INTERPRETASI

PEMERIKSAAN IMUNOLOGI

DASAR PEMERIKSAAN LABORATORIUM

IMUNOLOGI
1. Uji respon imunologik non spesifik
Macam :

2. Uji respon imunologik spesifik

3. Uji interaksi antigen-antibodi

1. Uji respon imunologik non spesifik

Seluler

Kuantitatif pe atau pe jumlah leukosit,

monositosis, eosinofilia

Kualitatif uji hambatan migrasi leukosit, uji

gangguan fagositosis, uji fungsi membunuh
mikroba

Humoral

Kadar CRP me > 100 x pd infeksi atau

kerusakan jaringan

Kadar komplemen C3, C4, faktor B, properdin

2. Uji respon imunologik spesifik

Seluler

1. Kualitatif uji transformasi limfosit (dg PHA &

con A)
uji sitotoksisitas
uji produksi limfokin
2. Kuantitatif tes rosette (Sebuah tes penapisan
kualitatif untuk mendeteksi signifikan-10foetomaternal perdarahan ml, dimana sel-sel
indikator bentuk yang mudah)

Humoral

Elektrpforesis protein
Imuno elektroforesis

Elektrpforesis protein

Imuno elektroforesis

3. Uji interaksi antigen-antibodi

1. Reaksi presipitasi

- utk antibodi/antigen terlarut

terbentuk presipitat (gumpalan)
- jml antigen & antibodi hrs
seimbang
2. Reaksi aglutinasi
- utk antibodi/antigen btk
partikel terbentuk aglutinasi
- jml antigen & antibodi hrs
seimbang
- m/ : Widal, gol darah, tes
kehamilan

3. Interaksi Antigen-antibodi tingkat

molekuler
- RIA (radio immunoassay) : penentuan
berdasarkan reaksi imunologi yg
menggunakan kit RIA (Contoh : utk
mendeteksi fs ginjal, fs tiroid)
- ELISA ( enzyme linked immunosorbent
assay) : deteksi patogen yg mendasarkan
pada reaksi antibodi & antigen (Contoh : utk
deteksi fs hati, fs trombositopenia, gangguan
fungsi hormonal)

RIA (Radio Immunoassay)

ELISA

Struktur Virion HIV

10

Susunan Gen
Berat molekul

Gen

Antigen

gp 160

ENV

bentuk polimer gp 41

gp 120

ENV

membran luar

p 66

POL

reverse transcriptase

p 55

GAG

precursor protein

p 51

POL

reverse transcriptase

gp 41

ENV

transmembran

p 39

GAG

fragmen p 55

p 31

POL

endonuclease

p 24

GAG

core protein

p 17

GAG

core protein
11

p 24 antigen

Merupakan alat laboratorium yang

berguna pada infeksi HIV untuk:

Prediksi HIV AIDS: rapid progressor

(Farzadegan et al., 1996).
Diagnosis, prognosis, monitoring terapi anti
retroviral, dan skrining bagi donor darah
sukarela (Arens, et al., 1997).
Skrining darah, identifikasi infeksi akut,
monitoring infeksi, deteksi infeksi, dan
pemeriksaan infeksi pada Bayi Baru Lahir
(Constantine, 2001).
12

Window period
Individu terinfeksi HIV tapi seronegatif thd
pemeriksaan antibodi HIV
Infeksi HIV dapat dideteksi selama
window period:

HIV-PCR deteksi asam nukleat:

Tdk dpt dikerjakan pad lab rutin

Peralatan canggih
Ketrampilan >>

Kultur HIV
Pemeriksaan p24 antigen
13

Deteksi p24 antigen

p24 antigen muncul secara karakteristik

pada fase awal dan akhir infeksi HIV:

Antigen ini muncul cepat setelah infeksi

replikasi awal virus dan level viremia
selama seseorang terkena infeksi.
Ketika antibodi HIV terdeteksi antigen p24
terdeteksi, dikarenakan adanya kompleks
antigen antibodi di dalam darah.
Jika p24 antigen terdeteksi pertanda infeksi.

14

Potentially cross reacting samples:

Wanita hamil
Penderita autoimmune disease
Sampel (+) utk IgM anti bodi thd:

Cytomegalovirus
Herpes simplex virus
Rubella virus
Toxoplasma gondii

Sampel (+) rhematoid factor

Hepatitis C virus antibody
Epstein-Barr virus capsid antigen antibody.
15

Sensitivitas pemeriksaan p24 antigen

Pemeriksaan standart:

Pemeriksaan ICD:

Neonatus umur 1 bln 0-20%

Umur 3 6 bln 55-75%
Dewasa asimtomatik 4%
Selama infeksi akut (sebelum serokonversi) 55-75%
Me sensitivitas 3-8 kali dibandingkan pemeriksaan standart
(Praharaj, et al., 2003).

Elisa gen ke4 (Saville et al., 2001):

100% high risk

99,7% low risk
16

Spesivisitas pemeriksaan p24 antigen

generasi ke3 & 4:

Gen 3
WEBER, et al., JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Apr. 2002.
17

ICD Nishanian et al., 1990:

1.

100L spesimen + 50L 0,5 N HCl

(pH 2,5-3,0)

2.

Inkubasi pada suhu 37C selama 1 jam

3.

Dinetralisasi dengan 50L 0,5 N NaOH

sampai pH 6,8 - 7,2.

4.

Kerjakan pemeriksaan p24 antigen.

18

Transmission of HIV Infection to

Neonates
A.

Methods of HIV vertical transmission

1.

Transplacental: 30-50%

2.

Intrapartum: 50-70%

3.

Breastfeeding
a.
b.

Mothers with established disease: 16%

Mothers who develop primary disease postpartum:
26%
19

Transmission of HIV Infection to

Neonates
B.

Risk Factors for HIV Vertical Transmission

1.

Neonate
a.
b.
c.
d.

2.

First born twin

Prematurity
Bacterial infection
Breastfeeding

Maternal
a.
b.
c.

New onset disease

Low CD4+ T-lymphocyte cell count (helper cells)
High CD8+ T-lymphocyte cell count (suppressor
cells)
20

Transmission of HIV Infection to

Neonates
B.

Risk Factors for HIV Vertical Transmission

2.

Maternal
d.

e.
f.
g.
h.
i.
j.

High viral load {elevated serum p24 antigen ICD),

elevated plasma HIV ribonucleic acid (RNA) and
increased circulating cell associated virus}
Rapid and efficient viral replication rate
T-cell line tropism
Chorioamnionitis
Prolonged/complicated labor
Mixing of maternal and fetal blood
On-going illicit drug use
21

Diagnosing HIV Infection in Neonates

Diagnostic testing should be performed

between:
1.

Birth and 48 hours

2.

One to two months of age

3.

Three to six months of age

22

Diagnostic Tests
A.

HIV Antibody by Enzyme Immunoassay

(EIA):

B.

This test is not adequate for differentiating

maternal versus newborn infection.

HIV Culture:

Not readily available, expensive to perform,

requires a large volume of blood, and
definitive results may not be available for two
to four weeks.

23

Diagnostic Tests
C.

HIV-p24 Antigen Assay:

Standard Assay:

The p24 Antigen (Ag) in the serum of neonates is

bound to maternal HIV antibody. This test is not
sensitive for the detection of HIV infection in
neonates.

ICD-HIV-p24 Assay (ICD):

If acid hydrolysis is used to interfere with antigenantibody complexes in the serum, then the
sensitivity of p24 can be increased and utilized as
an early diagnostic tool. One hundred percent
detection by one to three months of age.
24

Diagnostic Tests
C.

HIV-DNA-PCR
(polymerase chain reaction):

Is the preferred virologic method for

diagnosing HIV infection in infancy.

It is a highly sensitive and specific test, with

93% of infected neonates PCR positive by 14
days of life.

25

Diagnostic Tests
E.

HIV-IgA Antibody Test:

Maternal IgA antibodies do not cross the

placenta, therefore the detection of HIV
specific antibodies in the newborn serum
indicates presence of HIV infection.
This assay is sensitive after the third month
of life with 94% detection at six months and
100% detection at nine months (assay not
available for commercial use at this time).

26

Diagnostic Tests
F.

Immunologic Testing:
The following tests should be performed on all
neonates born to HIV positive mothers.

Lymphocyte subsets: CD4, CD8, and CD4/CD8 ratio

should be tested at one, three, and six months of age,
then every three months until HIV status of the neonate
is known. Monitoring should be performed on all
neonates who are HIV infected.
Quantitative immunoglobulin: IgG, IgM, and IgA
Skin tests performed later in infancy include: candida,
mumps, tuberculin skin test (purified protein derivativePPD)
27

28

Pemeriksaan laboratorium HIV

Biakan virus

Deteksi antigen:

Deteksi materi genetik:

p24

DNA provirus/RNA

Deteksi antibodi:

penyaring & konfirmasi

29

Berbagai teknik yang dipakai pada

pemeriksaan laboratorium infeksi HIV
(deteksi antigen/antibodi)

Aglutinasi

Enzyme immunoassay (EIA)

Dot blot immunoassay

Imunokhromatografi
30

Aglutinasi
Ag

partikel

Anti-HIV

31

Imunokromatografi
Koloid emas

Anti-HIV

32

Enzyme immunoassay (EIA)

Indirect EIA

Competitive EIA

Antigen sandwich EIA

Capture EIA

33

Indirect EIA
E

Anti-human Ig+enzyme

substrat

Anti-HIV

Ag

34

Competitive EIA

substrat
Anti-HIV+enzyme

E
Anti-HIV
Ag

Ag

Ag

35

Antigen sandwich EIA

HIV Ag + enzyme

substrat

Anti-HIV

Ag

Enzyme immunoassay (EIA)

36

Capture EIA

HIV Ag + enzyme

substrat

Anti-HIV

Anti-human Ig G / M

37

Perkembangan reagensia EIA

Generasi 1 : viral lysate

Generasi 2 : recombinant antigen

Generasi 3 : recombinant antigen &

synthetic peptide

Generasi 4 : antigen + antibodi

38

EIA generasi pertama

Dari biakan virus dalam jaringan/sel

Sensitivitas sangat tinggi

Spesivisitas rendah

Reaktif palsu >>, karena ada komponen

media (kultur jaringan/sel)
39

EIA generasi kedua

Menggabungkan potongan DNA HIV ke

untaian DNA suatu mikroba vehikulum
(Candida, E.coli), sehingga dihasilkan
antigen rekombinan

Spesifitas lebih tinggi daripada generasi

pertama, walaupun masih ada pengaruh
dari komponen vehikulum

40

EIA generasi ketiga

Antigen rekombinan ditambah dengan

peptida sintetik

Meningkatkan reprodusibilitas reagensia

Memperkecil kontaminasi oleh komponen

sel yang dipakai untuk vehikulum

41

EIA generasi keempat

Dapat mendeteksi baik antigen p24

maupun anti-HIV

Diharapkan dapat memperkecil window

period

Telah terbukti dapat menyaring individu

dengan antigen positif dan antibodi negatif
di populasi dengan prevalensi infeksi HIV
tinggi

Konfirmasi

42

EIA generasi keempat

anti-gp41, gp120, gp160
window

Kadar

anti-p24
p24

p24

minggu

tahun

infeksi
43

44

Konfirmasi
Generasi 1 3 : deteksi antibodi

Western Blot
Line Immunoassay
RIPA
Imunofluoresensi
45

Konfirmasi
Generasi 4 : deteksi antigen + antibodi

Western Blot
Line Immunoassay
RIPA
Imunofluoresensi

Ag Neutralisation, NAT

46

Kesimpulan

Pemilihan jenis reagensia harus

memperhatikan tujuan pemeriksaan,
banyaknya pemeriksaan, prevalensi
infeksi HIV populasi yang diperiksa dan
efisiensi yang diharapkan

Perlu diperhatikan pula kemungkinan jenis

pemeriksaan konfirmasi yang diperlukan
setelah penyaringan yang memberikan
hasil yang reaktif atau positif
47

Cara Pemeriksaan
WESTERN BLOT (WB)

Western Blot
Qualitative enzyme immunoassay
terhadap antibodi HIV-1 dan HIV-2
Spesifik
Mahal
Membutuhkan ketrampilan
Dapat menginterpretasi hasil

49

Prinsip dasar
Carik nitroselulosa dilekatkan dengan
antigenic protein dari HIV-1 yang sudah
dimurnikan dan specific HIV-2 synthetic
peptide dengan cara electrophoretic
blotting
Carik nitroselulosa diinkubasi dengan
serum / plasma pasien
Bila terdapat antibodi spesifik terhadap
HIV-1 dan / HIV-2 terjadi ikatan antigenantibodi

50

Anti-human Ig
Serum pasien
yang mengandung Ab

Substrat

+
+

+
Carik nitroselulosa
51

Yang perlu diperhatikan

Selalu kerjakan kontrol positif dan negatif

Jangan gunakan reagen dari kit dengan

no. lot yang berbeda

Simpan reagensia pada suhu 2-8C

52

Kriteria interpretasi
Organisasi

Kriteria

CDC

1 band ENV (gp41 dan

gp120/160) dan p24

WHO

2 band ENV

AFDA

p24 dan p31 dan gp41

atau gp120/160

American Red Cross

Masing masing 1 band

GAG, POL dan ENV
53

Interpretasi hasil

Lihat hasil carik kontrol positif dan negatif

Bandingkan hasil pasien dengan kontrol

positif dan negatif:

Reaktif
Non-reaktif
Indeterminate

54

Western blot
A. Positif untuk infeksi
HIV-1
B. Positif lemah untuk
infeksi HIV-1
C. Negatif

55

(+)

(+)

(-)

(-)

(+)

(+)

56

HIV-2 +

57