Professional Documents
Culture Documents
2.cac Ohuong Phap Phan Tich VSV
2.cac Ohuong Phap Phan Tich VSV
10ml moâi
tröôøng noàng
ñoä thöôøng
(ñôn)
HEÄ THOÁNG MPN
10ml moâi
tröôøng noàng
ñoä ñoâi
3.3
1.1 1.2
Indol 2,0,0 4,5
MPN/g
Keát quaû 2,0,0 = 4,5
Coâng thöùc tính chæ soá MPN
MPN / g
g j
t j mj (t j g j ) mj
• Trong ñoù:
– ∑ gj : soá löôïng oáng döông tính trong daõy daõ
choïn
– ∑ tjmj :Khoái löôïng maãu trong daõy ñaõ choïn
– ∑ (tj-gj)mj Khoái löôïng maãu trong taát caû caùc
maãu aâm tính.
GIỚI HẠN TIN CẬY
Trong ñoù:
∑ gj : soá löôïng oáng döông tính trong daõy daõ choïn
∑ tjmj :Khoái löôïng maãu trong daõy ñaõ choïn
∑ (tj-gj)mj Khoái löôïng maãu trong taát caû caùc maãu
aâm tính.
t: Số ống trong hệ thống
CHÆ SOÁ MPN CÔ BAÛN
• Laø chæ soá tra ñöôïc töø baûng keát quaû MPN
coù soá löôïng maãu trong từng daõy laëp laïi nhö
sau:
• - Daõy 1: 1g hoaëc 1ml maãu
• - Daõy 2: 0,1g hoaëc 0,1ml
• - Daõy 3 0,01g hoaëc 0,01ml
COÂNG THÖÙC CHUYEÅN
ÑOÅI KEÁT QUAÛ MPN
• Cs = M x F/V0 x Vs
Cs: là khả năng lớn nhất của vi sinh vật có trong thể tích Vs
M : chỉ số MPN tra từ bảng đối với độ pha loãng cơ bản V0
F : nghịch đảo hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng thấp nhất
của dãy
Vs: Thể tích chuẩn được chọn để biểu thị mật độ vi sinh vật
• Nếu tính kết quả là MPN/g thì Vs = 1
• Nếu tính kết quả là MPN/100g thì Vs = 100
V0: Thể tích mật độ pha loãng cơ bản ( V0 = 10)
•
Các bảng MPN và công thức
• https://www.fda.gov/food/foodscienceresearch/la
boratorymethods/ucm109656.htm
PHÖÔNG PHAÙP MAØNG LOÏC
• Kích thöôùc loå loïc 0,47µm hay 0,22µm
• Ñöôøng kính vaø hình daïng maøng loïc phuï
thöïc vaøo ñöôøng kính pheåu loïc
• Ñöôøng kính maøng thöôøng laø 45mm
THIEÁT BÒ LOÏC NHIEÀU PHEÅU
(MULTIFOLDER)
CAÙC BOÄ PHAÄN CUÛA THIEÁT BÒ LOÏC VSV
PHÖÔNG PHAÙP LOÏC VSV
• Pheåu loïc, giaù ñôû maøng loïc phaûi ñöôïc
voâ truøng sau moãi laàn loïc
• Maät ñoä VSV trong dòch loïc thích hôïp:
<150 khuaån laïc/maøng
• Theå tích dòch loïc trong 1 laàn: 50 -100ml
• Neáu theå tích dòch loïc nhoû hôn thì phaûi
pha loaõng baèng dd pha loaõng hay nöôùc
caát voâ truøng
PHÖÔNG PHAÙP MAØNG LOÏC
• Öu ñieåm
– Xaùc ñònh ñöôïc maät ñoä VSV cuï theå trong
moät theå tích maãu lôùn: 10ml, 100ml …
Nhöôïc ñieåm
- Khoâng thích hôïp cho vieäc phaân tích caùc
maãu thöïc phaåm raén
KHUAÅN LAÏC VSV TREÂN
MAØNG LOÏC
1A 1B 2A 2B
1C 1D 2C 2C
E. coli treân moâi tröôøng ID Coli agar .
Coliforms treân moâi tröôøng ID Coli agar
PHÖÔNG PHAÙP MAØNG
PETRI-FILM
• Caûi bieân töø phöông phaùp ñeám khuaån
laïc treân ñóa
• Thích hôïp cho vieäc phaân tích maãu taïi
hieän tröôøng
• Khoâng phaûi baûo quaûn hay vaän
chuyeån maãu
Nhöôïc ñieåm
- Chæ aùp duïng haïn cheá ôû moät
soá chæ tieâu deå nuoâi caáy
- Chæ caáy ñöôïc theå tích maãu nhoû
PHÖÔNG PHAÙP ÑÓA PETRI FILM
Ma S
g e a lm o
n ta n ( 6
(5 -Ch
-B lor o
ro -3 i n
mo do l
-6 y l)
-ch
5-
Io
lo r
BC
do
o-
In d
3-
-3
I (5
Gree
i nd
-in
o ly
-B oly
do
l)
ro4
l
ly l
n
(N-Me
-c h
lor
o-3
thy l-3
-i n
do
-ind o
ly l
)
ly
PHẢN ỨNG ENZYME TẠO MÀU
ß-D-Galactosidase
–95 % of Coliforms
ß-D-Glucuronidase
–94-97 % of E.coli
Tryptophanase
–99 % E.coli có phản ứng
Indole dương tính
CƠ CHẾ TẠO MÀU
CARBO INDOLYL
HYDRATE
Không màu
ENZYME
+
02
Có màu
PHẢN ỨNG CHUNG CỦA CƠ CHẤT TẠO MÀU
O - CARBOHYDRATE
X
Y
Z
N
H
ENZYME
X OH
Y
Z + CARBOHYDRATE
N
H
OXY HÓA
X O H
N
Y Z
Z Y
N
H O X
HIỆN MÀU
COLIFORMS
6-CHLORO-3-INDOLYL-ß-D-GALACTOPYRANOSIDE
(SALMON-GAL)
GALACTOSIDASE
= ENZYME GALACTOSIDE
=CARBOHYDRATE COLORLESS
INDOLE
COLORLESS
+
O 2
CHLOROINDIGO
E.coli
5-Bromo-4-CHLORO-3-INDOXYL-ß-D-GLUCURONIDE
(X-GLUC)
GLUCURONIDASE
= ENZYME GLUCURONIDE
=CARBOHYDRATE COLORLESS
INDOLE
COLORLESS
+
O 2
BROMOCHLOROINDIGO
E. coli VÀ Coliforms
X-GLUC và Salmon-GAL
Glucuronidase
và Galactosidase Glucuronide
và Không màu
= Enzyme Galactoside
=Carbohydrate Indolyl
Không màu
+
O22
Chloroindigo Bromochloroindigo
Coliforms E.coli
and E.coli E.coli
PHẢN ỨNG TẠO KẾT TỦA,
PHÁT HUỲNH QUANG
Phosphatidylinositol phosphalipase
– Listeria monocytogenes
Lecithinase
– Bacillus cereus
Acid phosphatase phân cắt
MUP (4-
methylumbelliferylphosphate)
tạo 4-methylumbellferone
phát huỳnh quang dưới tia UV
–Clostridium perfringens
Biểu hiện của L. monocytogenes trên môi trường ALOA và
Eggyolk
Hoạt tính enzym
phosphatidylinositol
phosphalipase ở
L. monocytogenes
ALOA
EGGYOLK
36
Clostridium perfringens phát Pseudomonas phát huỳnh
huỳnh quang trong môi quang trong môi trường
trường TSC agar có bổ sung Pseudomonas agar có
MUP Hecxadecyltrimethyl
ammonium bromide(cetrimide)
PHÖÔNG PHAÙP PHAÙT QUANG
ATP
• Nguyeân taéc
Mg2+
E + LH2 + ATP E – LH2 AMP + PPi (1)
E – LH2 AMP + O2 Oxyluciferin + AMP + CO2 + hv (2)
E : luciferase
LH2 :luciferin
Aùnh saùng phaùt ra coù böôùc soùng 562nm, coù maøu
vaøng.
PHÖÔNG PHAÙP PHAÙT QUANG
ATP
• ATP chuû yeáu hieän dieän ôû teá baøo VSV
soáng
• Ñònh löôïng VSV thoâng qua soá löôïng ATP
cuûa VSV trong maãu
• Soá löôïng ATP phuï thuoäc vaøo ñieàu kieän
dinh döôõng, traïng thaùi teá baøo
• Khoâng phaân bieät ñöôïc caùc doøng, loaøi
hay nhoùm VSV khaùc nhau
PHÖÔNG PHAÙP PHAÙT QUANG ATP
• Öu ñieåm
– Cho pheùp ñònh löôïng ñöôïc toång soá vsv trong
maãu
– Cho keát quaû ñònh löôïng nhanh
– Thích hôïp cho vieäc giaùm saùt veä sinh treân
daây chuyeàn saûn xuaát
PHÖÔNG PHAÙP PHAÙT QUANG
ATP
• Nhöôïc ñieåm
– Khoâng phaân bieät ñöôïc ATP cuûa VSV vaø cuûa
maãu
– Khoâng phaân bieät ñöôïc caùc doøng, loaøi hay
nhoùm VSV khaùc nhau
– Caàn thieát bò tinh vi, coù ñoä nhaïy vaø ñoä chính
xaùc cao
– Caùc hoaù chaát khoù baûo quaûn, nhaïy caûm vôùi
aùnh saùng
PHÖÔNG PHAÙP PHAÙT QUANG ATP
2 7
Maãu vaø 5
chaát caïnh Röûa
tranh
3 Döøng
6 phaûn
Khaùng theå öùng, so
thöù caáo Hieän maøu
ñöôïc cho maøu
vaøo
ÖU, NHÖÔÏC ÑIEÅM CUÛA ELISA
• Öu ñieåm
– Nhanh, nhaïy
– Deã daøng töï ñoäng hoaù
– Coù theå thöïc hieän moät luùc nhieàu maãu
Nhöôïc ñieåm
– Tæ leä keát quaû döông tính giaû cao, caàn phaûi khaúng
ñònh laïi khi kết quả ELISA dương tính
– Moãi ñoái töôïng phaân tích phaûi coù moät boä kít
rieâng
– Hoaù chaát deã hoûng, thôøi gian baûo quaûn ngaén
Phương pháp Lateral Flow
Test (LFT)
antibody
bacterium
gold particle
membrane
Phương pháp Lateral Flow Test
(LFT)
-Antigen -Antigen
51
PHÖÔNG PHAÙP SÖÛ DUÏNG MAÃU DOØ
• Nguyeân taéc
– Treân cô sôû phöông phaùp lai phaân töû
– Coù theå phaùt hieän ñoái töôïng baèng DNA hay RNA
– Möùc ñoä chuyeân bieät cuûa phöông phaùp
phuïthuoäc vaøo söï chuyeân bieät cuûa maãu doø
(probes)
– Maãu doø coù theå laø maïch RNA hay DNA
Nguyên tắc phát hiện VSV
bằng mẫu dò
Dịch tăng sinh
Phát hiện
Đặt mẫu Cố định mẫu
Tế bào vi khuẩn
Que thöû
Cô chaát phaùt
quang