Culture Media

‫األوساط الزرعية ‪Culture Media‬‬

‫إن غالبية الدراسات والبحوث البكتيريولوجيه تتطلب استعمال بيئات زرع مختلفة تحضر بالمختبر ‪ ,‬وهذه البيئات وإن لم تكن‬
‫متماثلة تماما مع البيئات التي تعيش فيها أو عليها هذه الكائنات في الطبيعة إال أنها قريبة الشبه منها قربًا قد يوفر االحتياجات‬
‫والمتطلبات الغذائية الالزمة لتنميتها‪ .‬لذا يمكن تعريف البيئة بأنها أوساط زراعية مناسبة لنمو األحياء المجهرية تتوفر فيها‬
‫متطلبات النمو والتكاثر األساس ية‪ ,‬أو أي مادة يمكن أن تنمو عليها الكائنات الدقيقة ‪ ،‬إن األحياء المجهرية عموم ًا تقسم إلى‬
‫مجموعتين رئيسيتين من حيث التغذية وهما ‪:‬‬
‫‪ -‬ذاتية التغذية ‪ : Autotrophs‬تتمكن من النمو معتمدة على مركبات غير عضوية ‪.‬‬
‫‪ -‬غير ذاتي ة التغذي ة (عض وية التغذي ة) ‪ : Heterotrophs‬بإمك ان ه ذه المجموع ة اس تغالل المركب ات العض وية كمص ادر‬
‫للعناصر المذكورة أعاله ‪.‬‬
‫واألوس اط الزرعي ة ال ت وفر لألحي اء المجهري ة احتياجاته ا من العناص ر الغذائي ة فحس ب وإنم ا ت وفر له ا أيض ا الظ روف‬
‫الفيزياوي ة أو العوام ل الفيزياوي ة من النش اط الم ائي والض غط االزم وزي وال رقم الهي دروجيني المالئم وكمي ة األوكس جين‬
‫ودرج ة الح رارة والعام ل األخ ير يتم التحكم ب ه خارجي ًا من خالل حض ن األوس اط الملحق ة أو المزروع ة في الحاض نة‬
‫‪.Incubator‬‬
 ‫أهمية األوساط الزرعية ‪:‬‬
‫‪ )1‬لغرض عزل وتنمية وتنقية االحياء المجهرية كالفطريات والبكتريا‪.‬‬
‫‪ )2‬تستعمل أحيانا أوساط اختباريه ونقصد بها ( أوساط تستعمل الختبار صفات معينة للبكتريا) مثل الصفات البايوكيميائية‬
‫(الحياتية) للبكتريا ‪.‬‬
‫‪ )3‬تستعمل كأوساط اختيارية وهي األوساط التي تعمل على تنمية أنواع من البكتريا على حساب أنواع أخرى ‪.‬‬
‫(‪. )Antibiotics‬‬ ‫‪ )4‬تستعمل كأوساط لفحص واختبار الحساسية (حساسية البكتريا) للمضادات الحياتية‬
‫مالحظة‪:‬‬
‫ال يمكن تنمي ة جمي ع األحي اء المجهري ة على الوس ط ال زرعي ‪ Culture Media‬ألن هنال ك أحي اء يطل ق عليه ا‬
‫‪ Organisms Obligate Micro‬أحي اء مجهري ة إجباري ة وهي تحت اج إلى خالي ا حي ة لغ رض المعيش ة والقي ام‬
‫بالفعاليات الحيوية االيضية مثل الفيروسات ‪ Viruses‬التي تعيش على الخاليا الحية لإلنسان والحيوان والنبات ومثل‬
‫الفطر ‪ Pythium‬و ‪ Phytophthora‬التي تعيش على الخاليا الحية للنبات واليمكن تنميتها على االوساط الزرعية ‪.‬‬
‫ولتسهيل دراسة األوساط الزرعية أو الغذائية كما تسمى أحيانا تقسم هذه األوساط إلى مجاميع مختلفة وكما يلي ‪:‬‬

‫أوًال ‪ :‬الحالة الفيزياوية ‪ /‬حسب القوام وتشمل ما يلي ‪:‬‬

‫األوساط السائلة ‪Liquid Media‬‬

‫األوساط الصلبة ‪Solid Media‬‬

‫ألوساط شبه الصلبة ‪Semi – Solid Media‬‬

‫ثانيًا ‪ :‬المكونات الكيمياوية ‪ /‬حسب طبيعة المكونات وتشمل ما يلي ‪:‬‬

‫األوساط التخليقية ( التصنيعية) ‪Synthetic Media‬‬

‫األوساط شبه التخليقية ‪Semi – Synthetic Media‬‬

‫األوساط الطبيعية ‪Natural Media‬‬

‫األوساط شبه الطبيعية ‪Semi-Natural Media‬‬

‫ثالثا‪:‬تقسم االوساط الزرعية حسب الغرض من استخدامها الى ‪:‬‬

‫االوساط الزرعية الغنية ‪Enriched culture media‬‬

‫االوساط الزرعية االختيارية‪Selective culture media‬‬

‫االوساط الزرعية التفريقية ‪Differential culture media‬‬

‫االوساط الزرعية الحية ‪living culture media‬‬

‫االوساط الزرعية الحافظة ‪Maintenance‬‬

 ‫أوًال ‪ :‬الحالة الفيزياوية ‪ /‬حسب القوام وتشمل ما يلي ‪:‬‬

‫‪-1‬األوس اط الس ائلة ‪ : Liquid Media‬وه ذه تك ون خالي ة من األك ار ‪ (Agar‬الح ظ تعري ف وأهمي ة ه ذه‬
‫المادة في الفقرات الالحقة) لذلك تبقى سائلة بعد تحضيرها وتعقيمها وتنتهي تسمية األوساط الجاهزة من هذا‬
‫النوع إما بكلمة ‪ Medium Broth‬مثال‪ Nutrient Broth :‬و ‪ Mac Conky Broth‬و ‪Litmus Milk‬‬
‫‪. Medium‬‬

‫‪-2‬األوساط الصلبة ‪ : Solid Media‬وهذه األوساط تحتوي على ‪ % 2 – 1.5‬من مادة األكار التي تجعل‬
‫قوام الوسط هالمي ًا ( يشبه الجلي ) وتنتهي تسمية األوساط الجاهزة من هذا النوع بكلمة ‪ Agar‬للداللة على‬
‫احتواء الوسط ‪.‬‬

‫‪-3‬األوساط شبه الصلبة ‪ : Semi – Solid Media‬تحتوي هذه األوساط على نسبة قليلة من مادة‬
 ‫ثانيًا ‪ :‬المكونات الكيمياوية ‪ /‬حسب طبيعة المكونات وتشمل ما يلي ‪:‬‬
‫‪-1‬األوساط التخليقية ( التصنيعية) ‪Synthetic Media‬‬
‫وهي األوساط التي تتألف من مركبات كيمياوية معروفة التركيب كمًا ونوعًا‬

‫‪-2‬األوساط شبه التخليقية ‪Semi – Synthetic Media‬‬

‫( ‪. )Blood Nutrient Agar‬‬ ‫وهي األوساط التي تكون جميع مكوناتها معروفة كمًا ونوعًا عدا مادة واحدة مثل‬

‫‪-3‬األوساط الطبيعية ‪ ( Natural Media‬األوساط غير الصناعية)‬

‫وهذه تتكون من مواد طبيعية أو مشتقاتها أو أجزاء منها كالحليب واللحم والبيض وبعض األنسجة النباتية والتي تحتوي على‬
‫‪ Nutrient‬االحتياجات الغذائية المطلوبة لألحياء المراد تنميتها على شكل مركبات عضوية متعددة ومن األمثلة عليها‬
‫‪Broth‬‬

‫‪-4‬األوساط شبه الطبيعية ‪Semi-Natural Media‬‬

‫وهي األوساط التي تكون جميع مكوناتها مجهولة كمًا ونوعًا عدا مادة واحدة مثل الدم ‪5 +‬غم كلوريد الصوديوم ( ‪Blood +‬‬
‫‪) 5 gm NaCl‬‬
 ‫ثالثا ‪ ::‬حسب التركيب والغرض من االستخدام‬
‫‪ 1-‬األوساط الغنية ‪:Enriched media‬‬
‫أوساط بسيطة مضافًا إليها مواد غذائية غنية مثل الدم‪ ,‬المصل‪ ,‬مستخلصات النباتات أو الحيوانات لمواجهة متطلبات النمو الصعب اإلرضاء مثل‬
‫‪. Serum agar – Milk agar – Blood agar‬‬

‫‪ 2-‬األوساط االختيارية ‪: Selective media‬‬

‫مثل إضافة بعض المواد بتركيز معين كالصبغات‪ ,‬أمالح الصفراء‪ ,‬المضادات الحيوية‪ ,‬األحماض للسماح بنمو مجموعة من البكتيريا دون غيرها كإضافة صبغة االيوسين‬
‫الكريستال البنفسجي بتركيز معين يؤدي إلى نمو مختلف أنواع البكتيريا السالبة لصبغة جرام ويمنع نمو البكتيريا الموجبة‬

‫‪ 3-‬األوساط التفريقية ‪: Deferential media‬‬

‫األوساط التي تسمح بنمو نوعين من البكتيريا يمكن التمييز بينهما‪ ,‬مثل بيئة آجار الدم فبإضافة الدم إلى الوسط الزراعي يسمح بتمييز البكتيريا المحللة للدم وغير المحللة‪,‬‬
‫حيث تظهر حلقة فارغة حول المستعمرة المحللة‪ ,‬وبذا تلعب األوساط المحتوية على الدم دور الوسيط الغني المفرق في الوقت ذاته‪.‬‬

‫‪ 4‬االوساط الزرعية الحية ‪Living culture media‬‬

‫يتكون الوسط الغذائي الحي من خاليا او انسجة حيوانية او نباتية حية موجودة في وسط غذائي مالئم ‪ ،‬ومن االحياء المجهرية التي تنمو اجباريا على هذه االوساط هي‬
‫الفيروسات والركتيسيا ‪.‬‬

‫‪ –5‬االوساط الزرعية الحافظة ‪Maintenance media‬‬

‫تستعمل هذه االوساط للحفاظ على حيوية االحياء المجهرية وخواصها الفسلجية لمدة معينة ‪ .‬وتستعمل اوساط معينة لهذا الغرض غير االوساط التي تستخدم للنمو االفضل اذ‬
‫ان النمو السريع يصاحبه موت سريع للخاليا وهذا غيرمرغوب في االوساط الحافظة ولهذا يفضل عدم استخدام الكلوكوز في هذه االوساط ‪ ،‬كما ان كل نوع من االحياء‬
‫المجهرية له وسط زرعي خاص به بحيث يمكن حفظه لمدة اطول ‪.‬‬

‫‪ - 6‬االوساط الزرعية التحليلية ‪Assay media‬‬

‫وهي اوساط معرفة كيمياويا ) صناعية ( تستخدم لتقييم بعض المواد مثل الفيتامينات والحوامض االمينية والمضادات ‪.‬‬
 ‫المكونات األساسية لألوساط الزراعية‪:‬‬
‫تشترك معظم األوساط الزراعية في احتوائها على المواد التالية‪:‬‬
‫‪ - 1‬الببتون ‪Peptone‬‬
‫يعتبر مصدرًا هامًا للنتروجين العضوي في البيئات المعدة لتنمية البكتيريا غير ذاتية التغذية ‪ ،‬يحضر من اللحم الخالي من الدهون بعد تحلله بإنزيم الببسين‪.‬‬
‫‪ - 2‬خالصة اللحم ‪Beef extract‬‬
‫تحضر من اللحم البقري الخالي من الدهون بعد غليه وترشيح الخالصة وتركيزها‪ ,‬يحتوي المستخلص على بعض األحماض غير العضوية وبعض المواد العضوية مثل‬
‫األحماض األمينية ‪ ،‬الجلوكوز‪ ،‬اليوريا ‪ ،‬حامض اللكتيك‪ ،‬الفيتامينات ‪ ،‬عوامل النمو األخرى‪.‬‬
‫‪ - 3‬خالصة الخمير ‪Yeast extract‬‬
‫تحتوي على بعض األحماض األمينية ‪ ،‬وبعض العوامل المساعدة للنمو ‪ ،‬وأمالح معدنية‪.‬‬
‫‪ -4‬الماء ‪Water‬‬
‫تحتاج الخاليا الحية إلى الماء لنموها وإلتمام عملياتها األيضية ‪ ،‬وعالوة على استخدامه كمادة مذيبة للمواد الغذائية ‪ ،‬ويفضل استخدام الماء المقطر لخلوها من األمالح‬
‫المعدنية‪.‬‬
‫‪ - 5‬المواد التصليبية ‪: Solidifying agents‬‬
‫تضاف إلى بيئة الزرع السائلة بعض المواد لتساعدها على تحولها إلى بيئة صلبة تساعد على تكوين مستعمرات فرديه‪ .‬وفيما يلي بعض المواد التصليبية التي تضاف إلى‬
‫بيئات الزرع ‪:‬‬
‫أ ‪ -‬الجيالتين ‪Gelatin‬‬
‫أول ما استعمل كمادة تصليبية في بيئات الزرع‪ ,‬وهو عبارة عن مادة بروتينية تحضر بمعاملة عظام الحيوانات‪ ,‬ويندر حاليًا استعمال الجيالتين كمادة تصليبية في البيئة‬
‫نظرًا ألن كثير من البكتيريا يمكنها تحليله مائيًا‪ ,‬وألنه ينصهر عند درجات التحضين‪.‬‬
‫ب ‪ -‬اآلجار آجار ‪Agar agar‬‬
‫مادة كربوهيدراتيه تستخلص من بعض الطحالب البحرية الحمراء‪ ,‬والتي تنمو بوفرة على سواحل بعض الدول مثل اليابان‪ ,‬وهو يتصلب عند درجة حرارة من‬
‫‪ 42- 45‬م‪ ,‬ويمكن إسالته مرة ثانية عند درجة حرارة ‪ 89‬م‪ ,‬ويتميز عن الجيالتين كونه ال يمكن تحليله بيولوجيا ألن عدد الكائنات المحللة له قليلة جدًا‪.‬‬
‫ج ‪ -‬السليكا ‪Silica‬‬
‫تعتبر مادة غيرغذائية فهي عادة تستعمل في تحضير البيئات الالزمة لتنمية الكائنات الذاتية التغذية‪ ،‬وذلك لمنع نمو البكتيريا غير ذاتية التغذية معها ‪.‬‬
‫هن•اك ش•ركات متخصص•ة بتحض•ر أوس•اط الزراعي•ة أو الغذائي•ة مث•ل ش•ركة ‪ ، Oxoid‬شركة ‪ ، Difco‬شركة ‪Fluca‬‬
‫وغيره ا ‪ ،‬يتم تجه يز ه ذه األوس اط من قب ل الش ركات على ص ورة مس حوق في عب وات تك ون معلم ة تتض من‬
‫المعلومات التالية‪:‬‬
‫‪ o‬أسم الوسط‬
‫‪ o‬نوع الوسط‬
‫‪ o‬األغراض التي يستخدم من اجلها ‪:‬‬
‫‪ .I‬عـــــزل ‪Isolation‬‬
‫‪ .II‬عــــــــد ‪Enumeration‬‬
‫‪.III‬تشخيص ‪Identification‬‬
‫‪.IV‬تمـــــييز ‪Differentiation‬‬
‫‪ o‬مكونات الوسط‬
‫‪ o‬طريقة تحضير الوسط‪.‬‬
 ‫تحضر ‪ 500‬مل من وسط ‪ Nutrient Agar‬ويتم التحضير بأتباع الخطوات اآلتية ‪:‬‬
‫يتم وزن كمية من الوسط حسب تعليمات الشركة المثبتة على علبة الوسط ‪،‬فاذا كانت تعليمات الشركة تشير‬ ‫‪o‬‬
‫مثال‪ 28:‬غ رام من الوس ط في ل تر واح د(لتحض ير ل تر من الوس ط)يتم عندئ ذ وزن ‪28‬غ رام من ه اذا ك ان‬
‫المطل وب تحض ير ل تر منه‪.‬ام ا اذا ك ان المطل وب تحض ير ‪ 500‬م ل من الوس ط فيتم عندئ ذ وزن ‪ 14‬منه‪.‬‬
‫وبواس طة الم يزان الحس اس وي ذاب في‪ 500‬م ل م اء مقط ر في دورق زج اجي مخ روطي الش كل (‪)Flask‬‬
‫ذات حجم ‪ 1‬لتر ‪ ،‬ويحرك لذوبان وتجانس الوسط مع الماء المقطر‪.‬‬
‫ينق ل ال دورق المخ روطي بع د تغطيت ه ( إم ا بغطائ ه البالس تيكي أو ب القطن ) إلى جه از التعقيم البخ اري‬ ‫‪o‬‬
‫‪ Autoclave‬لتعقيم الوسط في ‪ 121‬م‪ °‬وضغط ‪ 1.5‬كغم‪/‬سم‪ 2‬لمدة ‪ 15‬دقيقة وقد تعتمد طريقة أخرى للتعقيم‬
‫اعتمادًا على توجيهات المجهز أيضا أو طبيعة الوسط ‪.‬‬
‫يعقم سطح الطاولة التي يتم عملية صب االطباق عليها بالكحول ‪ %70‬ويهيًا مصباح بنزن أو في حالة صب‬ ‫‪o‬‬
‫االطب•اق داخ•ل كابين•ة الع•زل ‪ Flow laminar‬فيتم حينه ا تعقيم ارض ية وج دران الكابين ة ب الكحول او يعقم‬
‫باالشعة فوق البنفسجية ‪. UV light‬‬
‫يبرد الوسط بعد تعقيمه إلى ‪55-50‬م‪ °‬تقريبًا ثم يصب في أطباق بتري ‪ Petridish‬معقمة سابقًا قرب اللهب‬ ‫‪o‬‬
‫وتترك األطباق لحين تصلب الوسط وبهذا يصبح الوسط جاهزًا لالستخدام ‪.‬‬
‫كيفية تحضير الوسط الغذائي‬
 ‫تمارين تطبيقية على األوساط الزرعية‬
‫‪ .1‬االطالع على أمثلة من األوساط الزرعية التجارية مثل ‪:‬‬
‫‪Nutrient Broth o‬‬
‫‪Nutrient Agar o‬‬
‫‪MacConky Agar o‬‬
‫‪EMB Agar o‬‬
‫‪Potato Dextrose Agar (PDA) o‬‬
‫تسجيل المعلومات األساسية عن هذه األوساط ‪.‬‬