6.

Ipari biotechnológia

A fermentációs biotechnológia alapjai

23.08.19. 1
 Mi is a fermentációs technológia?
• A biotechnológia fontos része (részterülete)

1. A hasznos munkára fogott sejteket,

sejtalkotókat és enzimeket előállítja és
segítségükkel véghezviszi a termék
előállítását.

2. Vegyipari környezetbe helyezett biológia,

amikor egy kémiai folyamat során speciálisan
kialakított környezetben, az un. fermentorban
biológiailag aktív alkotórészekkel végeztetjük
el a megkívánt reakciókat
23.08.19. 2
 A fermentációs technológia előnyei:
1. Bonyolult molekulák is előállíthatók,
melyeket hagyományos kémiai eljárásokkal
nem lehet (gazdaságosan) előállítani.
2. A biológiai rendszerek alacsony
hőmérsékleten és semleges pH
tartományban dolgoznak (E)
3. Specifikus reakciókat lehet megvalósítani
4. Ezek általában jó hatásfokkal
(gazdaságosan) megoldhatók
23.08.19. 3
 Fermentáció
• Nem csak termelő eljárás
– Kísérleti technika
– Mikrobiális fiziológiai kutatás
• Eredeti jelentése: Erjedés
• Egyidős az emberiséggel (bor, Egyiptom)
• Fermentációs ipar (etanol, aceton, ecetsav,
szennyvíztisztítási technológiák)
• Még nem voltak az eljárások aszeptikusak!
• 1940 – aszeptikus eljárások (As, penicillin)
23.08.19. 4
 A fermentációs technológia
fontosabb lépései
1. A mikrobák növekedésének
törvényszerűségei (mikrobiológia)
2. Törzsek izolálása (screening)
3. Törzsek fenntartása
4. A szükséges élettér megteremtésének
törvényszerűségei a fermentációs
iparban (bioreaktorok felépítése)
5. A fermentáció nyomon követésének
módszerei
6.23.08.19.
A termék kinyerése és tisztítása 5
 A mikrobák növekedésének törvényszerűségei

1. 2. 3. 4. 5. 6.

1. Lag fázis: Ha sejteket az egyik táptalajból egy másikba oltunk át a sejtszám

az első néhány órában nem változik, ekkor adaptálódnak környezetükhöz.
2. Akcelerációs szakasz: a növekedési sebesség monoton nő
3. Log fázis: A sejtek szaporodásnak indulnak és a sejtszám
megtöbbszöröződik, a növekedés exponenciálissá válik.
4. Negatív akcelerációs fázis: A növekedési sebesség csökken.
5. Stacioner fázis: A növekedés gyengül az elfogyó szénforrás, nitrogénforrás
vagy a felhalmozódó az anyagcserében termelődő toxikus anyagok miatt.
6. Pusztuló fázis: Erre a fázisra a biomassza energiatartalékának elfogyása és
23.08.19.
a sejtek elhalása jellemző, több sejt pusztul el, mint amennyi szaporodik. 6
• Az egyes szakaszok hossza változó, van amikor nem is
észleljük. Függ:
– A kultúra előéletétől
– A mikroorganizmustól
– A kísérleti körülményektől
• Azt az időtartamot, ami alatt az egyedszám a
kétszeresére nő, duplázódási, v. generációs (g) időnek
nevezzük.
– t = 0 időpontban a sejtszám: N
– t = 1 generációs idő múlva: 2N
– t = 2 generációs idő múlva: 2 x 2N
– Vagyis: t = n generációs idő múlva: 2nN
• A generációs idő tehát nem más, mint az eltelt idő és a
generációk számának a hányadosa:

23.08.19. 7
 Törzsek izolálása (screening)

• Sir Alexander Fleming még a laboratóriumába véletlenül

bejutott penészgombából izolálta és fedezte fel a
kórokozókat pusztító penicillint
• Penicillium chrysogenium (Amerika)
• A mikroba izolálás lehetséges közvetlenül vagy
dúsítással a környezeti elemből (pl. talaj, víz,
növénybelső, stb.)
• Szélesztés
• A célvegyület termelési képességén túl, fontos, hogy
fermentációra kiválasztott törzs ne legyen patogén
• Ne termeljen toxikus anyagokat
• Legyen élettanilag állandó, azaz a változékonysága
minimális
23.08.19. 8
23.08.19. 9
 Mikroorganizmusok
izolálása talajból,
screening és
kinyerés sematikus
ábrája

23.08.19. 10
 Törzsfenntartás
• Mikroorganizmusok élő és tiszta tenyészetének
fenntartására szükség van
• A tiszta és stabil tenyészetek elérhetősége
• Mikroba tenyészetek eléggé érzékenyek, fertőződhetnek,
változhatnak vagy elpusztulhatnak (szakértelem)
• Törzsfenntartási módszereknek nagy jelentőségük van
• Olyan helyek létrehozása, ahol mikroorganizmusokat
tárolhatók nagy számban tudományos és egyéb célra
(1904- ben alapított CBS, Hollandia)
• Az 1980-as években a törzsgyűjtemények fejlődésének
újabb lökést adott a biotechnológia
• A gyűjteményekben tárolt mikroorganizmusok ugyanis
gyakran képezik új termékek vagy új technológiák még ki
nem aknázott erőforrásait
• Az elterjedtebb törzsfenntartási és konzerválási
módszerek az alábbiak:
23.08.19. 11
Időszakos átoltás tenyésztő tápközegekre (ferde agaros
tenyészet kémcsőben)

Thermomyces lanuginosus xilanáz enzimet

termelő gombák 10 nap 50 °C-os
inkubáció után
Bacillus licheniformis tenyészete 24
óra 30 °C-os inkubáció után nő ki
23.08.19. 12
 A Saccharomyces cerevisiae élesztő
tenyészet 48 óra után tejszerű felületet
ad az agaron.

A ferdéken szépen kinőtt Streptomyces

albus tenyészetek jellegzetes grízes
23.08.19. felületűek. 13
 További fenntartási módszerek
• Ásványolaj alatti tárolás
• Fenntartás steril homokban vagy talajban pl: spórás
baktériumok (pl. Bacillus) és sugárgombák (pl.
Streptomyces)
• Vízmentes szilikagélen történő konzerválás
• Liofilizálás (fagyasztva-szárítás). A víz eltávolítása
kíméletes módon történik, alacsony hőmérsékleten (-30
--40 °C), nagy vákuumban
• Mélyhűtéses fagyasztás a -30 és -80 °C között
(védőfolyadék)
• Tárolás folyékony nitrogénben (-196 °C) (évtizedekig-
évszázadokig tárolható így a mikroorganizmusok zöme)
• Napjainkban leginkább a liofilezést és a folyékony
nitrogénben történő tárolást alkalmazzák
• Replika gyűjtemény (!!!) – fontos törzsek esetén
23.08.19. 14
függőleges levegőáramlású oltóhely certokláv vízköpenyes autokláv
gamma sugárzással A gamma sugárzással
sterilezett műanyag sterilezett pipetták
petricsészék

hőlégsterilező

újabb típusu
autokláv

23.08.19. nagy nagyítású fáziskontraszt 15

feltétű mikroszkóp
fáziskontraszt feltét tárcsája
 A szükséges élettér megteremtése,
törvényszerűségei a fermentációs iparban
(bioreaktorok felépítése)

• A mikrobiológiai lépések magvalósítása a

bioreaktorokban történik (összetett,
általános név)
– Kultúrák (élő sejtek) nevelése
– Enzimeket munkára fogó eszközök
• Azokat a reaktorokat, amelyekben
biztosítják a mikroorganizmusok
életfeltételeit fermentoroknak nevezzük
23.08.19. 16
 Laboratóriumi fermentor

23.08.19. 17
23.08.19.
Levegőliftes fermentor 18
23.08.19. Folyadék sugaras fermentor 19
 Forgodobos fermentor

23.08.19. 20
A penicillin fermentáció
23.08.19.folyamata 21
Csővezetékek hálózata köti össze a steril fementorteret a
külvilággal. Jobbra az adagoló üvegek láthatók, amelyekből
steril szilikoncsöveken áramlik a folyadék. A készülék
hűtővizzel és fűtéssel szabályozza hőmérsékletét, ez
rendszer a piros gumicsöveken keresztül működőképes. 22
23.08.19.
A fermentorüzem oltófermentorai 100 literes térfogatúak.
Rozsdamentes acél megfelelő fejmotorral és műszerekkel
(pH és hőmérséklet, nyomás mérése).
23.08.19. 23
 A fermentáció nyomon követésének
módszerei
• A fermentorokban lezajló folyamatokról
különféle érzékelők (szenzorok)
segítségével tájékozódunk
• Ezek a környezet fizikai és kémiai
paramétereit elektromos jelekké alakítják
• Azokat a közbeiktatott eszközöket,
amelyek a környezeti jellemezőket
elektromos jelekké alakítják
transzducereknek nevezzük
23.08.19. 24
 Transzducer sematikus vázlata
Szenzor Kijelző

Transzducer

Ph-elektród

pH

Ph-mérő

23.08.19. 25
• A mikrobák közvetlen környezete a
folyadék fázis
• Tehát ebben, a különböző paraméterek
állapotát kell mérni a fermentáció nyomon
követéséhez
– térfogat,
– hőmérséklet,
– kémhatás (pH),
– redox potenciál (rH),
– oldott gázok aktivitása (CO2, O2), valamit
– a gáz fázis jellemzői (nyomás, áramlási
sebesség, összetétel változása)
23.08.19. 26
A termék kinyerése és tisztítása
• Nem elég a hasznos sejteket elszaporítani a
fermentorokban,
• Gyakran a kész terméket ki kell vonni, meg kell
tisztítani
• Eszköz, anyag, szaktudás!
• Pl: a humán inzulin project esetében egy cég (Eli
Lilly and Company) 200 kutatót alkalmazott

• 180 feldolgozás és tisztítás

• A feldolgozással kapcsolatos eljárásokat
downstream műveleteknek nevezzük
23.08.19. 27
• Feldolgozás: összetett eljárás
• Ritkán áll egyetlen lépésből pl: a hasznos
termék maga a mikroba
• Műveletek a downstream eljárások során:
– Elválasztási műveletek (szűrés, cenrifugálás,
flotálás)
– Koncentrálás (exrakció, precipitáció,
membrán(ultra)szűrés
– Tisztítás (kristályosítás, kromatográfia)
• Alkalmazást a termék piaci értéke
határozza meg (költségek, hatásfok, stb.)
23.08.19. 28
 Fontosabb fermentációs termékek
• Citromsavgyártás
• Glutaminsav előállítás
• Eszenciális aminosavak
• Lizin bioszintézis
• Ecetsav gyártás
• Alkoholgyártás (bor, sör, szesz)
• Antibiotikumok (β-laktám típ., peptid
jellegű, tetraciklin tip. antib.)
23.08.19. 29