Masena spektrometrija

Analiza biolokih jedinjenja:

- proteini, mapiranje peptida, pripremanje
baze podataka proteina
- analiza peptida (disulfidne veze)
- nukleinske kiseline
- eeri
Analiza sintetikih polimera........

Razliiti elementi se mogu identifikovati na osnovu njihovih

atomskih masa
ee-

eprotoni

e-

neutroni

ee-

estica

masa, amu

naelek.

elektron

0.00055

-1

proton

1.0073

+1

neutron

1.0087

Razliita jedinjenja mogu biti razlikovana na osnovu

njihovih molekulskih masa

 Thomson, 1899-1911, Prvi maseni spektrometar

Dempster,1918, Elektronska jonizacija i fokusiranje u
magnetnom polju
Aston,1919,Odedjivanje atomskih teina upotrebom
MS
Stephens,1946, Time-of-flight masena analiza
Hipple, Sommer, Thomas,1949,Jon ciklotron
rezonancija

 Johnson , Nier,1953, Dvostruko-fokusirajui instrumenti

Paul, Steinwedel, 1953, Kvadrupolni analizatori
Beynon, 1956, MS visoke rezolucije
Biemann, Cone, Webster, Arsenault, 1966, Sekvenca
peptida
Munson, Field, 1966, Hemijska jonizacija
Dole, 1968, Elektrosprej jonizacija

 Beckey, 1969, Desorpcija poljem, MS organskih

molekula
MacFarlane, Torgerson, 1974, Desorpcija plazmom MS
Comisarow, Marshall, 1974, FT-ICR MS
Yost, Enke, 1978, Tripl kvadrupol MS
Barber,1981, Bombardovanje brzim atomima (FAB)
Tanaka, Karas, Hillenkamp,1983, Matriksompotpomognuta laserska desorpcija/ionizacija

 Fenn,1984, ESI biomolekula

Chowdhury, Katta, Chait,1990, Konformacione
promene proteina sa ESI MS
Mann and Wilm, 1991, Mikro ESI
Ganem, Li, Henion Chait and Katta,1991, ESI MS
nekovalentnih kompleksa
Pieles, Zurcher, Schar, Moser, 1993, Sekvenciranje
lanca oligonukleotida
Henzel, Billeci, Stults, Wong, Grimley, Watanabe,1993,
Proteinsko mapiranje

Nobelova nagrada za hemiju 2002.

John B. Fenn i Koichi Tanaka

Maseni spektrometar
To je instrument koji radi pri visokom vakuumu i razdvaja
naelektrisane estice u gasnoj fazi u skladu sa njihovim
odnosom masa/naelektrisanje.
Postoje razliiti tipovi masenih spektrometara.
Proizvode se sa razliitim tehnikama jonizacije i
analizatora masa.
Moe se analizirati iroki opseg masa:
od gasova i malih organskih molekula do velikih
biopolimera.
U nekim sluajevima dobijaju se dragocene informacije
o strukturi molekula.

Komponente masenog spektrometra

Jonski izvor

Analizator

Deo sa jonskim izvorom (sadri i ureaj za unoenje uzorka,

optiku)
Maseni analizator
(sadri optiku za jone,
elektrode, magnet, detektor)
Vakuum pumpa (gruba, visok
i ultravisok vakuum)
m/z
Kontrola svih delova pomou
Maseni spektar
softvera

Detektor
jona

Kompjuter

Masa
a.m.u.

m/z

u D (Da)

molekulska teina

odnos mase i naelektrisanja, Th (Thomson)

Naelektrisanje, z
Broj elementarnog naelektrisanja jona je obino 1
Izuzetak je kod elektron sprej generisanih jona |z| >> 1

Princip masene spektrometrije

Uzorak

+
_

Jonizator

Maseni analizator

Detektor

Tipini maseni spektar

aspirin

MASENI SPEKTAR VAZDUHA

Ubacivanje uzorka
Sistem visokog vakuuma

Inlet
Gasoviti
vrsti
Teni
GC
HPLC

Jonski
izvor

Maseni
analizator

Detektor

Data
sistem

Jonski izvor
Sistem visokog vakuuma

Inlet

Jonski
izvor
EI
CI
MALDI
ESI
FAB
LSIMS

Maseni
analizator

Detektor

Data
sistem

Jonizacija tvrda
ili meka?

Meka jonizacija?

PET NAINA FORMIRANJA

JONA
1. EI 70 EV
2. JON MOLEKULSKE REAKCIJE
3. DESORPCIJA POLJEM
4. LASERSKA DESORPCIJA
5. JONIZACIJA U SPREJU

Metode Jonizacije
Elektronska Jonizacija (EI tvrda metoda)
mali molekuli, 1-1000 Daltona, struktura
Bombardovanje brzim atomima (FAB tvrda metoda)
peptidi, eeri, iznad 6000 Daltona
Elektrosprej jonizacija (ESI meka metoda)
peptidi, proteini, iznad 200,000 Daltona
Laserska desorpcija potpomognuta matriksom
(MALDI-meka metoda)
peptidi, proteini, DNA, iznad 500 kD