Professional Documents
Culture Documents
HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
HPLC
13. HPLC
(HIGHPERFORMANCE
(HIGH PERFORMANCELIQUID
LIQUIDCHROMATOGRAPHY)
CHROMATOGRAPHY)
May 18, 2020 1
What Is High Performance Liquid Chromatography (HPLC)?
The acronym HPLC, coined by the late Prof. Csaba Horváth for his 1970
Pittcon paper, originally indicated the fact that high pressure was used to
generate the flow required for liquid chromatography in packed columns. In
the beginning, pumps only had a pressure capability of 500 psi [35 bar].
This was called high pressure liquid chromatography, or HPLC. The early
1970s saw a tremendous leap in technology. These new HPLC
instruments could develop up to 6,000 psi [400 bar] of pressure, and
incorporated improved injectors, detectors, and columns. HPLC really
began to take hold in the mid-to late-1970s. With continued advances in
performance during this time [smaller particles, even higher pressure], the
acronym HPLC remained the same, but the name was changed to high
performance liquid chromatography.
HPLC Column
H GAS
CAIRAN
tR1
Respon detektor
W1/2 1 W1/2 2
Wb 1 Wb 2
waktu
2 t R 2 - t R1
R
1,699 W1/2 1 W1/2 2
Jika R = 1,5 kedua zat terlarut itu dapat dikatakan
terpisahkan dengan sempurna; hanya akan terjadi 0,3%
tumpang tindih dari kedua pita elusi. Jika R = 1 pemisahan
akan memadai untuk kebanyakan analisis; tumpang tindih
kira-kira akan sebesar 2%. Dengan mengecilnya R menjadi
kurang dari 1, tumpang tindih itu menjadi makin parah,
sehingga kira-kira pada R = 0,75 (50% tumpang tindih),
pemisahan itu menjadi tidak memuaskan bagi kebanyakan
maksud.
May 18, 2020 9
Faktor Pemisahan
Jika usaha yg logis untuk mencapai pemisahan dgn
menyempit agar berpisah lebih jauh, dengan mengubah nilai
K untuk zat terlarut. Angka banding waktu-waktu retensi tR2 /
tR1, disebut faktor pemisahan, S (beberapa menggunakan
lambang SF atau untuk angka banding ini). Biasanya
angka banding waktu retensi kira-kira sama seperti angka
banding nilai K untuk kedua zat terlarut.
tR 2 K2
S
t R 1 K1
Perhatikan bahwa S tidak sama dengan pemisahan R.
Angka banding waktu retensi, yg diukur pada puncak-puncak
(dari) pita elusi, tidaklah dgn sendirinya memberikan
keefektifan pemisahan, karena tidak mengatakan apapun
mengenai
May 18, 2020 lebar pita. 10
Faktor – Faktor Retensi
VR t R v
Identification
6
Menuju
Kolom 5
Drain
INJECTION VALVE
May 18, 2020 24
INJECT
Sampel
2
6 4
Menuju
Kolom
5
Drain
INJECTION VALVE
May 18, 2020 25
LOAD
Sampel
Menuju
Kolom
Drain
INJECTION VALVE
May 18, 2020 26
INJECT
Sampel
Menuju
Kolom
Drain
INJECTION VALVE
May 18, 2020 27
(polyetheretherketone)
Normal-Phase Chromatography
Reversed-Phase Chromatography