse s prhuzamosan a szabad K+-ion szint loklis szablyozsa valsg, sajt vizsglatainknl elsdlegesen a sejtmagokba felhalmozdni kpes, un. lazn kttt magfehrjkhez kapcsolt valsg. Teht igaz, hogy a gnek (a DNS) elsdlegesen a lazn kttt magfehrjk sajtossgbl fakadan, az l sejtek magjn bell nem frdenek egy 140170 mmol/l koncentrcij szabad K+-ion koncentrcij elektrolit oldatban. A T-antignnel kapcsolatos kutatsaink lezrsa utn, s ez az 1975-78-as vekre tehet, mr csak egyetlen krds rdekelt, az, hogy az l sejteken bell a fehrjk hogyan szablyozzk, pontosabban, hogyan cskkentik le a szabad K+ion szintet. Az biztos volt, hogy a DNS kzvetlen kzelben lv szabad K+ szintet szablyoz mechanizmus ltez valsg. A sejtmag prusok, a sejtmagok s a citoplazma kzti makromolekula csere ismeretben az is bizonyos volt, hogy a sejtmagon belli K+ szint szablyoz mechanizmus csak olyan lehet, ami az egsz sejtet tfogja, az egsz sejtre rvnyes.

57

Tudom, hogy az elmlt 100 vben sokan, gy n is a K+ionokat szelektven megktni kpes fehrjk kutatsba kezdtem. 6-8 ven t megszllottan kerestem a kliumot, a K+-ionokat szelektven megktni kpes fehrjket. A K+-ionokat szelektven ktni kpes fehrjk keressre biztatott az a tny is, hogy ebben az idben egyre, msra fedeztek fel az l sejteken bell Ca++ionokat specifikusan kt fehrjket. Mivel a nem ionos detergensek a fehrjket nem denaturljk, nem krostjk, megmarad a natv llapotuk, katalitikus, enzimatikus sajtossguk, kzen fekv volt K+-ion kt fehrjket keresni azok kztt is, amelyek a detergens hatsra kiolddtak a sejtekbl s azok kztt is, amelyek nem, vagyis az un. detergens rezisztens frakciban maradtak. Ezekben az vekben a ksrletek szzait vgeztk el. Egyik kudarc a msikat kvette. Mdszernk az equilibrium dialzis volt. Azt vrtuk, hogy akr a detergens mobilis, akr a detergens rezisztens fehrjk kztt, a dializl mdium sszettelnek, ionerssgnek vltoztatsval, fogunk tallni K+-ionokat szelektven megktni, felhalmozni kpes fehrjket. Annyira meg voltam gyzdve, hogy az l sejten bell nem szabadon oldott a K+, hanem fehrjkhez kttt, hogy a sok kudarc ellenre hossz ideig nem adtam fel a keresst. A K+-ionok sejten belli kttt voltra tantott 1. ves orvostanhallgat koromban Ernst Jen professzor is. tvizsglva a K+ s Na+- ionok l sejten belli s kvli megoszlsra vonatkoz irodalmi kzlemnyeket, szinte a kezdetektl (az 1900-as vek elejtl), az egyenltlen megoszlsok els felfedezstl, kt nzet feszlt egymsnak. Az egyik szerint az l sejten bell az ott felhalmozott K+-ionok nincsenek szabadon oldva a sejten belli vzben, hanem sajtos mdon a fehrjkhez kapcsoltak. A msik nzet szerint, ahogy mr tbbszr idztk a K+-ionok szabadon oldottak a szabad intracellulris vzben. Azaz a K tartalom s a vz tartalom eloszlsbl kapott 140-170 mmol/l rtk a valsgot jelezn. Ebben az esetben az l sejteket krlvev oldat alacsony (3-4.5 mmol/l) Na+-ion szintje gy tarthat fenn, hogy a sejtek felsznn lv ketts lipoid rteg membrnban, specilis pumpk,

58

specilis csatornk vannak. Ezek tartjk fenn, energia felhasznlssal, a bels s a kls szabad oldat kzti koncentrci eltrseket, gradienseket. Ahogy mr jeleztem, s ahogy az elemi iskolktl az egyetemekig tantjk, mindenki tudja, hogy a msodik nzet, a K+-ionban gazdag szabad intracellulris oldat elfogadsa vlt az elmlt szzadban uralkodv. Engem viszont ennek a nzetnek uralkodv vlsa nem zavart, hiszen magam szleltem, hogy az l sejteken bell nincs, nem lehet egy 140-170 mmol/l K+-ion tartalm szabad oldat, a DNS ugyanis nincs kitve egy ilyen elektrolit oldat hatsnak. Nem csak a K+-ionokat szelektven megkt fehrjk keressben voltam megszllott, hanem azoknak a kutatknak a keressben is, akik az 1970-es vekben arrl voltak meggyzdve, mint tanrom, Ernst Jen professzor s n is, hogy se a vz, se a K+ nem szabad az l sejten bell. 1975 szn Carlton F. Hazlewood lettan professzor arrl az egyetemrl, a Baylor College of Medicine-rl, ahol 1972-73-ban tanulmnyton voltam, Pcsre ltogatott, hogy Ernst professzorral tallkozzon. Amerikban, Houstonban akkor, amikor 1972-73-ban ott voltam, nem tallkoztam vele, de Pcsett hamar felfedeztk kzs rdekldsnket, s elkezddtt egy mig tart (tbb, mint 30 ves) mly bartsg, kutati egyttmkds kztnk. Oly annyira, hogy 1980-82 kzt, 2 ven t az intzetben, a Baylor College of Medicine, lettani Intzetben dolgoztam, mint vendg kutat professzor. Hazlewood professzor, aki a magmgneses rezonancia (NMR) technikt a legelsk kzt alkalmazta az l sejteken belli vz molekulk mozgsszabadsgnak vizsglatra, harcosan kpviselte s ma is kpviseli, hogy az intracellulris szabad oldat (cytosol) elmlet hamis, nem igaz, mert az l sejteken belli vz ms fizikai-kmiai llapotban van (mozgsban korltozott, struktrlt), mint a pohrban, a folykban, a tengerekben, az esben vagy a kutatk lombikjban. A sajt kutatsain tl, gyakorlatilag mindenkit ismert azok kzl, akik a sajt kutatsaik alapjn az l sejten belli vz s ionok,

59

klnsen a K+-ion szabad oldattl eltr fizikokmiai tulajdonsgt vetettk szembe az uralkod, szabad oldat (cytosol) elkpzelssel. A New York Academy of Sciences 1972. janur 10-12 kztt Physicochemical State of Ions and Water in Living Tissues and Model Systems cmmel Hazlewood professzor elnkletvel konferencit szervezett. A konferencia anyaga az kiadi szerep vllalsval, az Annales of The New York Academy of Sciences sorozat 204. ktetben, 631 oldal terjedelemben, 1973-ban jelent meg. (49) Ebben a jelents mben szerzknt az egsz vilgrl gyakorlatilag mindenki szerepelt azok kzl, akik kutatsi eredmnyeik alapjn nem tudtk elfogadni a szabad intracellulris (cytosol) nzetet, elmletet. Teht a bartsgom vele azt jelentette, hogy n is kapcsolatba kerlhettem azokkal, akik a vz molekulkat s anorganikus ionokat, legfkpp a K+-ionokat is magba foglal, dinamikus organizcirl s nem szabad intracellulris oldatrl nyilatkoztak, fogadtak el. Az l sejtek kutatsait, ill. kutatit integrl nemzeti s nemzetkzi trsasgok, az 1970-es vekben, arra az elhatrozsra jutottak, hogy bizonyos rendszeressggel (4 vente) sejtbiolgiai vilgkongresszust rendeznek. Az elhatrozs valra vlt s 1976. szeptember 5-10 kztt Bostonban (USA) megrendeztk az els sejtbiolgiai vilgkongresszust. Ezen a kongresszuson rszt tudtam venni. Bemutathattam korbbi kutatsi eredmnyeinket, s ami ennl mg fontosabb, Hazlewood professzor kzremkdsvel szemlyesen is megismerkedhettem az l sejten belli vz s szervetlen ion kutats legkiemelkedbb szemlyisgeivel, Szent-Gyrgyi Alberttel, Gilbert Linggel, James Cleggel, Freeman Cope-al, Raymond Damadiannal, Walter Drost-Hanzennal, Ludwig Edelmannal, William Negendankkal s mg msokkal is. A programban kln szimpzium, kerekasztal konferencia volt Cell-associated water (Sejthez-kapcsolt vz) cmmel. (50) Tz vvel ksbb, 1986. jlius 3-5. kzt itt Pcsett, Ernst Jen professzor hallnak 5. vforduljra konferencit rendeztnk. Kzlk, az elhaltak kivtelvel, gyakorlatilag mindenki eljtt Pcsre, rszt vett a

60

konferencinkon. Ennek a konferencinak az anyaga The Physical Aspect of the Living Cell cmmel 1991-ben jelent meg. (21) Azokat a ksrleteimet, amelyek arra irnyultak, hogy a nem ionos detergensekkel feltrt sejtekbl kinyert fehrjk kzt, akr azok kztt, amelyek a sejtmagokbl s a sejt vzzal oldhatatlan fzisban maradtak K+-ionokat szelektven megktni kpes fehrjket talljak, a sorozatos kudarcok ellenre, mg 1980-ban is, Hazlewood professzor intzetbe kerlsem utn is, folytattam. Pedig nincs, se az l sejtbl fiziolgis ton kijutott, szekretlt fehrjk kztt se (l. pl. a vrplazma fehrjit) s a sejtek feltrsa, sztszedse utn kikerlt fehrjk kztt se, de a sejtfeltrs utn oldatba nem kerlt fehrjk kztt se egyetlen egy se, amelyik szelektven ktni kpes K+-ionokat. Nincs klium ionokat szelektven kt izollt fehrje! Nincs nmagban K+-ionokat szelektven felhalmozni kpes egyedi fehrje! Ez az llts sok szz ksrlet eredmnye s olyan valakitl hangzik el, tlem, aki tntorthatatlanul meggyzdtt voltam s vagyok abban, hogy az l sejtek legfbb sajtossgrt, a K+-ionok sejten belli felhalmozsrt a sejten belli fehrjk a felelsek. A felhalmozott intracellulris klium nem szabadon, K+-ionknt van oldva a sejten belli vzben. Az l sejtekbl kikerlt fehrjk, ha az aktulis tltsk negatv vagyis, ha a krnyezetk vizes oldatban a H+ ion koncentrci (a pH) ezt biztostja, a kt egyrtk Na+ s K+-ionokat, minden szelektivits nlkl, a mretknl kisebb prus dializl zskban, feldstjk. Ezt a mrskelt, szelektivits nlkli K+ s Na+ feldsulst Donnan egyenslynak nevezzk. Teht az un. Donnan jelensgnek semmi kze sincs az l sejtekre jellemz 30-40x-es fajlagos (szelektv) klium feldsulshoz. A sok kudarc utn nem gondoltam, hogy mgis a nem ionos detergensek segtenek minden korbbinl egyrtelmbben bebizonytani annak a feltevsnek a helyessgt, hogy az l sejtek legalapvetbb sajtossgrt, a K+ ionok szelektv felhalmozsrt az l sejten belli fehrjk a felelsek, s nem

61

valamifle misztikus pumpk a sejtfelszni lipoid membrnban! A sejtek feltrsra hasznlt nem ionos detergensek hatsmechanizmust vizsglva egyre tbb adat bizonytotta, hogy a lipoidok kioldsa mellett, a detergensek kzvetlenl szerepet jtszanak a sejtek fehrjinek mobilizlsban. A Nonidet P40 s a Triton X 100 detergens molekulk elrve az l sejteket mindkettt, a lipoidokat is s a fehrjket is gyorsan, nagy intenzitssal mobilizljk. Ugyanakkor az elgaz sznlnc Brij detergensek, klnsen a Brij 58, jllehet a membrn lipoidokat a Triton X 100-al kzel azonos intenzitssal tvoltja el, hatsra a fehrjk mobilizlsa ksleltetett, lassbb. Kzenfekv volt feltenni a krdst vajon a K+-ionok mobilizlsa a membrn lipoidok eltvoltst, a sejtek kinyitst fogja kvetni, vagy az l sejteken belli fehrjk kiramlst. Ismerve szabad oldatban a K+-ionok diffzis koefficienst s az l sejtek mrett (a nhny mikromter tmrket) s a ksrlet szmra felttelesen elfogadva az uralkod sejtelmletet, nevezetesen azt, hogy az l sejteken bell szabad K+ oldat van, amit a sejtfelszni ketts rteg lipoid membrn vlaszt el a kls szabad oldattl, a kilukasztst, a membrn eltvoltst a detergensekkel, gyakorlatilag azonnal, vagyis nhny msodpercen bell teljes kiramls, a kls oldattal val teljes kiegyenltds, equilibrci kell, kellene, hogy kvesse. Elhatroztuk teht, hogy Triton X 100 s Brij 58 detergens kezelst kveten az id fggvnyben vizsgljuk a lipoid mobilizcit, a lipoid membrnok eltvoltst elektronmikroszkpos technikval s prhuzamosan a fehrjk s a K+ mobilizcijt. Nyilvnvalan ahhoz, hogy a detergens molekulk minden sejtet azonos pillanatban rjenek el, csak sejt szuszpenzit vagy egyrteg (monolayer) tenysztett sejteket hasznlhattunk. (51, 52, 21) Mindkt sejtflesgen elvgeztk a ksrleteket. Termszetesen sejtszuszpenzi esetn centrifuglst kellett beiktatnunk, mg monolayer sejtkultra esetben a lngfotometris K mrs helyett K42 izotpot, a fehrje kiramls kvetsre pedig elzetesen jelzett aminosav 35Smethionin bepts mdzsert kellett hasznlnunk.

62

A sejtszuszpenzis vizsglatainkat borj thymusbl nyert lymphocytkon vgeztk. A membrnok (membrn lipoidok) eltvoltsa 2-5 percen bell mindkt detergenssel, a Triton X 100-al is s a Brij 58-al is teljes volt. (lsd 20. bra) (51)

31

20. bra Borj thymus lymphocytk elektronmikroszkpos felvtele. a., kezeletlen, kontroll sejtek. b., 0.2% Brij 58 kezels 5 percig. c., 0.2% Triton X 100 kezels 5 percig. (x18.200) (51)

A sejteken belli s a sejteken kvli K meghatrozshoz a sejteket kell sebessggel s minden mintra egyformn (standardizlva) le kellett centrifuglnunk. A centrifugls teljes ideje 10 perc volt. A vlasztott centrifuglis er 40.000 g. Kt perc volt szksges ahhoz, hogy elrjk a 40.000 g-t. t percig ezen a sebessgen centrifugltunk, majd 3 perc kellett, amg a centrifuga lellt. A pelletbl is s a

63

fellszbl is K meghatrozst vgeztnk lngfotometris mdszerrel. A pelletek slyt elszr pontosan megmrtk, majd slyllandsgig szrtottuk. A kett klnbsge adta a sejtek vz tartalmt. A beszrtott pelletbl (sejtekbl) a K-ot 1.0 M HCl-el mostuk ki, majd elvgeztk a lngfotometris mrseket. Az egysgnyi vzre (kg) szmtott sejten belli K koncentrci rtket elosztottuk a sejteken kvli oldat, vagyis a szupernatns K koncentrci rtkvel (a kt koncentrci hnyadost Gilbert Ling utn K (ro) rtknek neveztk, lsd 21. bra)

Water content and K-values of detergent treated thymus lymphocytes n Control (Intact thymocytes) Brij 58 15' Triton X 100 Brij 58 20' Triton X 100 Brij 58 Triton X 100 8 18 18 8 8 8 8 H2O (%) 76,6 + 0,4 76,8 + 0,5 73,5 + 0,2 74,5 + 0,13 68,1 + 0,2 69,0 + 0,2 67,8 + 0,2 K 39,5 + 0,9 28,2 + 1,4 1,95 + 0,04 6,65 + 0,2 2,18 + 0,06 2,02 + 0,1 1,96 + 0,03

30'

21. bra A sejten belli s kvli K koncentrci hnyadosok (K (ro) rtkek) p

64

(control), Brij 58 s Triton X 100 kezelt thymus lymphocyta sejteken.

Ezek a mrsi eredmnyek valban megdbbentek. A vilgirodalomban az eddig kzlt ksrleti megfigyelsek kzl, ktsgbe vonhatatlanul, ezek a legbizonytbbak arra, hogy az l sejteken bell (a jelen ksrletben az l thymus lymphocytkon bell) a K nem szabadon oldva, szabad K+ionknt van jelen a szabad intracellulris vzben. Az elektronmikroszkpos vizsglatok alapjn bizonyos, hogy mindkt detergens a Brij 58 is s a Triton X 100 is teljessggel eltvoltja, eltvoltotta a sejtfelszni lipoid membrnokat, st a magmembrnokat is. Mgis a Brij 58-al kezelt sejtek esetben kzel 30-as K (ro) rtket mrtnk. Vagyis a sejtfelszni lipoid membrn nlkl a Brij 58-al kezelt sejtekben az egysgnyi vz volumenre (1kg vzre) szmtott K koncentrci kzel 30x magasabb volt, mint kint. Ismerve a szabad K+ ionok diffzis koefficienst szobahmrskleten (23-25C-on), ahol ksrleteinket vgeztk s ismerve a lymphocytk 4-5 m tlagos tmrjt, a K kiramlsnak, a kls-bels kiegyenltdsnek, msodperceken bell be kellett volna kvetkezni, ha a vzmolekulk valban szabadok lettek volna s ha ebben a szabad intracellulris vzben a K+ ionizlt llapotban, szabadon lett volna oldva. Tovbb, ha ezt a szabad intracellulris K+-ion oldatot a sejtfelszni lipoid membrn vlasztotta volna el a kls trtl, mint ahogyan ez ltalnosan elfogadott s tantott mindentt a vilgon. Nem! Az l sejtekre jellemz K felhalmozsrt, a kt egyrtk kation a K+ s Na+-ionok kzti klnbsg ttelrt, nem a sejtfelszni membrn a felttelezett misztikus pumpival s csatornival felels, hanem az l sejteken bell sajtos llapotban, sajtos kapcsolatban lv fehrjk. Bizonytk erre az is, hogy a Triton X 100 kezelsnl, ami a sejtfelszni membrnok eltvoltsakor, szinte azonos idben, mobilizlja az sszes mobilizlhat fehrjt, mr az els mrsi idben, 15 percnl (5 perc kezels + 10 perc centrifugls) teljes K

65

kiegyenltdst (equilibrcit) mrtnk. A 2 krli K (ro) rtk a sejtmagok chromatin llomnyra rvnyes Donnan egyenslyt bizonytja. Ez az rtk Brij 58 esetben a 20 perc szuszpenzi + 10 perc centrifugls, azaz 30 perc ssz id mellett kvetkezett be (21. bra).

66

A thymus lymphocytakon vgezett ksrleteinket egyrteg (monolayer) sejtkultrn is megismteltk szinte teljesen azonos eredmnnyel (l. 22. bra). Ezeket a ksrleteket a Cocompartmentation of proteins and K+ within the living cell cmmel felettbb rangosnak tlhet folyiratban, a Proceedings of National Academy of Sciences, USA-ban kzltk le. (21) A K kvetsre itt, ahogy mr jeleztem 42K izotpot, mg a fehrjk analzishez 35S-methionin elzetes bepts mdszert hasznltuk. Egyrtelmen bizonytottuk, hogy a sejtmembrnok 2-5 perc utn mindkt detergens hatsra eltntek. Triton X 100 kezels utn a K s a fehrjk 2 percen bell kiolddnak. Brij 58 kezels mellett a K s a fehrjk kiramlsa ksleltetett s sszekapcsolt. A K kiramls

67

10-12 perc utn teljes s szigmoid grbvel lerhat karakterisztikt mutat. (l. 22. bra.)

22. bra Egyrteg (monolayer) sejtkultrn a klium (K) kiramlsa Triton X100 kezels utn (l. -) azonnali (2 percen belli), mg Brij 58 kezels utn (l. - ) ksleltetett, 10-12 perc utn vlik teljess.

A kzlemnynket, ami, ahogy jeleztk egy meglehetsen rangos tudomnyos folyiratban jelent meg, elg sokan idztk s idzik most is, de a tanknyvekben s a

68

tudomnyos framban minden a rgi! Tovbbra is az l sejt gy szerepel, mint egy K+-ionban gazdag szabad oldattal teli (cytosol) zacskcska. Zacskcska, amelynek a fala a misztikus sejtfelszni ketts liopid rteg membrn a misztikus pumpival, csatornival. A misztikus sejtfelszni membrn a misztikus pumpival s csatornival kt szabad vizes oldatot, az intracellulris szabad oldatot (cytosol) s az extracellulris, vagyis sejten kvli oldatot vlasztja el. Ez pedig biztosan nincs gy! A brmikor, brhol megismtelhet ksrleti tnyek bizonytjk, hogy nincs gy! Az l sejteken bell, se a vz molekulk, se a K+-ionok nem szabadok. A vz molekulk nem gy vannak jelen, mint kvl, vagy brmelyik szabad vzben a termszetben. A K+-ionok pedig nem szabadon oldva, ionizlt formban vannak a szabad intracellulris vzben. A sajt ksrleteim bizonytka, hogy addig, amg a sejtekbl kikerlt, vagy ksrletileg kiszedett fehrjk nem tudnak klnbsget tenni a K+ s Na+-ionok kztt, az l sejteken bell ugyanezek a fehrjk olyan llapotban, olyan kapcsolatban, dinamikus kapcsolatban vannak egymssal, olyan dinamikusan vltoz hlzatot kpeznek, hogy a Na+-ionokkal szemben felhalmozzk a K+-ionokat. gy rendezik, gy ktik meg a vz molekulkat, hogy kiszortjk a nagyobb hidrt burk, nagyobb hidrcis potencil Na+-ionokat, mg kitntetett, magas elektron denzits helyeken rvid tvolsg elektrosztatikus klcsnhatssal (short-range electrostatic interactions) dinamikusan megktik a K+-ionokat. A fehrjknek ez a szervezdse, ami a szelektv K+-ion felhalmozsban trulkozik elnk nem ms, mint amit keresnk, az l llapot (the living state). Nagyon rdekes idzetre bukkantam egy sszefoglal rsban. (l. 23. bra)

69

Early Theories of Protein Structure Joseph S. Fruton In The Origins of Modern Biochemistry, A retrospect on proteins. Annales of New York Academy of Sciences 325, 1-18, (1979) .. Throughout the nineteenth century, the energy-rich character of protoplasmic proteins was emphasized. A common feature of the hypotheses was the assumption that upon the death of the cell, the energyrich living proteins are converted to dead proteins, which represent the well-known materials isolated from biological sources .
23. bra Az angol szveg magyar fordtsa: Vgig a 19. szzadon a protoplazmris fehrjk energia gazdag llapott hangslyoztk. Az elmletek kzs sajtossga volt az a felttelezs, hogy a sejt hallakor az energia gazdag l fehrjk halott fehrjkk alakulnak t, ami annak a jl ismert anyagnak felel meg, amit klnbz biolgiai forrsokbl lehet kinyerni.

A megllapts nagyon egybe hangzik a sajt ksrleti megfigyelseinkkel. Hossz veken keresztl, ahogy korbban mr jeleztem a ksrletek szzaival hiba kerestem sejtfeltrs utn az l sejtekbl kivett, oldatba vitt, vagy oldhatatlan fzisban lv fehrjk kzt olyanokat, amelyek kizrlagosan (szelektven) ktik a K+-ionokat a Na+-ionokkal szemben. Ilyen izollt fehrjk nincsenek! De az l sejten bell a fehrjk olyan llapotban vannak, olyan kapcsolatban vannak egymssal, olyan dinamikus hlzatot kpeznek, amelynek kvetkeztben felhalmozni kpes a kliumot (K). Mltn nevezhetjk ezt a

70

dinamikus llapotot l llapotnak, a fehrjk l llapotnak, ahogy az idzet is szl az p, l sejteken belli llapotrl. gy azt kell hangslyoznunk, hogy a fehrjknek nem kett, hanem hrom llapota van. Az un. natv llapoton tl, amely a sejtekbl termszetes ton kikerlt, szekretlt ill. sejtfeltrs utn fiziolgis kzegbe kikerlt fehrjk katalitikus funkciit megrztt llapott jelli, van a denaturlt (halott) llapot. Ezt az llapotot ers savval, lggal vagy magas hvel lehet elrni. Ilyenkor a fehrjk ltalban kicsapdnak, megvltozik vz oldkonysguk s elvesztik katalitikus funkcijukat. Jllehet a biokmia keretben csak errl a kt llapotrl beszlnek s tantanak, a fehrjknek teljes bizonyossggal van egy harmadik llapotuk, kizrlag csak az l sejteken belli un. l llapotuk. Ebben, az egymssal dinamikus kapcsolatban lv, pontosabban dinamikusan vltoz hlzatot kpez llapotukban, ahogyan mr jeleztk, a fehrjk sajtosan struktrljk, magukhoz ktik a vz molekulkat s ugyancsak dinamikusan, rzkenyen vltoz mdon ktik meg az egyes anorganikus elemeket, kztk fleg a K+-ionokat. Vgs sszefoglalsknt rdemes jra idzni SzentGyrgyi Albertnek a Mi az let? What is life? krdsre adott vlaszt: The life is water dancing to the tune of solids (Az let a vz tnca a szilrd dallamra). A sajt kutatsi eredmnyeimmel n gy pontostanm: The life is the water and potassium dancing to the tune of newly synthesised, extended, high free energy state and dynamically associated proteins (Az let a vz s a klium (K) tnca az jdonkpzdtt, extendlt, magas szabad energiaszinttel jellemezhet, egymshoz dinamikusan kapcsold fehrjk dallamra). Az els l sejt teht 4 millird vvel ezeltt egyszer, valahogy ltrejtt. Azt nem tudjuk, hogy ez az els l sejt milyen volt, mekkora volt, de azt tudjuk, hogy azta a Fldet leszrmazottaival folytonosan betlt programozott, fizikai, kmiai, mechanikai gpezet-szer kpzdmny volt. Valahogy az elsben is, kt memriatr kellett, hogy ltezzen. Egyik az pt elemeket, a msik az sszeraks mdjt hatrozta meg,

71

ahogy ez a 4 millird ve minden l sejtben, minden leszrmazottjban van. A msik alap bizonyossg, hogy a vz molekulk egytt az anorganikus elemekkel integrns rszei az el gpezetnek. Az l sejtekrl rt ezen tanulmnyom vgs sszefoglalsa kt rszbl ll. Elszr a sajt kutatsi eredmnyeimet, az egsz lettudomnyt, az l sejtrl szerzett tudsunkat alapveten rint 3 felfedezsemet foglalom ismtelten, nagyon rviden ssze. Utna az rksen felvetd krdsre, a NA DE MGIS, HOGYAN KELETKEZETT AZ LET? krdsre prblok vlaszt adni. I. A Sajt felfedezseim sszefoglal rtkelse: I./1.A gnek (DNS) nem frdenek egy 140-170 mmol/l K+-ion gazdag szabad elektrolit oldatban. Ltezik egy gn kzeli loklis szabad ion szint regull mechanizmus az l sejteken, ill. az l sejtek magjn bell. A loklis ion szint regull mechanizmus elsdlegesen az un. lazn kttt (loosely bound) sejtmag fehrjkhez kttt. I./2.Az l sejtek nem ionos detergensekkel trtn kezelse utn a sejtmagokat krlvev, azokat a krnyezethez kipnyvz fehrje hlzat, a detergens rezisztens cytoskeleton marad vissza. I./3.Egy j mdszerrel, a nem ionos detergens kezelst kveten az l sejtekbl az egyes sejtalkotk kiszabadulsnak idbeni kvetsvel (riliz kinetika) vgrvnyesen bebizonytottuk, hogy a klium (K) nem szabadon oldva, szabad ionknt van jelen az l sejteken bell. A sajt ksrleti eredmnyeim, felfedezseim alapjn llthat, hogy a szabad intracellulris oldat, cytosol a folytonos ketts lipoid rtegbe gyazott, pumpk, csatornk elmlettel, tves. Akrhny Nobeldjat adtak is ezrt az elmletrt, akrhny tmogat kzlemnyt is rtak s akrhny tanknyvben is szerepel tnyknt, nem maradhat fenn. Egyszeren azrt, mert nem igaz. Az l sejtrl srgeten igaz kpnek kell lenni minden embernek, a ma l mind a 6.5 millirdnak, mert nagy bajba kerlt az let a Fldn, s tletem szerint elsdlegesen azrt, mert hossz vtizedek ta

72

hamissgot, hamis elmleteket tnynek lczva tantottak az l sejtrl, de az emberi szemlyrl is. Kzben ahelyett, hogy minden ember rkapcsoldott volna az IGAZSGRA , az let forrsra Krisztusra, mg azok is eltvolodtak Tle, akik amgy keresztnynek/keresztynnek valljk magukat. II. A Na, de mgis hogyan keletkezett az let? krdsre adand vlasz: Az gy feltett krds az LET fogalomnak azt a jelentst rinti, ami az llnyek ltvilgt hatrozza meg. Az llnyek elklntse az lettelen anyagi vilg szereplitl ltalban knny. Lehet okoskodni, hogy a beszradt magvakat, a mlyfagyasztott sejteket, nvnyeket, llatkkat nehz llnyeknek tekinteni, mgis helyn val - ebben mindenki egyetrt - az lettelen anyagi vilgtl megklnbztetni az llnyek vilgt, az lvilgot. Ugyanakkor bizonyos, hogy llnyekben nincs semmi, ami nem anyagi. Az leter, a vis vitlis elmlet helytelensge rgta bizonytott. Ugyanazok az elemek, atomok, molekulk, ha eltr sszettelben, arnyban is, mint az lettelen anyagi vilgban, ugyanazt a trvnyi rendet kvetve ptik fel az llnyeket. Ebbl egy bizonyos, hogy az llnyek is a ltez anyagi vilg rszei, ahol egyedl a kutatsnak, a mrseknek, a ksrleteknek van kizrlagos kompetencija. A ltez anyagi vilg kizrlag az egzakt tudomnyos kutats tjn trulkozik fel, ismerhet meg. A kutats, amikor rk igazsgnak, tnynek trta fel, trja fel az llnyek anyagi sszettelt, azt is bizonytotta, bizonytja, hogy van elemi szervezdse az lvilgnak. Az lvilg cfolhatatlanul, rk rvnnyel igazolt elemi szervezdse az L SEJT. Aki ezt cfolni prblja, eltr az igasgtl, az lvilgra vonatkoz feltrt tnyektl. Mivel az lvilgra feltrt igazsg ppen az, hogy l sejt csak l sejtbl keletkezik, pont a tudomnyos kutats, a feltrt igazsgok vezettek el, vezetnek el az els l sejthez, a legsibb ssejthez. Ennl a bizonyossgnl, ennl az igazsgnl viszont nem megriadni kell, s gyorsan elmletet, elmleteket gyrtani, s ezltal a tudomny tudomnyossgt, az igazsgot lerontani, hanem a tudomny

73

sszes frumn s a tants minden szintjn hangosan kell kimondani, hirdetni, hogy ez rk igazsg.. Hangosan, tntorthatatlan meggyzdttsggel kell hirdetni tantani azt, hogy az els l sejtnek, a legsibb ssejtnek, Darwin elnevezsben a progenitornak a ltrejtte, ami az lvilg folytonos ltnek kezdete, az egzakt tudomny szmra, vagyis a tudomny eszkzeivel, mrsekkel, modellezssel, ksrleti megismtlssel SOHA NEM ISMERHET MEG! Prhuzamosan termszetesen annak a trvnynek az eredete sem ismerhet meg a tudomnyos kutats szmra, amely az egyszeri kezdetbl a folytonossgot, a kibontakozst, a megvalsulst vezrelte, vezrli. Teht a soha meg nem ismerhetsgi hatrnl nem lehet krdezni HOGYAN (?), MIRT (?), MIKOR (?), mert nincs rjuk tudomnyos, azaz a tudomny eszkzeivel megadhat vlasz. Senki se jelentkezhet, se professzori talrban, se pspki palstban, hogy tudja a vlaszt. Nem, a vlaszt a hogyanra, a mirtre, a mikorra soha senki nem tudhatja meg! Elmletek (hipotzisek) gyrtsa itt, a soha meg nem ismerhetsgi hatrnl, majd tnyknt, feltrt igazsgknt kezelse, tantsa volt, s ma is az emberisg legrtbb tette, struktrv vlt bne. Ugyanis rk igazsg, hogy van az ember szmra SOHA t nem lphet, SOHA meg nem ismerhetsgi hatr. Ennek elfogadsa tesz szabadd s erss, hogy a hamis elmleteket, a dogmkk vlt hamis elmleteket vgrvnyesen kiirtsuk az lettudomnybl. A hamis dogmk kiiktatsa srget, mert elvesznk! Ha nem rtjuk ki srgsen az lettudomnybl az igazsgnak, feltrt igazsgnak hazudott elmleteket, elvesznk, hamarosan lakhatatlann tesszk nmagunk szmra a Fldet!

74

IRODALOMJEGYZK
1. MOSS, W. RALPH: Free Radical Albert Szent-Gyrgyi and the Battle over Vitamin C, Paragon House, Publ. New York, (1988) 2. MOSS, W. RALPH: Szent-Gyrgyi Albert (magyar fordts) Typotex, Budapest, (2004)

3. SZENT-GYRGYI, ALBERT: Introduction to a Submolecular Biology, Academic Press, New York, (1960) 4. SZENT-GYRGYI ALBERT: The Living State, Academic Press, New York, (1972) 5. HILLMAN, H., and SARTORY, P.: The Living Cell, Packard Publ., Chichester, (1980) 6. DE ROBERTIS, E.D.P., and DE ROBERTIS, E.M.F.: Cell and molecular biology, 8th ed. Lea and Febiger, Philadelphia, (1987) 7. DARNELL, JAMES, LODISH, HARVEY and BALTIMORE, DAVID: Molecular cell biology, Scientific American Books, New York, (1986) 8. ALBERTS, BRUCE, BRAY, DENNIS, LEWIS, JULIAN, RAFF, MARTIN, ROBERTS, KEITH, WATSON D. JAMES: Molecular biology of the cell, 2nd. ed. Garland Publ., New York, (1989) 9. CZAK KLMN DNIEL: Biolgia, Egri nyomda, (1991)

10. GALL, G. JOSEPH: A Pictorial History, Views of the Cell, ASCB, Bethesda, (1996) 11. Ady Endre: A tz mrciusa, Ady Endre sszes kltemnyei, Szpirodalmi Kiad, Budapest, (1980) 12. ERNST JEN: Biofizika, Akadmia Kiad, Budapest, (1977)

13. FREY-WYSSLING, A.: Submicroscopic Morphology of Protoplasma, 2nd ed., Elsevier Publ., Amsterdam, (1953) 14. KELLERMAYER MIKLS: Az l sejtrl dikoknak, ISBN 963 7551 948, Kaposvr, (1989)

75

15. LING, N. GILBERT: In search of the physical basis of life, Plenum Press, New York, (1984) 16. HARRIS, HENRY: The birth of the Cell, Yale Univ. Press, London, (1999) 17. POLLACK, H. GERALD: Cells, gels and the engines of life, a new, unifying approach to cell function, Ebner and Sons Publ., Seattle, (2001) 18. LING, N. GILBERT: A physical theory of the living state, Blaisdell Publ. Co., New York, (1962) 19. LING, N. GILBERT: A revolution in the physiology of the living cell, Krieger Publ., Malabor, (1992) 20. LING, N. GILBERT: Nano-protoplasm: the ultimate unit of life, Physiol. Chem. Phys. and Med. NMR, 39, 111-234, (2006) 21. KELLERMAYER , M.: ATP-dependent co-compartmentation of proteins and K+ within the living cell. In: The Physical Aspect of the Living Cell. Tigyi J., Hazlewood, C. F., Kellermayer, M., eds., Akadmiai Kiad, Budapest, 165-180 old. (1991) 22. KELLERMAYER M., LUDNY, A., JOBST, K., SZCS, GY., TROMBITS, K., HAZLEWOOD, C. F.: Co-compartmentation of proteins and K+ within the living cell, Proc.Natl. Acad.Sci., USA, 83, 1011-1015, (1986) 23. COOPER M. GEOFFREY AND HAUSMAN E. ROBERT: The Cell-A Molecular Approach, 3rd ed., ASM Press, Washington, (2004) 24. DAWKINS, RICHARD: Folyam az denkertbl, Kulturtrade Kiad, (1995) 25. DARWIN, CHARLES: The origin of species by means of natural selection or the preservation of favoured races in the struggle for life, Penguin Books-Reprinted, (1985) 26. DARWIN, CHARLES: A FAJOK EREDETE termszetes kivlaszts tjn vagy a ltrt val kzdelemben elnyhz jutott fajtk fennmaradsa, Mikes Lajos fordtsa, Akadmiai Kiad, Budapest, (1955) 27. DARWIN, CHARLES: A FAJOK EREDETE termszetes kivlaszts tjn, Kampis Gyrgy fordtsa, TYPOTEX Kiad, Budapest, (2003)

76

28. DARWIN, CHARLES: Az ember szrmazsa s nemi kivlaszts (The descent of man and selection in relation to sex 1871), Katona Katalin ford., Gondolat Kiad, Budapest, (1961) 29. SCHRDINGER, ERWIN: What is life? The Physical Aspect of the Living Cell, University Press, Cambridge, (1948) 30. KELLERMAYER M., JOBST, K., ANGYAL, T.: Polarization-optical study of the ultrastructure of cell nuclei in tissue cultures, Acta Morph. Acad. Sci. Hung., 18, 131-137, (1970) 31. KELLERMAYER M., JOBST, K.: Isolation of cell nuclei in coverslip cultures, Beitr. Path., 142, 321-323, (1971) 32. KELLERMAYER, M., JOBST, K.: Characterization and differentation of nuclear chromatin structures by ion sensitivity, Acta Biol. Acad. Sci. Hung., 22, 321-329, (1971) 33. KELLERMAYER, M., SOMFAI, M., JOBST, K.: Determinitation of saline extractable material of HeLa cell nuclei, Cytobiologie, 11, 240-245, (1975) 34. KELLERMAYER, M., JOBST, K.: Ion-dependent anisotropy of deoxyribonucloprotein structures in tissue cultures, Exptl. Cell Res.: 63, 204207, (1970) 35. KELLERMAYER, MIKLS: Adatok az izollt sejtmagok chromatin structurinak felptshez. Az orvostudomny kandidtusa rtekezs, MTA, (1972) 36. DNA-Wikipedia, the free encyclopedia http://en.wikipedia.org/wiki/DNA Szphalom Knyvmhely,

37. HDVGI EGON, szerk.: A GENOM, Budapest, (2003)

38. HARRIS, HENRY: The cells of the body, A historry of somatic cell genetics, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, (1995) 39. Olins, A.L. and Olins, D.E.: Spheroid chromatin units (v bodies) Science, 183, 330-332, (1974)

77

40. KELLERMAYER, M., HAZLEWOOD, C. F.: Dynamic inorganic ionprotein interactions in structural organization of DNA of living cell nuclei, Canc. Biochem. Biophys., 3, 181-188, (1979) 41. KELLERMAYER, MIKLS: A lazn kttt sejtmagfehrjk biolgiai sajtossgai. Az orvostudomny doktora rtekezs, MTA, (1985) 42. KELLERMAYER, M.: Soluble and loosely bound nuclear protein sin regulation of the ionic environment in living cell nuclei. In: International Cell Biology, 1980-1981, Springer-Verlag, 915-924, (1981) 43. KELLERMAYER, M., OLSON, M.O.J., SMETANA, K., DASKAL, I., BUSCH, H.: Effect of various ionic media on extraction of soluble nuclear proteins and on nuclear ultrastructure, Exp. Cell Res., 85, 191-204, (1974) 44. KELLERMAYER, M., JOBST, K.: Cytoplasmic protein network in HeLa cells, Histochemistry, 44, 193-195, (1975) 45. OSBORN, MARY and WEBER, KLAUS: The detegent-resistant cytoskeleton of tissue culture cells includes the nucleus and the microfilament bundles, Exptl. Cell Res., 106, 339-349, (1977) 46. KELLERMAYER, M., TLAS, M., WONG, C., BUSCH, H., BUTEL, J.S: The solubility characteristies of SV40 tumor antigen, Exp. Cell Res., 99, 456-460, (1976) 47. KELLERMAYER, M., JOBST, K., SZCS, GY.: Inhibition of internuclear transport of SV-40-induced T-antigen in heterokaryons, Cell Biol. Int. Rep., 2, 19-24, (1978) 48. HARRIS, HENRY: Nucleus and cytoplasme, Claredon Press, Oxford, (1967) 49. HAZLEWOOD, F. C., ed.: Physical state of ions and water in living tissues and model systems, Annales of the New York Academy of Sciences, 204, 1-631, (1973) 50. DROST-HANSEN, WALTER and CLEGG JAMES: Cell-associated water Proceedings of a workshop on cell associated water held in Boston, Massachusetts, September, 1976, Academic Press, New York, (1979) 51. KELLERMAYER, M., ROUSE, D., GYRKEY, F., HAZLEWOOD, C.F.: Potassium retention in membraneless thymus lymphocyte nuclei, Physiol. Chem. Phys. and Med. NMR, 16, 503-511, (1984)

78

52. KELLERMAYER, M., LUDANY, A., MISETA, A., KSZEGI, T., BERTA, G., BOGNER, P., HAZLEWOOD, C.F., CAMERON, I.L., WHEATLEY, D.N.: Release of potassium, lipids and proteins from nonionic detergent treated chicken red blood cells, J. Cell. Physiol., 159, 197-204, (1994)

79