TÁCH CHIẾT

ANTHOCYANIN TỪ GẠO
ĐEN HỮU CƠ
CBHD: HUỲNH LIÊN HƯƠNG
CÁC HÓA CHẤT SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU

 Các hóa chất sử dụng:

 Ethanol tuyệt đối
 KCl
 CH3COONa.3H2O.
 HCl, DPPH, Ascorbic axit
CÁC THIẾT BỊ SỬ DỤNG

 Cân phân tích

 Máy cô quay
 Bể điều nhiệt
 Máy quét quang phổ
 Máy xay nghiền
TÓM TẮT NỘT DUNG KHẢO SÁT
VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU

Hoạt
Định tính
Dịch trích
lượng kháng
oxi hóa
MỘT SỐ TÍNH CHẤT CÓ THỂ KHẢO SÁT

 Sự biến đổi ở các pH khác nhau

 Sự ảnh hưởng của nhiệt độ
 Hoạt tính kháng oxi hóa trước và sau cô quay
CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DÙNG
TRONG THÍ NGHIỆM

 Định lượng Anthocyanin bằng phương pháp pH vi sai (the pH

differrential method – AOAC 200502).
 Thử hoạt tính kháng oxy hóa và xác định giá trị IC50 của
Anthocyanin bằng phương pháp bắt gốc tự do DPPH (Kirby and
Schmidt (1997), đựơc bổ sung chỉnh sửa bởi Haji (2010)).
CÁCH XÁC ĐỊNH ĐƯỜNG CHUẨN VITAMIN C

 Cách dựng đường chuẩn Vitamin C:

 Pha dung dịch vitamin C theo các nồng độ sau: 0, 0.025,
0.05; 0.01, 0.25; 0.5 (mg/ml). Dùng micropipet hút 50 µl
mỗi nồng độ vào các ống nghiệm đã chứa sẵn 2ml dung
dịch DPPH. Ủ trong tối 15 phút ở nhiệt độ phòng.
  So màu ở bước sóng 517 nm.
  
XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ANTHOCYANIN
TỔNG

 Chuẩn bị dung dịch đệm

 Pha buffer pH = 1. Cân 1,86g KCl cho vào becher 1 lít, thêm nước
cất để hòa tan KCl. Đo pH và chỉnh về pH 1 bằng HCl đậm đặc
37%. Sau đó chuyển vào bình định mức và định mức bằng nước cất.
 Pha buffer pH = 4,5. Cân 54,43g CH3COONa.3H2O cho vào becher
1 lít, thêm 960 ml nước cất để hòa tan CH3COONa.3H2O. Đo pH và
chỉnh về pH 4,5 bằng HCl đậm đặc (37%). Sau đó cho vào bình
định mức và định mức bằng nước cất.
XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ANTHOCYANIN
TỔNG

 Chuẩn bị mẫu đo
 Cho 9 ml dung dịch đệm pH 1 vào ống nghiệm 1, tiếp tục cho 1ml
dịch trích ly, lắc đều, để yên 15 phút. Sau đó đem đo quang tại 2
bước sóng λmax = 535 nm và λ = 700 nm.
 Làm tương tự cho ống nghiệm 2 với 10 ml dung dịch đệm pH 4,5
và 1 ml dịch trích ly.
 Cho mẫu vào máy đo quang và đọc kết quả.
XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXI HÓA

 Chuẩn bị dung dịch DPPH:

 Dung dịch DPPH: Cân 2,364 mg DPPH định mức bằng methanol
thành 1000 μl được dung dịch trữ DPPH 6.000 μM. Lấy 500 μl
dung dịch trữ định mức thành 50ml dung dịch DPPH 60 μM (dung
dịch làm việc).
 Dung dịch làm việc của mẫu có nồng độ 50 mg/ml.
 Dung dịch Ascorbic acid có các nồng độ 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,75
(mg/ml).
XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXI HÓA

 Chuẩn bị đường chuẩn Ascorbic acid:

 Dùng micropipet hút 50 μl mỗi nồng độ vào các ống nghiệm đã chứa sẵn 2 ml
dung dịch DPPH.
 Lắc đều các dung dịch trên. Ủ trong tối 15 phút ở nhiệt độ phòng. Đo độ hấp thu
ở bước sóng 517 nm.
 Đối với mẫu nghiên cứu, pha loãng tới nồng độ thích hợp (nồng độ chất nghiên
cứu có phản ứng màu nằm trong khoảng tuyến tính của đường chuẩn) rồi làm
thí nghiệm như trên. Kết quả được đánh giá thông qua giá trị IC50 (Inhibitory
concentration) là nồng độ chất chống oxy hóa cần để ức chế (trung hòa) 50%
gốc tự do DPPH trong khoảng thời gian xác định.
XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXI HÓA

 Quy trình khử hoạt tính ức chế gốc tự do: