IA Α

Κ ΕΣ E R ΙΔ
Ι
Ν Ι T
S Λ Υ Σ
Χ LI Α Σ
Ε Α
Τ Κ Η ΣΕ Σ Η
Τ
Η

ΕΣ Σ Τ S Γ
Η )
Θ Σ
Ρ Σ Η ΗΣ E : Α Ω
Κ ΣΕ

Γ Ο Υ ΙΣ EN Σ Σ
ΙΑ Ο Ε
Υ

Η Ν Ε Ρ G
Σ Ρ Λ

Ρ
Α Υ Ε

Γ ΙΧ Ν T Ω O
Γ Ο Ο
Ρ Κ Ρ
Ε Ι Π
Ν
Α ΑΓ OCY ΩΝ
Σ Ε Σ
Η ,
Τ Σ Κ
Π
Η

ΑΝ ON ΙΜ
Η Ο Ι
Γ Λ ΖΩ
Η Ε
Θ ΓΓ Ν

M ΟΦ
Α Ω
Κ ΥΑ Μ Σ
Ν Ε ΦΙ ΙΑ

ΤΡ
Ι Ο
Ω Υ Ο Λ Α Ρ
Π Ο Ρ Ε Ρ Ε
Ε Μ Τ Γ Τ Θ
Λ Ο Η Γ Η Α Υ
Β : Α Μ Ν Ε
Ι Ν Ν Σ Υ Η Η
Π ΚΟ ΙΙ Ε Ε Θ Λ
Ε Ι Τ Η Δ Α Ε
Ε Α Σ
Ο Υ Γ Η Ρ Ι Υ
( ΙΤ ΧΑ Σ Ο Λ
Α
Ο Ο Α Λ Υ
Φ Ε Π Η Ο
Α Ζ Π
Θ Ρ Ο
Α Π Μ
Κ
Α
Ρ ΙΑ
Σ
Κ Τ
Α
Κ
ΗΜΙΠΟΣΟΤΙΚ
Ή- M U LT I P L E X -
PCR PCR

Αποτελέσματα μετα απο Ανάγκη υπαρξης

ηλεκτροφόρηση των διαφορετικών μεσων
πολλαπλασιασμενων εμπλουτισμου για τα
αλληλουχιων. παθογόνα στόχους

Αυξημένη ευαισθησία με
Μετά απο 24h βιοτσίπ (DNA macroarray)
εμπλουτισμου βρεθηκε σε μη εμπλουτισμό
ιδιος αριθμος θετικων
δειγματων με τα προτυπα
ISO Μειωμένη ευαισθησία σε
σχέση με μονούς εκκινητές
1. Μετουσίωση 94-96oC
2. Αποδιάταξη ~68oC
3. Επιμήκυνση ~72oC
 REAL-TIME PCR

RT-PCR IMS+ RT-PCR Multiplex+ RT-PCR

• Εκτίμηση αποτελεσμάτων • Αυξημένη ευαισθησία • Αποτελέσματα εως και

στο τέλος της ανάλυσης ή • Γρήγορα αποτελέματα και για 3 διαφορετικούς
κατα τη διάρκεια αυτης χωρίς εμπλουτισμό για μικροοργανισμούς
• Σε αντιθεση με την >100CFU/g. Κάτω από σύμφωνα με τη μέθοδο
συμβατικη PCR η αυτό το κατώφλι, ISO.
ποσότητα του απαιτείται εμπλουτισμος (Campylobacter,
εναρκτηριου υλικού είναι • Διαφοροποίηση Salmonella, E.coli)
μετρημένη ζωντανων και νεκρών
• Πιο ταχεία απο στελεχών L.
συμβατική monocytogenes με χρήση
• Ευρεία χρήση για μελέτες Ethidium monoazide
παθογόνων σε τρόφιμα bromide
• Μετά από εμπλουτισμό,
καλή ευαισθησία και
ακρίβεια*
• Μπορει και εντοπίζει
μικρόβια που βρίσκονται
σε κατάσταση στρες (πχ
αλμη)
ΙΣΟΘΕΡΜO ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟ ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΜΟΥ
+ Ταχυτητα

+ Μεγάλη ειδικοτητα (ιδια αποτελεσμα με ISO, με τα απο 6h εμπλουτισμο)

+ Ανοχη μη καθαρου δείγματος

+ Ευαισθησια (Το RNA ειναι ο αμεσως στοχος της αντιδρασης )

+Δεν απαιτει αλλαγη στη θερμοκρασια για τις αντιδρασεις

- Οχι ακομη τοσο ευαισθητες και ειδικές όσο η PCR και η RT-PCR

- Ειναι ακόμη καινουριες τεχνικες υπο διερεύνηση με περιθωρια βελτιωσης

Για τη Listeria spp. χρησιμοποιείται κυρίως:

• LAMP (Loop-mediated isothermal amplification)
• HRCA (hyperbranching rolling circle amplification)
 D το
TE υν ς (π
χ
IA ί ζο ατο
D L
E A ON ναγ νιδ ρη νω ρ ιώμ
- M M TI α γο θε
O P ER A υ
ο του στα
O T H IC τες θίες σε
π
L O LIF ινη ου ουν
IS P εί εκκ ακολ αι δρ
AM ποι νες κ
μ ο μέ hyA
ησι κρι p,
χρ γκε ιο ia ασια
συ νιδ κρ
γο ρμο
θε