BOYAMA

YNTEMLER

Dr. M. Altay ATALAY

Tbbi Mikrobiyoloji
Anabilim Dal
 RENM HEDEFLER
Bu sunumun sonunda renciler,
- Gram Boyamada kullanlan boyalar
sayabilecek, Gram pozitif /negatif bakteri
ayrmn yapabilecek
- EZN boyama ynteminde kullanlan
boyalar sayabilecek, ARB ayrmn
yapabilecek
- Dier boyama yntemlerini ve hangi
mikroorganizmalarla ilikili olduunu
sayabilecekler
 SUNU PLANI

Gram Boyama

Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN) Boyama

Dier Boyama Yntemleri

BOYAMA YNTEMLER

Basit Bileik
BAST BOYAMA:
* Preparatlardaki mikroorganizmalar
hakknda ksa sre iinde bilgi
edinmek iin tek boya solsyonu
kullanlr

* Boya, preparata bir defa uygulanr

*rnek; Sulu fuksin

Metilen mavisi
DFERANSYEL BOYAMA:

* Mikroorganizmalar birbirinden
ayrmada kullanlr

*rnek; Gram Boyama

Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN)
 STRKTREL BOYAMA:

Bakterilerin i ve d yaplar
hakknda bilgi edinmek iin
kullanlr (spor, kapsl, flagella,
ekirdek, lipid, v.s )
 TESPT(FKSASYON)
YNTEMLER

*Havada kurutularak (2-3 saat)

(Bunzen Beki)
*Alev
(Fazla olursa hcre yaps
bozulur bu da ok dekolorizasyona yol aar
*Etil alkol(8-10 dk)

*Metil Alkol (3dk)

(Konak hcreleri daha iyi grlr,
zemin daha temiz
*Aseton (floresan mikroskobu)
 GRAM BOYAMA
lk olarak ; 1884 ylnda
Hans Christian
Joachim Gram
tarafndan bu boyama
yntemi uygulam
1921 ylnda Huckers
tarafndan modifiye
edilmi
Neden Gram Boyama

Hzl, ucuz tan

Etken hakknda fikir verir (n
tan)
(Gram reaksiyonu,biim,
byklk, morfoloji)
Uygun antibiyotik seimi
Uygun besiyeri seimi
rnek kalitesini belirler
GRAM
BOYAMA
ncelenecek olan sv
rneklerden bir ze
dolusu alnr
Lam zerine yaylr
Lam havada kurutulur
Metil Alkol ile fikse
edilir veya alevden 3
kez geirilerek fikse
edilir
 GRAM BOYAMA
Lam zerine fikse
edilmi rnek zerini
kaplayacak miktarda
kristal violet boyas
dklr
1-2 dk beklenir
Kristal violet dklr ve
hafif akan musluk suyu
ile ykanr
 GRAM BOYAMA
Lgol solsyonu ile
lamn zeri kaplanr

1 dk beklenir

Lgol solsyonu
dklr ve hafif akan
musluk suyu ile ykanr
 GRAM BOYAMA
Dekolorizasyon iin lam
hafif eik tutularak aseton
alkolle ykanr lam
zerinden boya
akmadnda ykama
bitirilir
ale iindeki aseton
alkolde 5-10 sn kadar
bekletilir
Lam zerinde kalan alkol
musluk suyu ile ykanr
 GRAM BOYAMA
Lam zeri safranin veya
sulu fuksin ile kaplanr
30 sn kadar beklenir
Safranin dklr ve
hafif akan musluk suyu
ile ykanr
Lam havada kurutulur
GRAM BOYAMA

FX /KLAS/ Kurutma

Safranin
Kristal Lgol ya da
Viyolet Aseton
Alkol Sulu
1-2 dk 1 dk Fuksin
5-10 sn 30 sn
Gram (+) Gram (-)

X100
(immersiyon
objektif)
 GRAM BOYAMA
NOCARDA
MAYA veya
ACTNOMYCES
 Gram (+) ve Gram (-)
bakteriler arasndaki farklar
Gram (+) Gram (-)
Kaln Peptidoglikan nce Peptidoglikan
Karbohidrat Lipid
Teikoik asit var Yok
Mg ribonkleat var Yok
Protoplazma
pH pH
 Gram boyama yntemiyle
boyanamayan bakteriler:
Chlamydia Legionella
& pneumophilia
Ricketsia Fuksini zor ald iin

Zorunlu hcre ii ve
ok kk bakteriler Mycobacterium
olduklar iin Hcre duvarnda fazla
lipid ve mikolik asit
Treponema pallidum Mycoplasma
& &
dier spiroketler Ureoplasma
ok ince olduu iin
Hcre duvarlar olmad iin
 Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN)
Boyama
Mycobacterium'larn hcre eperinde bol
miktarda uzun zincirli ya asitleri ve
mikolik asit vardr, bunlar geleneksel
boyama yntemleri ile boyanmazlar

Boyay alabilmeleri iin alttan s tatbiki

gerekir
 Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN)
Boyama
Preperat hazrlanr, kurutulur ve tespit
edilir
 Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN)
Boyama
Btn lam kaplayacak
tarzda karbol fuksin
solsyonu konur
Lam alttan 4-5 dakika ve
aralkl olarak hafife stlr
Preparatn yanmamasna ve
kabarcklarn kmamasna
dikkat edilir (preparat
zerinden hafif buharlar
kabilir)
Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN)
Boyama
Karbol fuksin
boaltlr su ile
ykanr
Preparat asit-
alkolde (% 96 etil
alkol + % 3-4 HCI
asit) dekolorize
edilir (5sn)
Su ile ykanr
Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN)
Boyama
Preparat zerine metilen mavisi
solusyonu konur ve 1dk beklenir
(Renk krl olanlarda malait
yeili)
Boya dklr ve su ile ykanr ve
kurumaya braklr
Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN)
Boyama
Mikobakteriler veya
asidorezistans
mikroorganizmalar
pembe krmz
renkte ve dier
mikroorganizmalar
ise mavi renkte
grlrler
 Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN)
Boyama

Fx / K A M / Kurutma
Karbol Metilen
Fuksin Asit Alkol Mavisi

(4-5 dk) (5 sn) (1 dk)

 EZN ile POZTF BOYANAN
MKROORGANZMALAR
Bakteri Parazit
Nocardia Cyclospora
Rhodococcus Cryptosporidium
Tsukamurella
Isospora
Gordonia
Legionella Sarcocystis
micdadei
ookistleri
Saccharomyces (askospor) Mantar

Gram

Nocardia

EZN

HCl yerine (%1)Slfrik asit

(H2SO4)
 Auramin - Rhodamin ile Boyama
Yntemi
Mycobacterium tansnda

Floresan mikroskobu
kullanlr

Koyu zeminde bakteriler

turuncu ya da parlak sar
grlr
 Kapsl Boyama

Hiss Yntemi:
Tyler Yntemi:
ini Mrekkebi:
 Spor Boyama

Malait yeili ile

Boyama:

Schaffer Fulton Y:
 Kirpik (Flagella) boyama

Leifson Metodu
 Metakromatik Cisimcikleri Boyama
Yntemi
Metakromatik cisimcikler bata
Corynebacteriumlar olmak zere baz bakterilerin
hcre yapsnda bulunurlar

Metilen Mavisi Neisser

ile Boyama Boyama
Yntemi Yntemi
 Riketsiya ve Klamidiyalarn
Boyanmas
Castaneda
Boyas:

Macchiavello
Boyas:
 Mantarlarin Boyanmas

Gram boyama:

Laktofenol Pamuk
Mavisi Boyama :

ini Mrekkebi:
 Giemsa Boyama:
Giemsa daha ok parazitolojik
inceleme amacyla kullanlr
Plasmodium
Pneumocystis jiroveci
(Malarya=Stma)
Dier Boyama Yntemleri
Bakteri DNAsn
boyamak iin en fazla
Fulgen Metodu
kullanlr

Kuduzdaki Negri
cisimciini gzlemek
iin Seller Metodu
kullanlr
 TEEKKRLER

18.10.2017 46
almadan, renmeden,
yorulmadan rahat
yaamann yollarn
aramay alkanlk haline
getirmi milletler, evvela
haysiyetlerini, sonra
hrriyetlerini ve daha
sonra da istikballerini
kaybetmeye
mahkmdurlar