Метод петч-клемп реєстрації іонних

струмів через поодинокі канали

плазматичної мембрани нейронів

Сеничак Богдан
Вступ

Метод петч-клемп (patch-clamp) є однією з найбільш точних

технік вимірювання іонних струмів через поодинокі канали
плазматичної мембрани нейронів та інших клітин. Цей метод
дозволяє дослідникам досліджувати діяльність окремих іонних
каналів, що дає можливість краще зрозуміти механізми
передачі сигналів в нервовій системі.
Основна ідея методу
Створюється дуже маленький "петелька" з тонкої скляної трубочки, яка наклада ється на
поверхню клітини. Ця трубочка використовується як електрод, який забезпечу є зв'язок
з внутрішньою стороною клітинної мембрани. З іншого боку, електрод, який
знаходиться у розчині, що оточує клітину, забезпечує зв'язок з зовн ішньою стороною
мембрани. Таким чином, можна вимірювати струм, який протікає через окремі іонн і
канали, які знаходяться в тій самій ділянці мембрани, де знаходиться петелька.
Цей метод дозволяє вимірювати як пасивні струми, які протікають через мембрану без
стимуляції, так і активні струми, які виникають внаслідок впливу на кл ітину
різноманітних стимулів, таких як зміни рівня кальцію або зм іни потенц іалу мембрани.
Крім того, метод петч-клемп дозволяє досліджувати різн і типи іонних канал ів,
включаючи натрієві, калієві та кальцієві канали.
За допомогою методу петч-клемп можна вивчати фізіологію нейронів та інших клітин,
в тому числі механізми, які стоять за електричною активн істю кл ітин, і розвивати нов і
стратегії лікування різних нейрологічних захворювань. Наприклад, досл ідження за
допомогою методу петч-клемп можуть допомогти зрозуміти, які механізми стоять за
депресією, епілепсією, біполярним розладом та іншими псих ічними захворюваннями.
Переваги

Одним з головних переваг методу петч-клемп є те, що він

дозволяє дослідникам вимірювати струми з дуже високою
точністю та роздільною здатністю. Це дозволяє вивчати дуже
малий потік іонів, що протікає через окремі іонні канали, та
зрозуміти, як вони працюють.
Недоліки

Один з головних недоліків полягає в тому, що він дуже складний та

вимагає спеціалізованого обладнання та досвідченості в роботі з ним.
Крім того, важко встановити зв'язок між місцем, де знаходиться
петелька, та конкретним нейроном у мозку, що може бути складно для
інтерпретації результатів.
Установки для дослідження
Установки для дослідження методом петч-клемп зазвичай мають дуже складну
конструкцію та вимагають спеціалізованого обладнання. Основним елементом тако ї
установки є петч-клемп-ампліфікатор, який дозволяє вимірювати дуже слабкі
електричні сигнали, що генеруються при протіканні іонних струм ів через поодинок і
канали плазматичної мембрани нейронів.
Для стабілізації потенціалу мембрани використовують мікроман іпулятор, який дозволя є
регулювати розташування петлі, а також підтримувати потрібний рівень потенц іалу
мембрани у нейроні. Для забезпечення стерильних умов та запоб ігання забрудненню
під час дослідження застосовують спеціальн і дезінфекц ійн і та антисептичн і засоби.

Крім того, для отримання більш детальної інформації про фізіологічн і процеси, як і
відбуваються в клітинах, може використовуватися додаткове обладнання, таке як
флуоресцентні мікроскопи, які дозволяють візуалізувати різні компоненти кл ітин, або
електронні мікроскопи, які дозволяють вивчати структуру клітин та їхн іх компонент ів
на молекулярному рівні.
Блок схема
Висновки

• Метод петч-клемп є потужним інструментом для досл ідження іонних струм ів через окрем і канали плазматично ї
мембрани нейронів.
• Цей метод дозволяє отримувати дуже детальн і дан і про роботу окремих канал ів, так і як їхню кондуктивн ість,
активність та модуляцію.
• Для виконання експериментів з методом петч-клемп необх ідно використовувати спец іальну установку, яка м істить
електроди та систему контролю за потенц іалом мембрани.
• Петч-клемп може бути використаний для вивчення різних тип ів канал ів, таких як кальц ієв і, кал ієв і, натр ієв і та хлорн і,
що робить його цінним інструментом для вивчення ф із іолог ії нейрон ів.
• Хоча метод петч-клемп має декілька обмежень, зокрема, невелику к ільк ість канал ів, як і можуть бути досл іджен і за
раз, це все ще є дуже корисним методом для вивчення окремих канал ів та їхньо ї вза ємод ії з р ізними л ігандами та
модуляторами.
Список літератури

1. Neher, E., & Sakmann, B. (1992). The patch clamp technique. Scientific American, 266(4), 44-51. doi: 10.1038/scientificameri-
can0492-44
2. Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., & Sigworth, F. J. (1981). Improved patch-clamp techniques for high-resolution
current recording from cells and cell-free membrane patches. Pflügers Archiv: European Journal of Physiology, 391(2), 85-
100. doi: 10.1007/bf00656997
3. Hille, B. (1992). Ionic channels of excitable membranes. Sunderland, MA: Sinauer Associates.
4. Bertrand, S., & Monteggia, L. M. (2019). Advantages and limitations of the patch-clamp technique: a primer for the practic-
ing neuroscientist. Journal of Neuroscience Methods, 326, 108376. doi: 10.1016/j.jneumeth.2019.108376
5. Kandel, E. R., Schwartz, J. H., & Jessell, T. M. (2013). Principles of neural science (5th ed.). New York, NY: McGraw-Hill.