IV Veba: Laboratorijska

dijagnoza infekcija izazvanih

gljivama

Svrha vebe
Izbor, uzimanje i obrada klinikog materijala
Dijagnostike metode i identifikacija
uzronika
Gljive koje izazivaju infekcije oveka
morfoloki se javljaju u obliku:

1. Kvasnice
2. Plesni

3. Bifazne gljive
Na osnovu lokalizacije uzronika mikoze
delimo na:

1. Superficijalne mikoze
2. Supkutane mikoze
3. Sistemske mikoze
 Metode pregleda klinikog materijala
Nativni preparat FR, hlorlaktofenol, KOH,
laktofenol koton-plavo, tu preparat
Bojeni preparat PAS, GMS, mucikarmin po
Mayeru, kalkofluor-belo
Kultivisanje gljiva
Podloge Sabouraud dekstrozni
agar/bujon, GACA, MSIA, podloga za
inhibiciju rasta plesni
Uslovi kultivisanja 26C, 37C, kvasnice 7
dana, plesni i do 21 dan
 Metode pregleda klinikog materijala

Ispitivanje fizioloko-biohemijskih osobina

API 20 C AUX, API ZYM
Seroloke i molekularne metode
ELISA, imunofluorescencija, PCR
Ispitivanje osetljivosti gljiva na antimikotike
(antimikogram)
a. Agar difuzioni
b. Dilucioni
c. E-test
 1. Laboratorijska dijagnoza
dermatomikoza

DERMATOMIKOZE
Superficijalne i kutane mikoze izazvane:

1. Dermatofitima
2. Kvasnicama Candida
3. Druge bolesti koe i dlake pitirijaza (Malassezia)
 Malassezia spp. - M. furfur i dr.
Pityriasis versicolor

Promene na neosunanoj Promene na osunanoj koi

koi
 Malassezia spp.
Pityriasis versicolor

Uzimanje materijala Skreping - direktan

preparat sa LCB
Malassezia pachydermatis (Saburo) M. furfur (mDixon)
 Dermatofiti
Striktno patogene gljive iz grupe plesni u
koje spadaju tri roda:
1. Trichophyton spp.
2. Microsporum spp.
3. Epidermophyton spp.
Keratinofilna i keratinolitika svojstva: obrasla i
neobrasla koa, dlake, nokti
In vivo (keratinizirana tkiva) artrospore
(artrokonidije) i hife
In vitro (kultura) makrokonidije, mikrokonidije,
hife
 Uzorak
Aseptini uslovi, crne koverte, ree staklene
posude
Strugotine promena sa koe i noktiju: kirete,
skalpel
Dlake: pincete, makaze; Wood-ova lampa
 Pravilno uzimanje uzoraka
http://medicalmycology.org/dermapak.htm

direktni preparat
kultura
Dermatofiti laboratorijska dijagnoza

Wood-ova lampa
 Metode pregleda
1. Direktno mikroskopsko ispitivanje
HLF, 10-25% KOH, LCB
2. Izolacija
SDA, SDA sa hloramfenikolom i
cikloheksimidom
26C 2-3 nedelje
3. Identifikacija
kultura, makrokonidije,mikrokonidije,
hife, FB testovi
Odnos gljivinih elemenata prema dlaci

ectothrix

endothrix

ectothrix endothrix Favus

favus
Onychomycosis
 Duboke trihofitije

Kerion Celsii Sycosis barbae

 Trichophyton mentagrophytes

Herpes tonzurans Superficijalna trihofitija

 T. mentagrophytes

Kultura Preparat sa kulture

 Trichophyton schoenleini
Favus

Favus kapilicijuma Gljivini elementi u dlaci

 T. schoenleini

Kultura Preparat sa kulture

 Microsporum canis

Mikrosporija kapilicijuma (kosopasica)

M. canis kultura

Makrokonidija (EM)
 Epidermophyton floccosum

Kultura Preparat sa kulture

Candida spp (C. albicans i dr.)
Superficijalna kandidoza
 Candida spp.
Onychomycosis
 Candida spp.
Mukokutana kandidoza
 Candidosis laboratorijska dijagnoza

10% KOH PAS kultura

Laboratorijska dijagnoza
sistemskih mikoza
 Uzronici sistemskih mikoza

Candida spp.
Cryptococcus spp.
Aspergillus spp.
Pneumocystis carinii
Bifazne gljive
Drugi
 Sistemske mikoze:

Imunokompromitovana stanja
Terapija antibioticima
Terapija kortikosteroidima
Teki operativni zahvati
Metaboliki poremeaji
AIDS
I drugo...
 Laboratorijska dijagnoza kandidize
Uzorak zavisi od klinike slike
Metode pregleda
1. direktno mikroskopsko ispitivanje
direktan nativni preparat (FR),
fluorescentno bojenje, IF, PH
Nije mogua krajnja identifikacija u veini sluajeva!!!
2. izolacija SDA i dr.
Mogua krajnja identifikacija !!!
 Laboratorijska dijagnoza kandidize

SDA kultura Candida spp. Preparat sa kulture

 Laboratorijska dijagnoza kandidize
3. identifikacija
ispitivanje asimilacije i fermentacije API 20 C AUX
testovi za razlikovanje C. albicans od ostalih vrsta
a. test germinacije
b. test stvaranja hlamidospora
Cryptococcus neoformans - cryptococcosis
 Laboratorijska dijagnoza kriptokokoze
Uzorak sputum, trahealni ispirak, pleuralni
eksudat, likvor, krv, urin, bioptat
Metode pregleda
direktan nativni preparat (blastospore)
direktan tu preparat (kapsula)
kultivisanje: Sabouraud belokrem kolonije
GACA braon kolonije (melanin)
testovi asimilacije
dokazivanje Ag
patohistoloki preparati (bojenje po Mayeru)
Laboratorijska dijagnoza kriptokokoze

Kultura SDA Tu preparat - kapsula

GACA - melanin
Laboratorijska dijagnoza kriptokokoze

HP plua - Mucikarmin HP plua - PAS

 Aspergillus spp.

Aspergiloza: A. fumigatus, A. niger, A. flavus...

ubikvitarne, imunodeficijentni pacijenti
bronhopulmonalna aspergiloza
aspergilloma
otomycosis
sinusitis
diseminovani oblik
alergije (mikoalergoze)
aspergilotoksikoze (aflatoksin)
 Aspergiloze

Aspergiloza plua Keratitis

 Laboratorijska dijagnoza aspergiloze
Uzorak zavisi od klinike slike
Metode pregleda
direktan preparat septirane hife
kultivisanje septirane hife, konidiofore,
vezikula, fijalide, fijalokonidije
dokazivanje Ag

Kultura preparat sa kulture

 A. niger

Nativni preparat sa kulture (HLF) elektronska mikroskopija

 Penicillium spp.
Penicilioza
mikotini keratitis
otomycosis
sistemska penicilioza (plua)

Kultura Preparat sa kulture (HLF)

 Pneumocystis carinii
Laboratorijska dijagnoza:
Uzorak BAL, sputum (retko pozitivan)
Metode pregleda bojeni preparat Giemsa,
Nalaz oktetne ciste
Kultivisanje ne radi se rutinski
PCR
 Pneumocystis carinii

BAL - bojenje po Giemsa: oktetne ciste