IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ

DIJAGNOSTICI

•Razvoj imunoloških tehnika počinje 1960.aplikacijom RIA

(Radioimmunoassay)tehnike

•RIA tehnika koristi radioaktivne izotope kao obilježivače.

•Iznos mjerene radioaktivnosti je proporcionalan

koncentraciji mjerenog parametra.
 IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI
 Nekompetitivna “sendvič”tehnika :
Iznos radioaktivnog J125 proporcionalan je koncentraciji
mjerenog analita,
 Kompetitivna “sendvič”tehnika :
Koncentracija mjerenog analita je obrnuto proporcionalna
iznosu radioaktivnog J125 .
IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI
 IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI

 RIA je i danas još uvijek u upotrebi,zbog određivanja vrlo

niskih koncentracija mjerenog parametra.
 Međutim,zbog korištenja i izlaganja radioaktivnim
materijalima, RIA se danas manje koristi od ostalih
imunohemijskih metoda nazvanih
ELISA(Enzyme Linked Immunoassay).

U ovu skupinu ubrajaju se :

 FPIA (Fluorescence Polarization Immunoassay),
 MEIA (Microparticle Polarization Immunoassay),
 CMIA (Chemiluminiscent Magnetic Immunoassay)
IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI

 EIA tehnika koristi enzim kao obilježivač.

 Najčešći enzimski obilježivači su :alkalna fosfataza,
peroksidaza i ß-galaktozidaza.
 EIA tehnika koristi promjenu intenziteta obojenja,
emisiju svjetlosti,ili neki drugi signal.
 ELISA tehnika predstavlja aplikaciju heterogenog
“sendvič” testa,kombinaciju reagensa enzim-
antitijelo,sa antitijelom vezanim na čvrstoj fazi.
 IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI
 FPIA(Fluorescence Polarization Immunoassay)
predstavlja tip homogenog kompetitivnog fluorescentnog imunoeseja.
 Antigen iz uzorka i reagens, koji sadrži antigen – fluorescein (Ag-F) takmiče se
za vezujuća mjesta na antitijelu.
 Ova tehnika se koristi za određivanje koncentracije lijekova ,droga i hormona
 IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI

 FPIA tehnika koristi tri ključna koncepta za mjerenje specifičnih

analita:

› FLUORESCENCIJU
› ROTACIJU MOLEKULA U RASTVORU
› POLARIZIRANU SVJETLOST.
 IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI

 FLUORESCENCIJA: Fluorescein je fluorescentni obilježivač.

Apsorbira svjetlosnu energiju na 490nm i oslobađa ovu energiju
na višoj talasnoj dužini(520nm), kao fluorescirajuću svjetlost.
IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI
 ROTACIJA MOLEKULA U RASTVORU
 Velike molekule rotiraju se sporije od malih molekula.

 Ovaj princip se može iskoristiti za razlikovanje malih

antigen-fluorescein molekula-AgF,koje brzo rotiraju od
velikh kompleksa AgF,koje sporo rotiraju u rastvoru.
 IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI

 POLARIZIRANA SVJETLOST:
 Fluorescentna polarizacija razlikuje antigen-fluorescein (AgF)
od kompleksa antitijelo-antigen-fluorescein (Ab-AgF).
 Male molekule AgF apsorbiraju polariziranu svjetlost i rotiraju
se brzo,prije nego što se emituje svjetlost kao fluorescencija.
 Ab-AgF kompleks rotira sporije,jer je veća molekula i
apsorbiranu polariziranu zraku svjetlosti će osloboditi
kao polariziranu fluorescenciju.
 IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI
 Ova svjetlost se oslobađa na istoj ravni,kao i apsorbirana
svjetlosna energija,pa je zbog toga detektor može mjeriti.
 FPIA tehnika na ovaj način inverznom krivuljom određuje
koncentraciju mjerenog analita,niže vrijednosti će dati veći
mjerni signal,a više vrijednosti manji.
IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI
IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI

 Microparticle Enzyme Immunoassay-MEIA

 Ova metoda uključuje:

› Antitijela vezana na mikropartikle na čvrstoj fazi,

›Alkalna fosfataza-enzim konjugat sa antitijelom,

›Enzim supstrat:4-Metil umbeliferon fosfat(MUP),

koji reaguje sa kompleksom enzim-antitijelo.
IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI
 IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI

 CHEMIFLEX® tehnologija omogućava preciznije određivanje i

produženu linearnost mjerenog parametra.

 Ova tehnika je redizajnirana,usavršena varijanta CMIA

(Chemiluminiscent Magnetic Immunoassay).

 Kemiluminiscent je konjugiran na antitijelo, ili antigen i

produkuje svjetlost u kombinaciji sa supstratom.

 U slučaju ABBOTT ARCHITECT ®, obilježivač je patentirani

derivat akridiniuma,koji emitira svjetlost jakog intenziteta i
tako daje visoku osjetljivost mjerenja.
IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI

 Prikaz CHEMIFLEX tehnologije

IMUNOHEMIJSKE TEHNIKE U LABORATORIJSKOJ
DIJAGNOSTICI