• BARTONELLA

INTRODUCTION

www.pitt.edu/~super1/lecture/lec8711/index.htm
www.pitt.edu/~super1/lecture/lec8711/index.htm
 TAXONOMIA
CLASE Alfa Proteobacteria

SUBCLASE -2 Proteobacteria

FAMILIA Bartonellaceae

Bartonella
GENERO

B.alsatica , B.bacilliformis , B.birtlesii , B.clarridgeiae , B.doshiae ,

B.elizabethae , B.grahamii , B. henselae, B.koehlerae , B.peromysci ,
ESPECIES B.schoenbuchensis , B.schoenbuchii * , B. talpae , B.taylorii ,
B. tribocorum , B.vinsonii , B. quintana.
* Bergey , 2 Enero del 2002.
http ://dx.doi.org /10.1007/bergeysoutline
Bartonella baciliformis
 1. DEFORMINA
 Proteína extracelular de 67kDa
2. MOVILIDAD
 La flagelina es una proteína de 42 kDa.
 Se expreso la flagelina de B. bacilliformis
en E. Coli: Se amplificó por PCR el gen fla
A e insertó en el plásmido pGEM-T,
obteniéndose la construcción pAEfla. Esta
se transfirió a E. coli BL21(DE3) dando
una buena expresión de flagelina (PAGE-
SDS).
 Se evaluará su capacidad antigénica de
la flagelina, proteinas de invacióm IaIA
en IaIB en ratones BalB/c.

Clonamiento y expresión del gen de flagelina de Bartonella

bacilliformis EN Escherichia coli. García-de-la-Guarda, R., Alvarado,
D., Lozano, O., Flores, L, Guerrero, A. M., Ventosilla, P., Guerra, H.,
Coha, J. M., Ramírez, P. y Romero C. IC, 2002-2003.
 INVASION

En resumen, las proteínas como la flagelina, ialAB, deformina,

RhoA, y el antígeno de 43 kDa han empezado a ayudar a
entender los mecanismos moleculares para la invasión de B.
bacilliformis a los eritrocitos. Las funciones de estas proteínas
todavía no se conocen totalmente,
Yanji Xu and Yan Chai Bartonella bacilliformis: Molecular Mechanisms of Invasion. Einstein
Quart. J. Biol. Med. (2002) 19:56-58.
 Modelo de ingreso de Bartonella bacilliformis al glóbulo rojo

Rolain JM, Novelli S, Ventosilla P, Maguina C, Guerra H, Raoult D. Immunofluorescence detection of B. bacilliformis
flagella in vitro and in vivo in human red blood cells as viewed by laser confocal microscopy. Ann N Y Acad Sci. 2003
Jun;990:581-4
 Diagnóstico Clínico
• FASE CRONICA o
verruga:
• FASE AGUDA o
Fiebre de Oroya:
Bacteremia, fiebre,
anemia hemolítica
severa,
hepatomegalia, Forma mular Forma multi miliar
esplenomegalia, etc.
• FASE
INTERCALAR:
asintomático. Lesión multi miliar
Toma de muestra de Pacientes con sospecha
de Bartonelosis y donantes de sangre.

I. INTRODUCCIÓN

• Para todo estudio científico la toma muestra es crucial

y se debe tener todas las precauciones que permitan
obtener resultados apropiados (verdaderos positivos y
negativos).

• En el presente protocolo se da algunas

recomendaciones que se deben tener en cuenta.
 Toma de muestra para pacientes nuevos o
reinfectados con sospecha de Bartonelosis en la
fase aguda, se les debe tomar:

 2 láminas, cada una debe tener una gota gruesa y un frotis

 Tomar en DOS tubos con anticoagulante (tubos con tapa
morada con citrato o EDTA) 3 mL de sangre a niños
menores de 3 años, y 5 mL a pacientes de 4 a más años (para
el cultivo y los estudios inmunologicos).
 Tomar en un tubo sin anticoagulante (tubos con tapas rojas)
3 mL de sangre a niños menores de 3 años, y 5 mL a
pacientes de 4 a más años (obtener el suero para pruebas
serológicas ).
 Los pacientes con sospecha clínica de
bartonelosis en fase eruptiva (verruga) el
primer día que lleguen al laboratorio, se les
debe tomar las siguientes muestras:
 2 láminas, cada una debe tener una gota gruesa y un
frotis.
 DOS tubo con anticoagulante (citrato o EDTA) de 3 mL
de sangre a niños menores de 3 años, y 5 mL a pacientes
de 4 a más años (para el cultivo).
 Un tubo sin anticoagulante de 3 mL de sangre a niños
menores de 3 años, y 5 mL a pacientes de 4 a más años
(obtener el suero para pruebas inmunológicas).
 Tomar fotos a todos los pacientes en fase eruptiva.
 Obtención del suero
 Una vez tomada la muestra los tubos deben ser rotulados con los códigos
correspondientes, y dejar reposar por unos 10 minutos en una gradilla,
luego centrifugar a 3000 rpm. por 5 minutos, y tomar el suero con la
pipeta Pasteur teniendo cuidado de no tomar rasgos de sangre.
 Rotular 2 o más tubos de micro-centrifuga de 1.5 mL
(eppendorf) con el código de la muestra y colocar 1 mL del suero en
cada uno.
 Sellar con parafilm y llevar a menos 20ºC (corresponde al frizer, la
parte superior de un
 refrigerador), transportar con hielo seco o refrigerantes.
 Las muestras con Citrato o
EDTA
 El 1º tubo debe centrifugarse en las mismas
condiciones que el suero, separar el plasma en 2
eppendorf. Esta muestra debe tener el mismo
código del suero, esta servirá para las pruebas
inmunológicas.

El 2º tubo debe reposar por 10 minutos, esta debe

ser preservada a 4ºC (corresponde a la parte baja
de la refrigeradora) hasta el momento del envío,
sirve para el cultivo.
 RESUMEN
 50 MUESTRAS DE PACIENTES EN FASE
AGUDA CON LÁMINA POSITIVA

 50 MUESTRAS DE PACIENTES EN FASE

ERUPTIVA

 SE HARA SEGUIMIENTO A LOS

PACIENTES Y SE LES TO TOMARA LAS 3
MUESTRAS DESPUES DE UN MES DEL
TRATAMIENTO y A LOS 6 MESES.
 ¿A QUIENES NO SE DEBE
TOMAR LA MUESTRA?
 NO SE LES TOMARÁ MUESTRAS A PACIENTES CON
TRATAMIENTO DE ANTIBIOTICOS PARA
BARTONELOSIS U OTRA ENFERMEDAD
 AL PACIENTE SE DEBE PREGUNTAR SI TOMO ALGUN
ANTIBIOTICO POR OTRA CAUSA (INFECCIONES
URINARIAS, FARINGITIS ETC.) EN ESA SEMANA, Y
CUANDO DEJO DE TOMAR, SI EL PACIENTE DEJO DE
TOMAR CUALQUIER ANTIBIOTICO HACE UNA SEMANA
Y TIENE LOS SINTOMAS ENTONCES SE LES DEBE
TOMAR LAS MUESTRAS MENCIONADAS.
 METODOS DE
LABORATORIO
DIAGNOSTICO BARTONELOSIS
 Diagnóstico de Laboratorio
• Directo: Frotis con coloración Giemsa o Wright

• Cultivo: medio agar Columbia enriquecido con sangre

de carnero al 10%.

• Coloraciones para cultivo: Gram, Verde de Malaquita

y Kodaka (para flagelos)

• Puebas serologicas: Western Blot, ELISA, etc.

TOMA DE MUESTRA EXAMEN
DIRECTO
OBSERVACION
MICROSCOPICA
TOMA DE MUESTRA CULTIVO
Y SEROLOGIA
MATERIALES UTILIZADOS
CULTIVO
PCR
 DIRECTO: Frotis
 Usar láminas nuevas y desengrasadas.
 Buen extendido, dejar que seque las láminas y
roturarlas con el nombre y apellido del paciente.
 Fijar con metanol, solo el frotis
 Envolver por separado las láminas, para ser
enviadas.
Diagnostico: Toma de la muestra

vídeo
 Frotis y Gota gruesa

• Usar láminas con borde esmerilado.

• Realizar una buena punción digital para
evitar doble punción. Una vez ejecutada
la gota gruesa (1.5 cm2) es necesario fijar
el frotis con metanol pero al mismo
tiempo se debe cuidar de no fijar la gota.
La gota debe deshemoglobinisarce con
agua destilada.
•Preparar la solución trabajo de Giemsa
(1/10) al momento de efectuar la
coloración y colorear las láminas.
 Lectura en el frotis

• El porcentaje de parasitemia:

% parasitemia = (# GR parasitados/ total de

GR) X 100

• Si la parasitemia es elevada (> 10%) examinar

500 GR.
• Si la parasitemia es baja (< 1%) examinara 2000
GR.
Formas Bacilares
Formas cocobacilares
Formas cocoides
Gránulos basófilos
Cuerpos Howell Jolly
Cuerpos Papenheimer
 CONTROL DE CALIDAD
Se debe tener en cuenta 1:
• Valorar la preparación del material, toma de
muestra, coloración y microscopía.
• Prueba de eficiencia, donde se emplea un cuejo de
láminas con diagnóstico conocido.
• La calificación será según escala:
 Excelente: 95-100% correctos
 Bien: 85-94% correctos
 Regular: 70-84% correctos.
 Mal: menos de 70% correctos.
 CULTIVOS:
• Muestra: sangre total con EDTA (3-5mL)
• Agar base Columbia ( pH 7.2)
suplementado con sangre de carnero al 10%.
• Preparado en ámpulas: 1er. Aislado
• Incubación: 29º C o temperatura ambiente
• Tiempo: 2 a 3 semanas.
• Sub-cultivos en tubos y placas,
coloraciones para confirmar.
Morfología de colonias típicas
de B. bacilliformis
• 1er. Aislado: Crecen generalmente a partir de la
segunda semana de incubación.

• Imposible diferenciarlas, necesario: subcultivos.

• Subcultivos: Crecen entre los 4-6 días de

incubación. Colonias pequeñas de 0.5-2 mm,
bordes enteros y transparentes.
Colonias de Bb en 1er. Aislado
(ámpulas)
Colonia típica de Bb
(subcultivo)
Tinción Kodaka ( para flagelos)