ELISA

(Enzyme-linked
immunosorbent
assay )

Nurminha
Pelatihan Imunologi
Unair
 Immunoassay

• Pengukuran analit (hormon, antibodi dlsb)

dengan menggunakan antibodi yang
berikatan secara spesifik dengan antigen,
seperti kunci dan anak kunci.
• Berkembang sejak ditemukan antibodi
monoklonal
• Dapat mengukur analit dengan kadar yang
rendah (pg, ng)
 Antigen I Antibody I
X x X x
Y y Y y
Z z Z z
Z
Antigen II Antibody II
Y
V v X x
W w w
X x v

Figure 1. Kompleks dua antigen yang memiliki satu

epitop yang sama (X) dan berbagai macam antibodi
yang mungkin terbentuk
Prozone, Equivalent zone, Post zone,
Tak ada presipitasi Presipitasi Tak ada presipitasi

Figure 2. Berbagai macam rasio Ag – Ab dan

implikasinya
= ANTIBODI
= ANTIGEN
 Equivalent zone
• The formation of immune complexes produces
a visible reaction that is basis of precepitation
and agglutination tests.
• Agglutination and precipitation are maximized
when multiple Antibody molecules share the
binding of multiple antigenic determinants, a
condition known as equivalence.
• In vivo: precipitation of complexes form blood
is critical to the trapping of invaders and the
initiation of the immune response in the
secondary lymphoid organs.
 Acute Hepatitis B
www.themegallery.com

Ab excess: Late in infection

Ag excess: Early in infection

Equivalence: All available Ag

complexed with Ab = Window
Period
 Antigen-Antibody Interaction

Epitop = antigen determinant. Interaction of

antigen and antibody occurs in vivo, and in
clinical settings it provides the basis of all
serological based tests.
Affinity
Avidity
Specificity
Sensitivity
3. Imunoasai Enzim (EIA)
BERBAGAI MACAM EIA :
A. EIA yang HOMOGEN; label berbeda sifat
tergantung pada keadaan reagensianya
TERIKAT/TIDAK pada lawan reaksinya
→ TAK MEMBUTUHKAN PEMISAHAAN
B. EIA yang HETEROGEN; label TAK berbeda
sifat baik reagensinya dalam keadaan terikat maupun
BEBAS pada lawan reaksinya → PERLU
PEMISAHAAN bag. terikat dari yang bebas
 TYPES OF ELISA

 INDIRECT ELISA

 DIRECT ELISA NON -COMPETETIVE

ELISA
 SANDWICH ELISA

 COMPETETIVE ELISA
Uji ELISA
Ag dlm serum

SUBSTRAT
BERKROMOG
EN

Ag berlabel
Ab pada enzim
Fase padat PRODUK
berwarna

Gambar 22. Prinsip dasar uji ELISA kompetitif

COMPETETIVE ELISA

 COMPETETIVE ELISA

Solid phase coated with antibody

Add unknown amount of unlabeled

antigen and known amount of labeled
antigen

Free and labeled antigen are captured

Color formation by oxidation of substrate

into a colored compound

Under standard condition ,the enzyme activity measured is proportional to the

proportion of labeled antigen in the mixture of labeled and unlabled antigen.
 ADVANTAGES:

 Suitable for complex (crude or impure) samples, since

the antigen does not require purification prior to
measurement.

 DISADVANTAGES

 Each antigen may require a different method to couple it to

the enzyme.
 COMPARISON BETWEEN VARIOUS TYPES OF ELISA

Direct ELISA Indirect ELISA Sandwich ELISA Competitive ELISA

 Ab II berlabel
Ag enzim
SUBSTRAT
Ab I pada berkromogen
Fase padat
PRODUK
berwarna

Gambar 23. Prinsip dasar double antibody sandwich ELISA

  SANDWICH ELISA
1. a. Plate is coated with suitable antibody.
b. Blocking buffer is added.
2. Sample is added to plate so antigen is bounded by capture antibody.
3. A suitable biotin labeled detection antibody is added to plate.
4. Enzyme HRPO is added and binds the biotin labeled detection antibody.
5. TMB substrate is added and converted by HRPO to colored product.

Under standard condition ,the enzyme activity measured is proportional to the Amount of
specific antigen in the original serum.
 MATERIALS NEEDED FOR ELISA KIT

 ELISA Plate

 Positive control

 Negative control

 Dilution Buffer

 Conjugate

 TMB Substrate

 Stop Solution
 PROCEDURE OF ELISA

A B C D E

Wash Wash Wash Wash

3X 4X 4X 4X

Wells are Diluted 0.1 μg of Add 1.2000 Alkaline phosphatase

coated with plasma biotinylated dilution of substrate is added
0.2 μg is added to (biotin = – ) streptavidin and developed colour
primary coated wells, antihuman conjugate to is read at 405 nm
antibody which bind secondary alkaline wavelength to
to antibodies antibody phosphatas measure plasma
e cencentration
( E)
2h 2h
1h
Incubated Incubated at room temperature (24˚C)
overnight at
4˚C
 FINAL PLATE OF ELISA
 ELISA data is typically graphed with Optical density Vs Log concentration to produce
a sigmoidal curve.

 Known concentrations of antigen are used to produce a standard curve and then this
data is used to measure the concentration of unknown samples by comparison to the
linear portion of the standard curve.

 This can be done directly on the graph or with curve fitting software which is
typically found on ELISA plate readers.
 Ab Anti –Ig berlabel
enzim SUBSTRAT
Ag pada berkromogen
Fase padat

PRODUK
berwarna
Gambar 24. Prinsip dasar uji ELISA tak
langsung
 INDIRECT ELISA

 Antigen is added to plate.

 Added Blocking buffer.

 Suitable primary antibody is added.

 Secondary antibody- HRPO is then

added which recognizes and binds to

primary antibody.

 TMB substrate is added, is converted

to detectable form.

 Under standard condition ,the enzyme activity measured is proportional to

amount of specific antibody in the original serum.
 ADVANTAGES OF INDIRECT DETECTION
 Wide variety of labeled secondary antibodies are available commercially.

 Versatile, since many primary antibodies can be made in one species and the
Same labeled secondary antibody can be used for detection.

 Immunoreactivity of the primary antibody is not affected by labeling.

 Sensitivity is increased because each primary antibody contains several

epitopes that can be bound by the labeled secondary antibody, allowing for
signal amplification.

 DISADVANTAGES OF INDIRECT DETECTION

 Cross-reactivity may occur with the secondary antibody, resulting in
nonspecific signal.

 An extra incubation step is required in the procedure.

 15

Direct
method
• Primary antibody labeled

• Advantage:

• Fast

• Specific

• Disadvantage:

• Need large amount

of primary antibody antigen
  DIRECT ELISA

1. Apply a sample of known antigen to

a surface.

2. Enzyme linked primary antibody is

applied to the plate.

3. Washed, After this wash, only the

antibody-antigen complexes remain
attached.

4. Apply a substrate which is

converted by the enzyme to elicit a
chromogenic signal.

 Under standard condition ,the enzyme

activity measured is proportional to
amount of specific antibody in the
original serum.
 COMPARISON BETWEEN VARIOUS TYPES OF ELISA

Direct ELISA Indirect ELISA Sandwich ELISA Competitive ELISA

I RIA
/

Diagram

0
0 0
OOo
0
0
0
Mtigen
,1s1 Analyki
( Substme

./)
11
~
c;
conJugat

J
Jr
Primar
e
0 y Sec_ondary antibody
OO O Antibo Primary
.
&.condar
dy
y
Antibody
antibody
Step 1. Add Step 2. Md Stwp3.Md (Precipitofin conjugate
known of radioocti"l'!t
q
~
bvffe.r amounts g]
to loo fubss. unlabeledb ihe,
aniig,,n antigen
The,;,;,
mildi.ire. to ihs mi,:iure.
oompeie·for ihe Direct EUSA lndifeclELISA
From the data,
bindir-.g sites ol
the
a ;stardard ( Substrate
binding curve can be
aniibodi&s. drown. The 1,0mploo
to bs assayed (the
o-\. o unknowns]
000 a r1:1 run in parallel.
,,,4 After det&rmining ihe

O! rofio of bound to free

antigen in eeeh

y-O
Ship 4. Add Srap 5. Rodioac~ve Stwp 6. Thi
unknown, ihe
antigen
ooncentrafons
ibod
y
foced arnountof aniig,,n i~ dispkJcsd ontibody• can be read directly
antibody to loo from the antibody bouoo antigeo is from
tubas, mdeculas by ihe sspomted from loo ihe, itandard curve.
unlobel.!d aniig&n. free antigen in

I \.
Precipitots ~<ib
oompl!!xes with PEG
$&:
:: ondory an1ibody.
ihe supemobnr
fluid ord the
radioactivity of
~~Capture antibody

eceh i$
meesured. S:andwich OompemeELJSA
ELllS-A
  ELISA RESULTS

The ELISA assay yields three different types of data output:

 Quantitative: ELISA data can be interpreted in comparison to a standard

curve in order to precisely calculate the concentrations of
antigen in various samples.

 Qualitative: ELISAs can also be used to achieve a yes or no answer

indicating whether a particular antigen is present in a sample,
as compared to a blank well containing no antigen or an
unrelated control antigen.

 Semi-quantitative: ELISAs can be used to compare the relative levels of antigen

in assay samples, since the intensity of signal will vary
directly with antigen concentration.
 IMUNOASAI
(PEMERIKSAAN SEROLOGI)
 Serologi
• Suatu ilmu yang mempelajari cara mendeteksi suatu
infeksi di dalam serum pasien, misalnya adanya antibodi
(Ab) spesifik terhadap mikroba tertentu

• Uji serologi didasarkan atas ikatan spesifik antara antigen

(Ag) dan antibodi (Ab)
 Ag yang telah diketahui akan bereaksi/berikatan dengan
Ab yang belum diketahui di dalam serum
 Sebaliknya Ab yang telah diketahui dapat digunakan untuk
mendeteksi Ag dalam serum pasien

• Reaksi Ag-Ab dapat diamati atas terbentuknya presipitasi,

aglutinasi atau dengan bantuan label tertentu, misalnya
label radioaktif, label enzims dll
2. Komponen yg terpenting dalam serologi yaitu
ANTIBODI

Fc

-S-S-
-S-S- -S-S-
Fab
Regio
variabel

L H L H
Gambar 1. Struktur dasar dari molekul antibodi
L = Light Chain H = Heavy chain
Beberapa Istilah penting dlm Imunoasai
a. Spesifitas dari Ab
Ikatan Ab-Ag adalah spesifik seperti kunci-anak
kunci. Reaksi silang dapat terjadi dengan struktur
mol Ag lain yang mirip dengan Ag pasangannya
tergantung dari :
- profil spesifitas Ab-nya &
- kemurnian Ag-nya

Ab yang amat spesifik = Ab dengan binding sites

yang hanya dapat mengikat Ag dengan struktur
molekul yang unik/tertentu saja.
 Antigen I Antibodi I
X x X x
Y y Y y
Z z Z z

Z
Antigen II Antibodi II
Y
V v X x
W w w
X x v

Gambar 2. Kompleks dua antigen yang memiliki satu

epitop yang sama (X) dan berbagai macam antibodi
yang mungkin terbentuk
b. Ukuran kuantitas Ab

Ada beberapa cara tentukan konsentrasi Ab dalam

serum.

- Kualitatif pos. /neg.  adanya perubahan fisik dari

bahan pemeriksaan. (+/-)
- Semi kuantitatif ; ditentukan dengan pengenceran
serum secara progresif  Titer (1/10, 1/100, 1/640)
- Kuantitatif ; ditentukan dengan menggunakan
beberapa sera baku  kurva baku. Akurasi dicek
dengan serum kontrol. (100 pg/mL, 2 μL/mL)
Hasilnya diinterpolasi ke dalam kurva baku.
OD

0 5 g/dl
Kadar Bahan
Gambar 3. Kurva baku uji ELISA
FAKTOR-2 DASAR YG MEMPENGARUHI IMUNOASAI

1 Sifat dari Ag. Ab diberi nama sesuai dengan cara

penentuan yang paling sens. Mis : aglutinin, presipitin
dll
2 Elektrolit dan pH
3 Waktu dan suhu. Reaksi Ag-Ab terjadi dalam 2 tahap
a. Ikatan spesifik Ab dg Ag/Hapten yang sesuai
b. Terjadi reaksi yg dapat dilihat (presipitasi dll)
4 Mekanisme Daya Tahan Nonspesifik
Bahan yg normal/abnormal terdapat dalam
sekret/cairan tubuh.
5 Rasio Ag dan Ab
prozone postzone
Prozone, Equivalent zone, Post zone,
Tak ada presipitasi Presipitasi Tak ada presipitasi

Gambar 4. Berbagai macam rasio Ag – Ab dan

implikasinya
= ANTIBODI
= ANTIGEN
BAHAN PEMERIKSAAN UTK IMUNOASAI

MACAM BAHAN : serum , plasma, css

Usahakan jangan hemolisis
Inaktivasi C  56°C, 30 menit

Ag untuk Imunoasai. Sebaiknya dibuat

sendiri dari strain lokal, lebih baik yang
multistrains.
IMUNOASAI
KADAR BAHAN

RENDAH ( ng/ml, pg/ml ) TINGGI (mg/ml,ug/ml)

Hasil reaksi tak tampak Hasil reaksi DAPAT

DILIHAT
 Presipitasi/RID
FAKTOR PENGUAT (LABEL)
 UJI AGLUTINASI

IF RIA EIA ICA

Homogen Heterogen
= ELISA
 JENIS IMUNOASAI
Ada 2 jenis imunoasai.
I. IMUNOASAI TAK BERLABEL
II. IMUNOASAI BERLABEL

I. IMUNOASAI TAK BERLABEL

 UJI PRESIPTASI
 UJI AGLUTINASI
 UJI FIKSASI KOMPLEMEN
 UJI NETRALISASI TOKSIN
II. IMUNOASAI BERLABEL
1. CAT FLUORESENS: IF
2. RADIOISOTOP: RIA
3. ENZIM: IMUNOASAI ENZIM ( EIA )
A. EIA HOMOGEN
B. EIA HETEROGEN (ELISA)
C. UJI IMUNO-PEROKSIDASE
4. EMAS KOLOIDAL:
ASAI IMUNOKROMATOGRAFIK (ICA)
1. IMUNOASAI FLUORESENS (IF)
Mikroskop
Fluoresens
CUCI
Ab diket berlabel cat
fluoresens
Ag tak diket.
Fiksasi pada
slide

Kompleks Ag-Ab
Berfluoresensi
Gambar 18. Prinsip dasar uji imunofluoresens
langsung (direct).
 Cuci AHG dilabel
Fluorescein

Ab tak
Ag diket. diket Kompleks Ag – Ab Cuci
tak tampak

Mikroskop
Fluoresens
Kompleks Ag – Ab – AHG
berfluoresensi
Gambar 19. Prinsip dasar uji imunofluoresens
tak langsung (indirect).
An example of direct and indirect immunofluorescence
testing.

Fig. 17.15 Immunofluorescence testing

KELEMAHAN UJI IF
 Peralatan canggih dan mahal

 Perlu tenaga terlatih

 Per hari maks 25 slide / analis

 Sukar dibuat otomatis

 Pelaksanaan agak kompleks & membosankan

2. Uji RIA
R
R R
R
R
R RR
R

Radioisotop : 3H Thymidin, 131 I

Radiation
Gambar 20. Prinsip dasar Uji RIA
Counter
R = label radioisotop
 R R
R R
R
R
R Cuci

RADIATION
COUNTER

Gambar 21. Prinsip dasar Uji RIA kompetitif

KELEMAHAN UJI RIA

 Butuh alat mahal & tenaga terlatih

 Waktu paruh reagens amat pendek ( 1,5 – 2 bln )

 Perlu perlindungan khusus pd petugas lab.

 Perlu tempat pembuangan reagens yang khusus

 ELISA
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
• Prinsip dasar Elisa adalah pemakaian enzim
untuk mendeteksi adanya ikatan Antigen-
Antibodi (Ag:Ab)

• Enzim akan merubah (mengkonversi)

substrate yang tidak berwarna (kromogen)
menjadi produk berwarna yang
mengindikasikan adanya ikatan Ag:Ab
 Ab Anti –Ig berlabel
enzim SUBSTRAT
Ag pada berkromogen
Fase padat

PRODUK
berwarna
Gambar 24. Prinsip dasar uji ELISA langsung
 Direct ELISA
• Untuk mendeteksi Ab

Enzim: AK (Alkalin fosfatase) atau HRPO (Horse Raddish

Peroxidase)

Substrate : TMB (Tetra methyl benzidine) atau NPP (p-

nitrophenyl phosphate)
 Ab II berlabel
Ag
enzim
SUBSTRAT
Ab I pada berkromogen
Fase padat
PRODUK
berwarna
Gambar 23. Prinsip dasar (tak langsung)
double antibody sandwich ELISA
 Indirect ELISA (Sandwich ELISA)
• Untuk mendeteksi adanya antigen (Ag)
 ELISA

Antibodi dilapiskan pada dasar sumuran

Bahan yg diperiksa ditambahkan → terjadi

reaksi Ag-Ab

Ditambahkan anti-antibodi ( Mo anti-Ab)

berlabel BIOTIN (biotinylated)

Ditambahkan streptavidin berlabel enzim

Ditambah kromogen → Warna, diukur secara

kolorimetri memakai Elisa-reader
Uji ELISA
Ag dlm serum

SUBSTRAT
BERKROMOGEN

Ag berlabel
Ab pada
enzim PRODUK
Fase padat
berwarna

Gambar 22. Prinsip dasar uji ELISA kompetitif

An example of the indirect and capture ELISA methods.

Fig. 17.16 Methods of ELISA testing.

CONTOH APLIKASI KLINIS
SEROLOGI TEST

1. Sifilis
2. Demam tifoid
3. Tuberkulosis
 SIFILIS
Paling Ideal ; Ig. M- ELISA ( Dx, keaktivan,
mengikuti hasil Rx )

Di Indonesia ; TPHA  Dx
VDRL  Aktivitas &
mengikuti hasil Rx
Neurosyphilis : VDRL  Dx
Jumlah sel Keaktivan &
Protein Total mengikuti hasil Rx
 UJI SEROLOGI DEMAM
TIFOID
1. TES WIDAL
2. TES IgM Salmonella
3. ELISA
4. BIAKAN / KULTUR DARAH
UJI WIDAL (AGLUTINASI)
Dari hasil 1X tes belum dapat ditarik kesimpulan yang berarti.
Perlu ulangan setelah 5-7 hari

Harga normal tes Widal tabung.

Aglutinin O : 1/160 Aglutinin PA : 1/80
Aglutinin H : 1/160 Aglutinin PB : 1/320
Vaksinasi; aglutinin H dapat dipertahankan beberapa
tahun,

Antibiotika ; dapat memperlambat kenaikan titer

 INDIKASI SEROLOGI TB
• INDIKASI:
1. BTA DAHAK NEGATIF
2. TB EKSTRAPULMONUM
3. TB ANAK
4. SPESIFISITAS:
– TGT JENIS ANTIGEN (REAKSI
SILANG)
5. KONTROVERSI KARENA:
– Kurang pemahaman patogenesis
– Bersikukuh pada Postulat Koch
 Lateral flow immuno assay
LATERAL FLOW IMMUNOASSAY

66
 CONTOH PARAMETER
PEMERIKSAAN SEROLOGI
CRP = Protein C reaktif
- Suatu alfa globulin yg ada di serum pd inflamasi
- Suatu reaktan fase akut, indikator non spesifik
inflamasi yg berhbgn dg imunologi
- Tidak dipengaruhi oleh anemia, kehamilan,
hiperglobulinemia
- serial, utk indeks aktivitas penyakit dan
monitoring terapi
 FAKTOR
REMATOID
Antibodi
Rheumatoid
factor

•Poliklonal antibodi
•Antibodi IgG dalam kelas IgM
•Kadar IgM terbesar, bisa dideteksi oleh alat
•Antibodi terhadap determinan antigenik pada fragmen Fc immunoglobulin

Sumber: PKB PK,2002 68

ELISA DIRECT,
ELISA INDIRECT,
ELISA
SANDWICH
Dosen Pengampu : Nurminha, M.Sc.
 Pokok Pembahsan :

01 02 03 04
PENGERTIAN ELISA DIRECT ELISA INDIRECT ELISA SANDWICH
01
Pengertian ELISA
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
adalah salah satu metoda dalam bidang imunologi
untuk mengetahui ekspresi protein, reaksi imunitas,
respon imun. Teknik ini digunakan untuk
menentukan adanya antigen atau antibodi dalam
sampel/serum.

ELISA juga suatu teknik biokimia yang

dikembangankan berbagai bahan baik human, rat,
tumbuhan dan lain lain yang juga berfungsi sebagai
alat diagnostik dalam bidang medis maupun non
medis misalnya industri.
 PRINSIP ELISA

Sejumlah antigen yang tidak dikenal ditempelkan pada

suatu permukaan, kemudian antibodi spesifik dicucikan
pada permukaan, kemudian antibodi spesifik pada suatu
permukaan tersebut, sehingga akan berikatan dengan
antigennya. Antibodi ini terikat dengan suatu enzim, dan
pada tahap terakhir, ditambahkan substansi yang dapat
diubah oleh enzim menjadi sinyal yang dapat dideteksi.

Dalam ELISA fluoresensi, saat cahaya dengan panjang

gelombang tertentu disinarkan pada suatu sampel,
kompleks antigen/antibodi akan berfluoresensi sehingga
jumlah antigen pada sampel dapat disimpulkan
berdasarkan besarnya fluoresensi.
 JENIS – JENIS METODE ELISA
Secara garis besar ada dua jenis Teknik ELISA yaitu
kompetetitif dan non kompetitif. Teknik kompetitif
menggunakan konjugat antibodi-enzim atau antigen -
enzim. Teknik non kompetitif menggunakan antibodi
primer dan sekunder. Antibodi sekunder pada Teknik
nonkompetitif dikonjugasikan dengan anzim yang
berfungsi sebagai signal. Seiring dengan kebutuhan deteksi
antigen atau antibodi secara secara sensitif dan spesifik,
maka Teknik ELISA telah banyak digunakan. Inovasi
Teknik ELISA telah berkembang pesat yang tujuannya
adalah untuk mendapatkan hasil yang optimal. contoh
inovasi teknik ELISA yaitu:
− ELISA Direct
− ELISA Indirect
− ELISA Sandwich
02
ELISA DIRECT
 ELISA DIRECT

● Teknik ELISA direct adalah yang paling sederhana. Pada Teknik ini biasanya untuk
mengukur antige pada sampel dengan menggunakan antibodi monoclonal yang
spesifik. Antigen dari sampel yang dicari dimasukkan pada microtiter sehingga
antigen tersebut dapat menempel pada dinding microtiter. Pada tahapan ini
microtiter dibilas untuk menghilangkan antigen yang tidak menempel pada dinding
microtiter tersebut. Antibodi yang berlabel enzim (dicoated dengan enzim misalnya
dengan horse rapid peroksidase/HRP) ditambahkan sehingga terjadi ikatan komplek
antigen antibodi yang berlabel enzim dan pencucian dilakukan pada tahapan ini
untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dengan antigen yang diinginkan.
● Tahapan akhir sebelum pemberian stop solution adalah dengan menambahkan
substrat yang bereaksi dengan enzim yang terdapat pada antibodi sehingga akan
menghasilkan presipitat warna yang dapat diukur kadar atau keberadaan antigen
yang dicari baik menggunakan kolorimetri, chemiluminescent, atau fluorescent end-
point.
 KELEBIHAN & KEKURANGAN
ELISA DIRECT

KELEBIHAN :
 hanya 1 antibodi sehingg cepat
 reaksi silang dapat dihindari
KEKURANGAN :
 Cukup mahal
 Kurang sensitive (penurunan
imunoreaktifitas antibodi)
 Tidak memiliki fleksibilitas enzim
03
ELISA INDIRECT
 ELISA INDIRECT

Pada Teknik ELISA Indirect yang dicari adalah antibodi

sehingga diperlukan antigen yang spesifik. Antigen spesifik
(monoclonal), antibodi yang dicari pada sampel, antibodi
sekunder yang berlabel enzim, substrat, dan stop solution adalah
mutlak diperlukan untuk Teknik ELISA indirect ini. ELISA
Indirect merupakan jenis elisa yang digunakan untuk
mendeteksi antigen atau antibodi. Teknik tersebut memiliki
karakteristik yaitu antigen tidak menempel langsung pada
antibodi detector, oleh sebab itu disebut indirect elisa. Antigen
tersebut akan berikatan dengan antibodi lain terlebih dahulu,
baru kemudian akan berikatan dengan antibodi yang telah
dilabeli enzim.
Tahapan Teknik ELISA indirect untuk mengukur keberadaan antibodi pada sampel:

1. Pada plate microtiter ditambahkan pengenceran standar yang sudah disiapkan dari reagen
dan pada plate berikutnya ditambahkan sampel yang akan dicari konsentrasi antibodinya.
Enceran standar ini berguna untuk menetapkan kurva sebagai acuan menetukan rumus dalam
penentuan kadar sampel.
2. Diinkubasi sesuai prosedur yang berfungsi untuk menghasilkan komplek antigen antibodi
secara optimal.
3. Dilakukan pencucian untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat pada komplek
tersebut.
4. Antibodi pendeteksi yaitu antibodi sekunder yang berlabel enzim ditambahkan sehingga
terjadi komplek ikatan antigen antibodi dengan antibodi yang berlabel enzim.
5. Diinkubasi sesuai prosedur, dan dicuci sesuai prosedur dalam kit.
6. Substrat dimasukkan untuk diubah oleh enzim sehingga dihasilkan presipitat warna
7. Absorben dibaca pada Elisa reader/spektrofotometer, dikuantifikasi menggunakan kurva
expert menggunakan absorbansi enceran standar.
 KELEBIHAN & KEKURANGAN
ELISA INDIRECT

KELEBIHAN : KEKURANGAN :
 Bayak produk variasi antibodi sekunder.  metoda imobilisasi antigen nya non
 Lebih sensitive spesifik
 waktu pengujian relative lama
04
ELISA SANDWICH
ELISA SANDWICH

Teknik Elisa Sandwich mirip dengan Elisa direct yaitu mencari antigen yang
diinginkan dan yang membedakan adalah pada Elisa Sadwich, antigen yang
dicari tidak perlu dipurifikasikan. Teknik Elisa Sandwich menggunakan
antibodi primer untuk bereaksi dengan antigen yang diinginkan pada sampel
dan bereaksi dengan antibodi sekunder yang berlabel enzin. Komplek
antigen antibodi primer dan antibodi sekunder ini selanjutnya dengan
penamnbahan substrat akan menghasilkan presipitat warna dan intensitas
warna ini mencerminkan konsentrasi antibodi yang dicari pada sampel. Pada
Teknik Elisa Sandwich. Antigennya bersifat multivalent seperti polisakarida
atau protein yang memiliki minimal 2 sisi antigenik agar dapat berinteraksi
dengan antibodi primer spesifik dan antibodi sekunder spesifik yang
berlabel enzim. Antibodi primer disebut juga antibodi penangkap dan
antibodi sekunder disebut juga antibodi deteksi.
TAHAPAN TEKNIK ELISA SANDWICH:
1. Plate yang digunakan sudah disiapkan dengan antibodi spesifik (non spesifik binding site diblokir)
2. Sampel yang berisi antigen yang dicari dimasukkan dalam plate
3. Untuk membuang kelebihan antigen yang tidak bereaksi, maka dilakukan pencucian plate.
4. Ditambahkan antibodi primer agar berikatan dengan antigen secara spesifik.
5. Ditambahkan antibodi sekunder yang berlabel enzim agar berikatan dengan antibodi primer.
6. Untuk membuang konjugat antibodi-enzim yang tidak berikatan maka dilakukan pencucian plate.
7. Substrat ditambahkan agar dapat diubah oleh enzim menjadi presipitat warna yang yang dapat
diukur intensitasnya.
8. Ditambahkan stop solution untuk menghentikan reaksi.
9. Ingtensitas warna diukur menggunakan Panjang gelombang tertentu menggunakan Elisa
reader/spektrofotometer.
 ELISA SANDWICH

Tingkat sensitifitas Elisa Sandwich dipengaruhi

oleh beberapa factor antara lain:
● Molekul antibodi primer banyak yang
menempel pada dinding-dinding microtiter.
● Tingkat avinitas antibodi primer dan antibodi
sekunder dengan antigen yang dicari
● Pengembangan dari Elisa direct.
 KELEBIHAN & KEKURANGAN
ELISA SANDWICH

KELEBIHAN :
 Kemampuan mendeteksi antigen dengan titer
yang sangat rendah karena bisa bereaksi dengan
antibodi primer dan antibodi sekunder dengan
sangat baik.
 Kemampuan mengukur antigen multivalent(yang
tidak perlu dipurifikasikan) dan mampu
mengikat antigen yang diinginkan secara
selektif.
KEKURANGAN :
 Sulit mencari dua sisi antibodi yang dapat
bereaksi dengan antigen yang sama pada sisi
antigenik yang berbeda (epitope yang berbeda)
 Hanya dapat diaplikasikan untuk mendeteksi
keberadaan antigen multivalent pada sampel.
RADIOIMMUNOASSAY
(RIA)
KELOMPOK 10

Dosen Pengampu : Nurminha, M.Sc

 SUB BAB

01 Pengertian 04 Prosedur Kerja

02 Prinsip Kerja
05 Keuntungan dan
Kelebihan
Metode
03
 0
1
PENGERTIAN
RADIOIMMUNOASSAY (RIA)
………………………………………

Radioimmunoassay adalah metode yang mengukur adanya antigen dengan

sensitivitas yang sangat tinggi. RIA (Radioimmunoassay) adalah salah satu
teknik immunoassay yang lebih baik dan lebih sensitif. Pada dasarnya, semua
prinsip-prinsip desain assay EIA didasarkan pada kesimpulan yang diambil dari
penggunaan RIA.Meskipun RIA masih merupakan teknik yang layak, namun
sebagian besar telah digantikan oleh CL dan EIA di sebagian besar laboratorium
klinis. Berbagai radioisotop dimanfaatkan dalam pemeriksaan RIA,
I125, H3, C14. Baik CL dan EIA memiliki keunggulan pada reagen yang lebih
stabil dan dapat memiliki batas deteksi yang lebih sensitif, serta tidak ada
masalah dengan pembuangan limbah berbahaya. adalah metode menggunakan
isotop radioaktif untuk label baik antigen atau antibodi. Isotop ini memancarkan
gamma raysare, yang biasanya diukur penghapusan berikut terikat (gratis)
radiolabel.
………………………………………

Radioimmunoassay merupakan metode laboratorium (in vitro method)

untuk mengukur dengan relative tepat jumlah zat yang ada pada tubuh
pasien[1] dengan isotop radioaktif yang bercampur dengan antibody
yang disisipkan ke dalam sampel. Radioimmunoassay merupakan
revolusi dalam pemeriksaan medis. Pada tahun 2009, teknik ini masih
revolusioner karena merupakan blueprint untuk pengembangan
metode lebih lanjut dalam teknik laboratorium di bidang medis.
………………………………………

Dasar-dasar teknik radioimmunoassay (RIA) atau prinsip competitive-

binding radioassay ini pertama kali dikembangkan pada tahun 1950-
an oleh Solomon Berson dan Rosalyn Yallow[1,2] untuk memeriksa
volume darah, metabolism iodine, menentukan kadar hormone insulin
dalam plasma darah. Dengan menggunakan prinsip ini titer atau kadar
berbagai hormon, antigen, antibodi, enzim dan obat dalam darah dapat
diukur dengan ketepatan dan ketelitian yang sangat tinggi. Karena
limit deteksi yang sangat baik ini maka RIA digunakan sebagai
peralatan laboratorium standar
 0
2
PRINSIP
KERJA
RADIOIMMUNOASSAY (RIA)
 Prinsip dasar metode Radioimmunoassay (RIA): Didasarkan pada
reaksi antara antibody (dalam konsentrasi terbatas) dengan berbagai
konsentrasi antigen. Digunakan untuk menemukan antigen tunggal/
antibodi dalam cairan biologis tunggal dan tehnik pemeriksaan untuk
menentukan antibodi atau antigen denagn reagen yang bertanda zat
radioaktif.
 0
3
Metode
RADIOIMMUNOASSAY (RIA)
Metode radioimmunoassay (RIA) mempunyai 2 jenis prinsip
yaitu kompetitif dan non kompetitif.Prinsip non kompetitif yang
paling banyak di gunakan adalah sandwich. Prinsip dasar dari
sandwich adalah reaksi suatu antibodi dalam konsentrasi yang
terbatas dengan berbagai konsentrasi antigen.
Ada dua jenis pendeteksian dengan RIA yakni competitive RIA
dan sandwich immunoradiometric assay (IRMA).
Pada competitive RIA, sejumlah tertentu antibodi diimobilisasi (ditempelkan)
pada suatu fase padat misalnya dinding tabung plastik. Sampel pasien yang
mungkin mengandung biomolekul (misalnya patogen) ditambahkan bersama
dengan sejumlah tertentu biomolekul berlabel radioaktif yang akan
berinteraksi dengan antibodi yang timbul. Intensitas signal radiasi dari
biomolekul berlabel radioaktif yang terikat pada antibodi yang menempel pada
dinding tabung akan berbanding terbalik dengan konsentrasi biomolekul dalam
sampel. Sandwich IRMA khusus dipergunakan untuk mengidentifikasi dan
mengukur suatu biomolekul yang berukuran besar.
 0
4
Prosedur Kerja
RADIOIMMUNOASSAY (RIA)
•Darah masing-masing di pipet 100 ul dan di masukkan ke dalam tabung yang telah
dilapisi oleh lapisan progesteron antibody yang telah diberi label
•Tambahkan 1 ml radio isotop 125 I Progesteron lalu kocok dengan menggunakan vortex
mixer kemudian tutup dengan plastic para film dan disimpan selama 24 jam pada suhu
kamar.
•Setelah disimpan larutan radio isotop di buang kedalam botol khusus, tabung dikringkan
dengan cara dibalik. Selanjutnya progesteron di cacah dengan gama coanter
•Presentase pengikatan progesteron dalam sampel oleh progesteron antibody spesifik
dapat di ketahui dengan membandingkan hasil cacahan 125 I Pada tabung berlapis
antibody tanpa sampel (control).
 
 0
5
KELEBIHAN DAN
KEKURANGAN
RADIOIMMUNOASSAY (RIA)
 KELEBIHAN

Dibandingkan dengan immunoassays lainnya sensitivitas RIA lebih tinggi,

deteksi sinyal mudah dan mapan serta tes cepat.
 
 KEKURANGAN

Radioimmunoassay (RIA) pada tahun 1959 dengan menggunakan label radioaktif

yang identifikasi komponen imun pada konsentrasi yang sangat rendah. Pada
tahun 1960an, para peneliti mulai mencari pengganti kode RIA karena
kelemahannya menggunakan radioaktif isotop sebagai label.
 
Kekurangan penggunaan radioaktif tersebut berkaitan dengan keselamatan petugas
laboratorium, masalah pembuangan radioaktif. Fasilitas laboratorium khusus
dengan persyaratan gedungnya dan mahalnya peralatan yang dibutukan.
Kelemahan dari radioimmunoassay mendorong para peneliti untuk mencari suatu
label pengganti yang lebih sederhana lebih murah, dengan reagen yang dapat
bertahan lebih lama dan dapat di pakai oleh hampir semua laboratorium serta
mudah di buat otomatis. Muncullah kemudian gagasan untuk memakai enzim
sebagi label dan lahirlah suatu immunoassay yang baru yaitu enzim
TERIMAKASIH
IMUNOFLOURESENSE

IMUNOSEROLOGI – T3 STR TLM

 PENGERTIAN
Imunofluoresensi adalah teknik atau metode yang digunakan untuk melabeli antigen target spesifik dengan fluorofor.

Fluorofor adalah senyawa kimia fluoresen yang dapat memancarkan kembali cahaya pada eksitasi cahaya. Ketika

fluorophore berikatan dengan antigen target, memungkinkan ada pendeteksian molekul target dalam sampel. Untuk

menggambarkannya lebih lanjut, ketika sebuah antigen berikatan dengan antibodi spesifik, ia dapat dikonjugasikan

dengan fluorofor. Oleh karena itu, akan mudah untuk mendeteksi keberadaan antigen target dalam sampel ketika

mengamati di bawah mikroskop fluoresensi.

 JENIS IMUNOFLOURESENSE
Selain itu, ada dua jenis imunofluoresensi yaitu :

Imunoflouresense Imunoflouresense tidak

langsung langsung

Perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung paling utama terletak pada jumlah antibodi yang

digunakan dan konjugasi fluorofor. Yaitu, dalam imunofluoresensi langsung, fluorofor langsung berkonjugasi dengan

antibodi primer sedangkan pada imunofluoresensi tidak langsung, fluorofor terkonjugasi dengan antibodi sekunder.
 IMUNOFLOURESENSE LANGSUNG
Imunofluoresensi menggunakan antibodi untuk mendeteksi antigen target spesifik. Dalam imunofluoresensi langsung,
satu antibodi (antibodi primer) terlibat dan fluorofor langsung berkonjugasi dengan antibodi primer. Setelah
mengikat antibodi dengan antigen target, fluorophore memancarkan fluoresensi yang dapat dideteksi oleh mikroskop
fluoresensi.

Imunofluoresensi langsung adalah metode yang mahal karena antibodi terkonjugasi primer lebih mahal dibandingkan
dengan antibodi sekunder. Namun, teknik yang digunakan lebih pendek. Selanjutnya, ikatan yang tidak spesifik
berkurang dalam imunofluoresensi langsung. Karenanya, reaktivitas silang spesies rendah. Tetapi dalam deteksi,
sensitivitas imunofluoresensi langsung lemah dibandingkan dengan imunofluoresensi tidak langsung .
IMUNOFLOURESENSI
LANGSUNG
IMUNOFLOURESENSI TIDAK LANGSUNG
Imunofluoresensi tidak langsung adalah tipe kedua dari imunofluoresensi yang melibatkan dua jenis antibodi
seperti antibodi primer dan sekunder dalam pelabelan antigen target. Dalam metode ini, fluorophore berkonjugasi
dengan antibodi sekunder. Karenanya, teknik ini melibatkan langkah tambahan.

Namun, sensitivitasnya tinggi dalam metode ini karena beberapa fluorofor dapat dikonjugasikan dengan antibodi
sekunder dan itu membuat deteksi lebih mudah. Imunofluoresensi tidak langsung lebih murah karena fakta bahwa
konjugasi antibodi sekunder lebih murah dan lebih mudah. Dibandingkan dengan imunofluoresensi langsung,
reaktivitas silang spesies tinggi dalam metode tidak langsung.
 0 PERSAMAAN IMUNOFLOURESENSE
LANGSUNG DAN TIDAK LANGSUNG 0
1 Teknik imunofluoresensi 2 Antibodi primer

0
Imunoflouresense langsung dan tidak langsung
adalah dua jenis teknik imunofluoresensi
0Antibodi primer dan fluorofor terlibat dalam
kedua metode

3 Reaksi antigen-antibodi 4 Menggunakan

mikroskop fluoresensi
Baik imunofluoresensi langsung dan tidak
Reaksi antigen-antibodi terjadi pada kedua
langsung menggunakan mikroskop fluoresensi
metode
untuk mendeteksi antigen.
IMUNOPROFI
LKASIS
PENGERTIAN

● Imunoprofilaksis adalah pencegahan terjadinya

penyakit/infeksi dengan memproduksi sistem imun atau
meningkatkan kekebalan seseorang terhadap suatu antigen
baik secara aktif maupun secara pasif, sehingga kelak jika ia
terpajan pada antigen yang serupa tidak terjadi penyakit.
● Mengingat pentingnya imunoprofilaksis baik itu pada bayi
maupun dewasa dalam pencegahan terjadinya penyakit yang
pada akhirnya akan menurunkan angka morbiditas dan
mortalitas di Indonesia
Prinsip

● Indikasi profilaksis
● Peningkatan efek protektif terhadap penyakit
● Meningkatkan sel sel memory
● Rentang waktu proteksi
FUNGSI

Fungsi dari imunoprofilaksis adalah untuk meningkatkan sistem

kekebalan tubuh terhadap penyakit, kekebalan terhadap penyakit
dapat dipacu dengan pemberian imunostimulan termasuk vaksinasi
dan vitamin dan dapat mengurangi
penularan suatu penyakit.
imunisasi

● Imunisasi merupakan kemajuan besar dalam usaha imunoprofilaksis. Dengan manfaat menurunkan
angka kejadian penyakit, kecacatan, maupun kematian. Jenis jenisnya yaitu :
1. Imunisasi aktif
a. Imunisasi aktif ilmiah

b. Imunisasi aktif buatan

2. Imunisasi pasif
a. Imunisasi pasif ilmiah

b. Imunisasi pasif buatan

3. Vaksinasi
a. Vaksin hidup

b. Vaksin mati

c. Rekombinan

d. Toksoid atau anatoksin

e. Antitoksin

f. Vaksin plasma DNA

Imunisasi aktif

● Imunisasi aktif adalah pemberian satu atau lebih antigen agen

yang infeksius pada seorang individu untuk merangsang
sistem imun untuk memproduksi antibodi yangakan
mencegahinfeksi.
Imunisasi pasif

● Imunisasi pasif adalah adalah pemindahan antibodi yang telah

dibentuk yang dihasilkan oleh host lain. Antibodi ini dapat
timbul secara alami atau sengaja diberikan.
UJI INVIVO
PENGERTIAN

● Pengujian in vivo, terutama dalam uji klinis, merupakan aspek

penting dalam penelitian medis secara umum. Studi in vivo
memberikan informasi berharga mengenai efek zat tertentu
atau perkembangan penyakit pada organisme hidup secara
keseluruhan.
● Jenis utama uji in vivo adalah studi hewan dan uji klinis.
1. STUDI HEWAN

● Studi pada hewan bertindak sebagai semacam jalan tengah

antara eksperimen in vitro dan uji coba manusia. Sebagian
besar penelitian pada hewan menggunakan tikus atau tikus
yang dibesarkan di laboratorium yang hampir identik secara
genetik. Hasilnya, para peneliti dapat memantau berbagai efek
biologis dalam organisme kompleks.
● Menguji subjek yang secara genetik serupa di lingkungan
laboratorium menawarkan tingkat pengendalian yang tidak
ada dalam uji klinis.
2. UJI KLINIS
● Jika kandidat obat tampak aman dan efektif dalam penelitian
in vitro dan hewan, para peneliti akan mengevaluasi efeknya
pada manusia melalui uji klinis.
● Peneliti sering membandingkan efek obat baru terhadap efek 
plasebo .
● Banyak yang menganggap uji coba terkontrol secara acak
(RCT) sebagai standar emas untuk pengujian farmasi. Semua
RCT harus menyertakan pengacakan dan kontrol.
● Dalam pengacakan, para peneliti secara acak menugaskan
peserta ke kelompok pengobatan atau kelompok plasebo.
● Dengan kontrol, para peneliti membandingkan hasil dari
peserta yang menerima obat baru atau intervensi dengan
peserta dari kelompok kontrol. Peserta dalam kelompok
kontrol mendapatkan pengobatan alternatif, seperti plasebo
atau obat baru dalam bentuk lama.
 TABLE OF CONTENTS

01 PENGERTIAN PENYAKIT 03 PERTANDA

INFEKSI DAN PENYAKIT SEROLOGI
NON INFEKSI

02 CONTOH PENYAKIT 04 CONTOH

INFEKSI PENYAKIT NON
INFEKSI
 01
PENGERTIAN
PENYAKIT INFEKSI
DAN
NON INFEKSI
 Penyakit Infeksi
●Penyakit infeksi adalah penyakit yang disebabkan oleh mikroba
patogen, dan bersifat sangat dinamis, secara umum proses terjadinya
penyakit melibatkan tiga faktor yang saling berinteraksi, yaitu faktor
penyebab penyakit (agen), faktor manusia atau pejamu (host), dan
faktor lingkungan.

Dalam medis, penyakit menular atau penyakit infeksi

adalah sebuah penyakit yang disebabkan oleh sebuah
agen biologi (seperti virus, bakteri dan parasit), bukan
disebabkan faktor fisik (luka bakar) dan kimia
(keracunan).
 Penyakit Non Infeksi
●Penyakit non infeksi berarti penyakit yang
disebabkan bukan karena infeksi [invasi micro
organisme].

Penyakit non infeksi adalah penyakit

yang disebabkan oleh diluar dari
proses infeksi. Banyak penyakit non
infeksi yang berkembang saat ini dan
menjadi penyebab kematian.
 02
CONTOH
PENYAKIT INFEKSI
 Beberapa contoh penyakit infeksi

Virus Bakteri Parasit Jamur

Hepatitis Kolera Amubiasis Candidiasis
HIV Disentri Giardiasis Dll.
Rubella Tifoid Askariasis
Dll. TBC Malaria
Lepra, dll. Dll.
Hepatitis
Hepatitis adalah radang hati yang
disebabkan oleh virus. Dikatakan akut
apabila inflamasi (radang) hati akibat
infeksi virus hepatitis yang berlangsung
selama kurang dari 6 bulan, dan kronis
apabila hepatitis yang tetap bertahan
selama lebih dari 6 bulan.
 Petanda Serologi Hepatitis

Petanda Serologi
penyakit ini adalah

 Hepatitis A Antigen (HA Ag)

 Hepatitis A antibody (Anti
HAV)
● HEPATITIS A ANTIGEN (HA
Ag):
●Merupakan petanda serologi yang dini
adanya infeksi dengan virus hepatitis A.
terdapat dalam tinja selama periode
inkubasi (1-2 minggu sebelum gejala klinis
muncul). Tidak dapat atau jarang sekali
ditemukan didalam darah.
HEPATITIS A ANTIBODY (ANTI HAV)
1. Ig M anti HAV:
Merupakan petanda bahwa infeksi HAV baru/sedang berlangsung.
Kadar didalam darah mencapai puncaknya pada 1 minggu setelah
sakit, dan kemudian menghilang dalam waktu 8 minggu. Sudah
terdapat dalam darah pada saat gejala klinis timbul.
2. Anti HAV total:
Biasanya pemeriksaan ini dilakukan setelah melewati fhase akur.
Kadar didalam darah meningkat 3-6 bulan setelah infeksi dengan
HAV. Dapat dipakai sebagai indicator bahwa seseorang pernah
terinfeksi dengan HAV, atau seseorang telah mempunyai
kekebalan terhadap HAV.
 Petanda Serologi Hepatitis B

Petanda Serologi untuk

Hepatitis B adalah
 HBs Ag & Anti HBs
 HBc Ag & Anti HBc
 HBe Ag & Anti HBE
 HBV DNA
 HBcrAg

●HBs Antigen:
●Merupakan petunjuk paling dini adanya infeksi
virus hepatitis B karena sudah dapat dideteksi
didalam darah pada masa inkubasi.
●Anti HBs:
●Anti HBs ini tidak terdapat didalam darah selama
masa akut. Mulai tampak didalam darah saat
penyembuhan/penyembuhan sempurna dan pada saat
itu kadar HBs antigen didalam darah telah negative.
HBc Antigen:
HBc antigen ini hanya dapat dideteksi antara sel liver. Di
dalam darah deteksi HBc antigen ini sulit dan memerlukan
tehnik khusus. Merupakan petunjuk adanya infeksi dengan
virus hepatitis B dan adanya replikasi virus.
Anti HBc (TOTAL):
Anti HBc total ini timbul didalam darah, segera setelah gejala
klinis tampak dan dapat dideteksi seumur hidup.
ANTI HBc (IG M)] :
Merupakan anti HBcyang timbul pertama kali didalam darah
setelah timbulnya gejala klinis dan bertahan hingga 6 bulan.
●HBV DNA
●HBV DNA bisa ditemukan dalam 30 hari pasca infeksi, dengan puncaknya pada 6
minggu. Pemeriksaan HBV DNA dilakukan dengan sampel dari serum dan sel-sel
hepar, pemeriksaan tersebut dilakukan secara kualitatif maupun kuantitatif.

●HBcr Ag
●Pada metode ini yang diukur kadarnya dalam serum adalah HBcAg yang berasal
dari komponen nukleokapsid partikel Dane serta HBcAg dan HBeAg yang berasal
dari masing-masing kompleks antigen-antibodinya, Jumlah HBcAg dan HBeAg
tersebut selanjutnya disebut HBcr Ag (Hepatitis B core related antigen).
 03
CONTOH
PENYAKIT NON INFEKSI
 DIABETES MELLITUS

Merupakan kegagalan fungsi dari kelenjar pankreas sehingga

tidak mampu menghasilkan insulin secara cukup untuk
merubah gula darah menjadi energi. Diabetes mellitus tipe 2 ini terjadi karena
kombinasi dari kecacatan dalam produksi
Diabetes mellitus tipe 1 ini disebut juga dengan
insulin dan resistensi terhadap insulin atau
diabetes anak – anak. Ciri-cirinya adalah hilangnya sel
berkurangnya sensitivitas terhadap insulin
beta penghasil insulin sehingga terjadi kekurangan
yang melibatkan reseptor insulin di
insulin pada tubuh. Penyebab terbanyak dari tipe ini
membran sel.
kesalahan dari reaksi autoimunitas yang
menghancurkan sel beta pankreas.
 Deteksi Dini Untuk Pemeriksaan Diabetes
Mellitus di Laboratorium

 Glukosa Puasa Pemeriksaan terhadap kadar gula dalam darah vena pada saat pasien
 HbA1c (A1c) puasa 12 jam sebelum pemeriksaan ( GDP/ gula darah puasa/nuchter) dan
 Urine Lengkap /
2 jam setelah makan (post prandial).
Rutin

Hemoglobin Glikosilat ( HbA1C)

Tes ini berguna untuk mengukur tingkat ikatan gula pada hemoglobin A (A1C) sepanjang umur sel darah
merah (120 hari).

Pemeriksaan urin lengkap ialah pemeriksaan keton urine dan Glukosa pada urine.