Електрофорез на

папері та в
агарозі
Підготувала студентка 2-го курсу
Медицина 1 а
Мерцалова Владислава
 Агарозний гель електрофорез
Електрофорез з агарозним гелем - це методика, яка
використовується для поділу нуклеїнових кислот переважно за
розмірами. Агароза - полісахарид, отриманий з морських
водоростей. Його можна розчинити в буфері для кипіння і
вилити в лоток, де він встановлюється в міру охолодження,
утворюючи плиту. Гелі агарози заливають гребінцем на місці, щоб
зробити лунки, в які поміщаються зразки ДНК або РНК після
затвердіння гелю. Гель занурюється в буфер і по всій плиті
наноситься струм. Дволанцюгова ДНК має рівномірний
негативний заряд, який не залежить від послідовного складу
молекули.
Тому, якщо фрагменти ДНК поміщаються в електричне
поле, вони будуть мігрувати від катода (-) до анода (+).
Швидкість міграції знаходиться в прямій залежності від
здатності кожної молекули ДНК черв'як або погойдуватися
своїм шляхом через просіюючий гель. Матриця агарози
забезпечує отвори для переміщення макромолекул.
Найбільші макромолекули мають найскладніший час
навігації по гелю, тоді як найменші макромолекули
прослизають крізь нього найшвидше.

Будова полісахариду агарози

Оскільки електрофорез використовує електричний струм як силу для
руху молекул через матрицю, молекули, що відокремлюються, повинні
бути заряджені. Оскільки співвідношення розміру до заряду для ДНК і
РНК є постійним для всіх розмірів цих нуклеїнових кислот, молекули
просто сортують виходячи з їх розміру - найменші рухаються
швидше, а найбільші рухаються повільніше.
Всі фрагменти заданого розміру будуть мігрувати на гелі однакову
відстань, утворюючи на гелі так звані «смуги». Візуалізація
фрагментів ДНК в гелі стає можливою завдяки додаванню барвника,
такого як бромід етидію, який інтеркалюється між основами і
флуоресцентами при огляді під ультрафіолетовим світлом. За
допомогою запуску еталонних ДНК відомих розмірів поряд із
зразками можна визначити розміри фрагментів ДНК у зразку.
Корисно відзначити, що за умовністю фрагменти ДНК описуються
не їх молекулярними масами (на відміну від білків), а довжиною в
парах основ (bp) або кілобазах (kb).
Агарозний гель електрофорез поділ ДНК - помаранчеві смуги є
фрагментами ДНК.
ДНК-смуги, візуалізовані за допомогою фарбування бромідом
етідію
 Електрофорез на папері
Електрофорез на папері відноситься до зональному
електрофорез, так як досліджуваний зразок наноситься у
вигляді невеликої зони. Даний метод є найбільш простим
методом поділу амінокислот і полягає в тому, що дуже
невелика кількість розчину (крапля), що містить суміш
амінокислот, наносять на центральну частину смужки
фільтрувального паперу, заздалегідь просоченої буфером з
певним pH, і прикладають до кінців смужки напруга, що
створює електричне поле
Амінокислоти в залежності від знака заряду під дією
напруги переміщаються по смужці в ту або іншу сторону.
При цьому швидкість руху амінокислоти буде залежати від
величини її сумарного заряду. Через певний час напруга
знімають, смужку висушують і для прояву розташування
амінокислот сприскують «проявником»,
наприклад нингидрином (2,2-дігідроксі- 1,3-індандіону),
який взаємодіє з амінокислотами при слабкому нагріванні
з утворенням забарвлених сполук (бузкове і синє
забарвлення ).
Смужка фільтрувального паперу з розділеними амінокислотами
називається електрофореграмме
Схема електрофорезу на папері
Багато біомолекули адсорбуються на папері
(ацетат целюлози), що перешкоджає руху і тим
самим отримання чітких результатів аналізу.
Явище адсорбції на папері характерно для
великих молекул, таких як білки, тому для
електрофорезу макромолекул застосовують
інші носії, наприклад мембрани з ацетату
целюлози або гелі з крохмалю, агарози і т. П.
ДЯКУЮ ЗА УВАГУ!