10.

poglavje:
BIOTRANSFORMACIJE

10.1. Uvod

Biotransformacijske reakcije so biokemijske reakcije, ki potekajo

na substratu s pomočjo mikroorganizmov ali nijovih encimov.

Primeri:
 oksidacije,
 redukcije,
 hidrolize,
 hidroksilacije,
 metilacije,
 tvorba C-C vezi,
 izomerizacije.

Biotransformacije lahko potekajo na naravnih

substratih ali na sinteznih spojinah. Osnove farmacevtske biotehnologije
Biokemijske (encimske) reakcije imajo prednost pred kemijskimi
rekcijami zaradi:
 večje reakcijske specifičnosti,
 večje regiospecifičnosti,
 večje stereospecifičnosti,
 milimi pogoji reakcije,
 znižanja aktivacijske energije.

Biotransformacijske tehnike lahko izvajamo z živimi celicami

mikroorganizmov, ali pa z izoliranimi encimi iz mikroorganizmov.
Pri tem lahko uporabimo fermentorski način pridobivanja ali pa
uporabimo imobilizirane celice ali encime.

Osnove farmacevtske biotehnologije

Najpogosteje uporabljani encimi pri
biotransformacijskih reakcijah
Tip encima Tip reakcije
lipaze Hidroliza estrov, aminoliza
esteraze Hidroliza estrov, tvorba estrov
proteaze Cepitev peptidne vezi
nitrilaze Hidroliza nitrilov
epoksid hidrolaze Hidroliza epoksidov
glikozidaze Tvorba oligosaharidov
dehidrogenaze Redukcija aldehidov, ketonov,
dvojnih vezi
enolat reduktaze Redukcija a, b-nenasičenih estrov
monooksigenaze Hidroksilacija, epoksidacija
dioksigenaze Dihidroksilacija aromatov
peroksidaze Peroksidacija, epoksidacija
Osnove farmacevtske biotehnologije
Najpogosteje uporabljani encimi pri
biotransformacijskih reakcijah-nadaljevanje

Tip encima Tip reakcije

aldolaze Aldolna rakcija
transketolaze Prenos keto skupine
Hidroksinitril liaze Tvorba cianohidrina
Glikozil transferaze Pripetje olikosaharidne vezi

Osnove farmacevtske biotehnologije

Biotransformacija s karboksi liazami

Osnove farmacevtske biotehnologije

Osnove farmacevtske biotehnologije
Biotransformacija kiralnih C-C spojin

Osnove farmacevtske biotehnologije

Biotransformacija pektinov

Osnove farmacevtske biotehnologije

10.2. Biotransformacija aminokislin

Veliko aminokislin, ki jih potrebujemo v farmacevtski in živilski

industriji, dobimo s hidrolizo proteinov, kemijsko sintezo ali z
biotransformacijo iz racemata. Tako pridobivamo predvsem L-
alanin, L-lizin, L-triptofan, L-fenilalanin in L-metionin.

Primer: Pridobivanja L-asparaginske kisline

H O
OH
HO Escherichia coli HO
OH
O
O H (Aspartaza, EC 4.3.1.1)
O NH2

fumarna kislina L-asparaginska

kislina

Osnove farmacevtske biotehnologije

10.3. Biotransformacija vitaminov
Večino vitaminov pridobivamo v farmacevtski industriji s kemičnimi
metodami, vitamin D dobimo iz holesterola s fotokemično metodo,
večino vitaminov skupine B izolirajo po fermentaciji iz kvasa, vitamin
C, vitamin K1, biotin in vitamin E, pa dobimo s pomočjo
biotransformacije.
Primer: Biotransformacija D-glukoze v L-askorbinsko kislino
A) CHO COOH COOH

H OH O O
Endogeni Reduktaze
HO H HO H HO H
Erwinia

=
H OH H OH H OH
encimi
H OH O HO H

CH2OH CH2OH CH2OH 2-keto-

L-glukonska
D-glukoza 2, 5 -diketo- (Corynebacterium)
kislina
D-glukonska
OH
kislina O

=
OH

HO O
OH HO
Osnove farmacevtske biotehnologije
 HO
B) OH O
HO
H OH
O
HO H
kemijsko HO H
Acetobacter
OH H OH
H OH suboxydans
OH OH HO H
H OH
OH
HO
D-glukoza HO D-sorbitol D-sorboza
H C
H3C 3
O O OH
O
kemijsko kemijsko OH
O

O HO O
O HO O OH HO
H3C
CH3 2-keto-L-glukonska kislina
Diaceton-2-keto-L-glukonska OH
kislina A)
H OH
kemijsko O
O

L-askorbinska kislina
HO OH
Osnove farmacevtske biotehnologije
10.4. Biotransformacija steroidov
Steroidi so pomembne zdravilne učinkovine in hormoni v človeškem
organizmu. Tako imajo androgeno, estrogeno, progestageno
delovanje, kot tudi mineralo- in gluko-kortikoidno delovanje. Kot
zdravilne učinkovine, pa jih uporabljamo kot:

protivnetne učinkovine,
anabolike,
sedative,
citostatike,
protihormone,
kontraceptive.

Osnove farmacevtske biotehnologije

Kot začetni material za pripravo steroidnih zdravilnih učinkovin
uporabljamo naravne prekurzorske spojine, ki jih izoliramo iz različnih
organizmov:

diosgenin (Dioscorea composita),

stigmasterol (iz različnih stročnic),
holesterol in deoksiholna kislina (iz živalskega žolča).

H3C

CH3
H CH3
CH3
H3C

H H

HO

H holesterol

Osnove farmacevtske biotehnologije

Leta 1952 so uspeli pripraviti prvo transformacijo na steroidnem
skeletu: na mesto 11 so spomočjo mikroorganizma Rhizopus
nigricans pripeli hidroksilno skupino na položaj  in dobili
kortikosteron. Nato so s pomočjo različnimi mikroorganizmi, v
kombinaciji s kemičnimi modifikacijami, uspeli pridobiti kortizon.

V biotransformaciji steroidov so najpomembnejše sledeče

mikrobiološke reakcije:
 11-  hidroksilacija (Rhizopus, Aspergillus)
 11-  hidroksilacija (Curvularia lunata)

Rhizopus sp. Curvularia lunata Aspergillus sp.

Osnove farmacevtske biotehnologije
 CH3
H3C H
O
OH
H3C H3C CH3
CH3 O
CH3 CH3
OH CH3
CH3 H CH3
O CH3
CH3
H H

HO
H HO HO

deoksiholna kislina diosgenin stigmasterol

H3C
5 stopenj O
CH3

CH3 H
26 stopenj
H H
mikrobiološko
O

O progesteron H3C
O
CH3 OH CH3
O HO
OH
CH3 CH3 H
7 stopenj
H H

O O

kortizon 11- hidroksiprogesteron

Osnove farmacevtske biotehnologije
Biotransformacija aromatičnih spojin

Osnove farmacevtske biotehnologije

Biotransformacija mentola z lipazami

Osnove farmacevtske biotehnologije

10.5. Biotransformacija ostalih farmacevtsko pomebnih produktov

(1R, 2S)-efedrin
OH
O
O H CH3
H Saccharomyces
+ CH3 cerevisiae, piruv. O
dekarboksilaza
benzaldehid acetaldehid (R)-fenil-acetilkarbinol

OH

katalitsko CH3
hidrogeniranje
CH3NH2 NH
H3C

(1R, 2S)-efedrin
Osnove farmacevtske biotehnologije
Pretvorba lucantona v hicanton (zdravilo proti parazitu Schistosoma
mansoni):

H3C
H3C

N
N

CH3
CH3 O NH
O NH

Aspergillus sclerotiorum

S
S

CH3 HO

lucanton hicanton

Osnove farmacevtske biotehnologije