TRANSKRIPCIJA

OPŠTI PREGLED TRANSKRIPCIJE

• Transkripcija DNK je ključni korak u prenošenju

informacije sa DNK do proteina
• Podrazumeva sintezu RNK kao kopije ograničenog
ragiona DNK , koju katalizuje enzim RNK polimeraza
• Kod Prokariota transkripcija se odigrava u isto vreme sa
translacijom, a kod Eukariota ova dva procesa su
prostorno i vremenski odvojena
• Radi lakšeg izučavanja, transkripcija je podeljena u 3
faze: inicijacija, elongacija i terminacija
• Transkripcija se odvija u 5’-3’ smeru, a ribonukleotidi se
međusobno povezuju 3’-5’ fosfo-diestarskim vezama
 rastući RNK lanac

RNK
formiranje polimeraza
fosfodiestarske
veze

ribonukleotid trifosfat

5’-3’ pravac
polimerizacije

matrični lanac DNK

 RNK nukleotidi

RNK polimeraza

3’

5’

pravac transkripcije

5’ matrični lanac DNK

novosintetisana RNK
PROKARIOTE EUKARIOTE

DNK
DNK
transkripcija
transkripcija pre-mRNK
mRNK
obrada
polipeptid
translacija
mRNK

translacija

polipeptid
 GEN

promotor RNK kodirajuća sekvenca terminator nematrični lanac

5’ 3’
DNK
3’ 5’
matrični lanac
mesto otpočinjanja
mesto završetka
transkripcije
transkripcije
 TRANSKRIPCIJA KOD PROKARIOTA
STARTNI SIGNAL

matrični DNK lanac

•PROMOTOR-DVA NIZA OD 6
NUKLEOTIDA, PRVI- UZVODNO NA -35
NUKLEOTIDA OD MESTA POČETKA
TRANSKRIPCIJE TTGACA I DRUGI,
PRIBNOVLJEV BLOK , NA -10
NUKLEOTIDA, TATAAT

RNK polimeraza
-
RNK POLIMERAZA

• RNK polimeraza se sastoji od 6 subjedinica: alfa 1, alfa 2, beta, beta

prim, omega i sigma.
• Sigma subjedinica je odgovorna za specifično prepoznavanje
određenog niza u sastavu promotora

HOLOENZIM
1. INICIJACIJA TRANSKRIPCIJE- vezivanje RNK polimeraze za
promotor. Odvija se u dve faze:
• Prva faza je vezivanje RNK polimeraze za dvolančanu DNK, za
heksanuklotid na poziciji -35 od mesta početka transkripcije
• Druga faza je lokalna denaturacija DNK pomoću enzima
helikaze, počev od pozicije -10 u dužini od 17 nuklotida, posle
čega se oslobađa sigma subjedinica
2. ELONGACIJA-produžavanje transkripta. Brzina transkripcije 20-
50 nuklotida/sek. Faza elongacije traje sve dok RNK polimeraza
ne stigne do signala za terminaciju-terminatora.
3. TERMINACIJA TRANSKRIPCIJE- sinteza niza od nekoliko
URACILA naspram niza od nekoliko ADENINA u matrici. Ovaj
niz se nalazi neposredno iza jednog simetričnog, palindromskog
niza u kome su nuklotidi, čitano sa dva kraja u suprotnim
pravcima, međusobno komplementarni. Invertovani ponovak koji
nastaje u novosintetisanoj RNK stvara zavojnicu u vidu ukosnice
(engl. Hair-pin) koja je signal za završetak transkripcije i olakšava
odvajanje RNK od DNK.
 promotor RNK kodirajuća sekvenca
RNK polimeraza zatvoren promotorski kompleks

 faktor
-35 -10 inicijalni nukleotid

otvoren promotorski pravac transkripcije

kompleks

RNK/DNK hibrid
oslobadjanje
faktora

elongacija RNK lanca

promotor RNK kodirajuća sekvenca

TERMINACIJA TRANSKRIPCIJE
segment sa
dvostrukom
simetrijom
DNK

RNK
transkript

formiranje
terminalne
petlje + faktor
 OBRADA TRANSKRIPATA KOD
PROKARIOTA

Kod Prokariota nema obrade iRNK transkripata.

Obrada tRNK sastoji se u modifikaciji pojedinih baza

(metilovanje) i dodavanja CCA na 3’ kraj.

U slučaju rRNK , obrada se sastoji u isecanju 16S, 18S i 5S RNK

iz nascentnog molekula koji je sintetisan u okviru jedne
transkripcione jedinice.
 TRANSKRIPCIJA KOD EUKARIOTA

• U eukariotskim ćelijama postoje 3 RNK

polimeraze: RNK polimerazaI, RNK polimeraza
II i RNK polimeraza III
• Kompleksni enzimi izgrađeni od 12-17
subjedinica koje prepoznaju različite promotore i
transkribuju različite gene
• Sve tri polimeraze imaju u svom sastavu 5
subjedinica prokariotske RNK polimeraze,
evolutivno konzerviran deo enzima
 RNK polimeraze u eukariotskoj ćeliji
lokalizacija produkti

RNK pol I nukleolus 28S , 18S , 5.8S rRNK

RNK pol II nukleus iRNK i neke snRNK

RNK pol III

nukleus tRNK , 5S rRNK i neke snRNK
 PROMOTOR

TATAAAA
5’ 3’
3’ 5’
ATATTTT
GC CAAT
-90 -75
TATA box matrični lanac DNK
-30
transkripcioni
faktor
TATAAAA
5’ 3’
3’ 5’
ATATTTT

transkripcioni faktori

TATAAAA
5’ 3’
3’ 5’
ATATTTT

RNK polimeraza II
 II D

TATA box DNK

početak transkripcije

RNK polimeraza II
TF IIB + TF IIF
II D
II B II F

TF IIE + TF IIH
II D II B
II F

II H II E
kompletni inicijalni
transkripcioni kompleks
 TRANSKRIPCIONI FAKTORI (TF)
RNK POLIMERAZE II
• 1979. Robert Roeder, ustanovio da RNK poli. II može da započne
transkripciju samo u prisustvu transkripcionih faktora. Za razliku
od sigma faktora RNK pol. Prokariota, TF eukariota nisu
asocirani sa RNK polimerazama.
• RNK polimeraza II može da otpočne transkripciju u prisustvu
najmanje 5 TF (rekonstrukcija transkr. u in vitro sistemu
nemoguća bez 5 TF).
1. TF II D- ima 2 subjedinice TBP (TATA binding proteins) i TAF-s
(vrše kontrolu TBP proteina)
2. TF II B- vezuje se uzvodno od TATA box-a u istom promotoru
3. TF II F- ima ulogu u ubrzavanju procesa polimerizacije
4. TF II E –pospešuje katalitičku aktivnost TF II H
5. TF II H- helikaza, direkno u vezi sa TF II E, koji pospešuje
katalitičku aktivnost TF II H. Ima i kinaznu aktivnost, fosforiliše
C terminalni deo polimeraze II
OBRADA PRIMARNIH TRANSKRIPATA
PRE iRNK
kovalentnim modifikacijama
DODAVANJE ‘’KAPE’’ NA 5’ KRAJ pre iRNK
• Enzim koji katalizuje ovu
reakciju je guanin-7- metil
transferaza
• Dodavanje 5’ kape stabilizuje
iRNK molekul
• PPP olakšava proces inicijacije
translacije
POLIADENILACIJA 3’ KRAJA pre iRNK

• Kada se traskripcija završi,

endonukleaza hidrolizuje
primarni transkript u dužini od 15
nukleotida nizvodno od signala za
poliadenilaciju, a to je AAUAAA.
• Zatim, enzim polidenilatna
polimeraza dodaje poli A rep na
3’ kraj transkripta ( od 50-250 A u
zavisnosti od vrste)
• Uloga- u obradi transkripta
isecanjem introna I transport
zrelih i RNK iz jedra u citoplazmu
 jedinica transkripcije
egzon 1 intron egzon 2
DNK
5’ lider 3’
transkripcija

egzon 1 intron egzon 2

m7GpppN1
3’
(Cap) 5’
hn RNK (primarni transkript)
egzon 1 intron egzon 2
m7GpppN1
OH
5’ 3’
pre-m RNK
egzon 1 intron egzon 2
m7GpppN1 AAAAA….
5’ 3’
poly(A) rep
isecanje introna
egzon 1 egzon 2
m7GpppN1 AAAAA….
5’ 3’
zrela m RNK
OBRADA TRANSKRIPATA
ISECANJEM INTRONA
•Granice između egzona i
introna su karakteristične
stukture. Početak svakog
Introna na 5’ kraju GU a na 3’
kraju AG. Oni su signali za
isecanje.
•Jedinica isecanja introna se
naziva SPLAJSOZOM.
•U formiranju splajsozoma
učestvuju sn RNK čestice 50-
60S slične ribozomima, čine ih
sn RNK i proteini, ima ih više
klasa i poznate su
kao U-RNK.
U1- komplementarne su
graničnim nizovima introna
U2-nizovima unutar introna
U4-signalu za poliadenilaciju
U5-3’ krajevima introna
 Hemijska reakcija transesterifikacija

pre-mRNK

zasecanje na 5’
egzon-intron granici

zasecanje na 3’
egzon-intron granici

2’ - 5’
 Autokatalitička obrada RNK

• Kod protozoe Tetrahymena thermophila ustanovljeno je da RNK može

imati katalitičku aktivnost. Kod ove protozoe, obrada primarnog
transkripta za rRNK vrši se bez prisustva proteina.
• Autokatalitički se obrađuju i primarni transkripti u jedrima,
mitohondrijama i hloroiplastima mnogih drugih eukariota
• Introni sadrže jedan karakterističan niz -interni vodič, koji se
komplementarno sparuje sa egzonom i određuje mesto gde će se
transkript iseći.
• Ovaj vid obrade transkripata odvija se u dve faze i na veoma sličan
način kao isecanje introna iz jedarnih primarnih transkripata, što
ukazuje na zajedničko poreklo svih mehanizama za obradu
primarnih transkripata
 RNK POLIMERAZA I

• Primarni transkript je 45 S pre rRNK koja nakon obrade daje 28S

rRNK, 18 S rRNK i 5.8 S rRNK
• RNK polimeraza I je karakteristična za svaku biološku vrstu
• Promotor za koji se vezuje ova polimeraza se nalazi 150 bp uzvodno
od mesta početka transkripcije. Promotor perpoznaju dva TF:
• - UBF (upstream binding factor) i SL 1 (selektivni faktor, od 4
subjedinice od kojih je jedna TBF).
• Ova dva faktora formiraju inicijalni kompleks i omogućuju
vezivanje RNK polimeraze I
 repetitivna jedinica ribozomske DNK

transkripciona jedinica ribozomske DNK

DNK

gen za gen za
18S gen za 5,8S 28S

transkripcija
45S pre-rRNK

41S pre-rRNK

20S pre-rRNK 32S pre-rRNK

28S rRNK
18S rRNK
5.8S rRNK
 RNK POLIMERAZA III

• Produkti delovanja su tRNK, 5S rRNK i sn RNK

• Ovaj enzim se vezuje za 3 različita promotora u zavisnosti od
produkta
• Najbolje su proučeni geni za 5S rRNK. Prvi otkriveni TF bio je
karakterističan za ovaj gen, TF III A koji se prvi u nizu vezuje za
promotor koji je postavljen intragenski , unutar jedinice
transkripcije. Potom se vezuju i TF III C, TF III B i na kraju sama
polimeraza III.
• Promotor za tRNK nema učešća TF III A, već se TF III C vezuje za
promotor, a potom TF III B i polimeraza III.