HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO

CỦA TINH DẦU LÁ MYRCIA

SPLENDENS CHỐNG LẠI TẾ
BÀO UNG THƯ PHỔI A549
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC10152754/
Các nội dung chính

GIỚI THIỆU Tinh dầu

Phương pháp
 Giới thiệu

◦ Ung thư là vấn đề ngày càng được quan tâm ở hầu hết các quốc gia
trên thế giới. Theo số liệu báo cáo về ung thư, năm 2012 thế giới có
khoảng 14,1 triệu trường hợp mới và khoảng 8,2 triệu ca tử vong do
ung thư, dự đoán đến năm 2030 con số đó lên tới 13 triệu người.
 Tinh dầu
◦ Tinh dầu là chất lỏng kỵ nước đậm đặc có mùi thơm đặc trưng được
tạo ra bởi các loại thực vật có mùi thơm.
◦ dễ bay hơi
◦ là chất chuyển hóa thứ cấp có hàm lượng thấp hơn trong các bộ phận
khác nhau của thực vật.
◦ Tinh dầu từ nhiều loại thực vật có các thành phần chống ung thư
 Cơ chế hoạt động
◦ Ngăn chặn chu kỳ tế bào,
◦ Apoptosis
◦ Sửa chữa DNA.
Tinh dầu làm giảm sự tăng
sinh, di căn và MDR của tế
bào ung thư.
 Vật liệu và Phương pháp

Nguyên liệu và pha chế tinh dầu

◦ Lá và thân của mỗi mẫu (mỗi mẫu 500 g) được chưng cất bằng thủy
phân trong thiết bị loại Clevenger trong 4 giờ, sau đó tinh dầu được
tách ra và làm khô bằng Na 2 SO 4 khan .
◦ Dầu thu được được bảo quản ở -5°C cho đến khi sử dụng.
 Phân tích GC/MS của tinh dầu

◦ Máy sắc ký khí Hewlett-Packard 6890 với hai đầu dò ion hóa ngọn
lửa (FID) hoặc với máy dò chọn lọc khối lượng Hewlett-Packard 5973
(GC/MS).
◦ Hai cột mao quản silica hợp nhất
◦ GC: 70 đến 220 °C, 3 °C/phút, duy trì ở 220 °C trong 15 phút.
◦ GC/MS: 250 °C, MS 230 °C.
◦ Khí mang: Helium.
◦ Tốc độ dòng khí mang: 30 cm/s.
 Dòng tế bào và nuôi cấy tế bào

◦ Môi trường RPMI hoặc DMEM của Dulbecco được bổ sung Huyết
thanh bào thai bò bất hoạt do nhiệt (FBS, 10%) và penicillin 100 U/mL
với 100 µg/mL streptomycin, và ủ ở 37°C với môi trường 5% CO 2
 MTT : đánh giá độc tính trên dòng tế bào
◦ Tế bào được gieo vào các đĩa 96 giếng (2 × 10 4 tế bào/mL trong 200 µL môi
trường) được ủ qua đêm.

◦ Sau 24 giờ, EO (2,5–100 µg/mL), hòa tan trong Dimethylsulfoxide (DMSO)

hoặc Doxorubicin (25 µg/mL) được thêm vào từng giếng và ủ trong 24 giờ.

◦ Sau đó, 200 µL MTT (5 mg/mL trong PBS) được thêm vào từng giếng và ủ
tiếp trong 3 giờ sau đó, sản phẩm formazan được hòa tan trong 150 µL DMSO
và độ hấp thụ được đọc trong máy đọc đĩa vi thể (Synergy H1 , Biotek, VT,
EUA) ở bước sóng 570 nm.
 Xét nghiệm nhân bản

◦ Tế bào gieo vào đĩa 6 giếng môi trường RPMI.

◦ Ủ trong lò với môi trường CO2 trong 24 giờ.
◦ Tế bào xử lý bằng EO nồng độ này tương ứng.
◦ Môi trường ban đầu loại bỏ và thay thế bằng môi trường DMEM hoàn
chỉnh.
◦ Nhuộm màu.
Xem xét sự tăng trưởng và số lượng tế bào sau xử lý và đánh giá
tác động của EO trên sự phát triển của tế bào ung thư
96 giếng trước đó và thêm nồng độ EO
được theo dõi ở nhiệt khác nhau 50–500 đặt trong tủ ấm 37oC
độ phòng (24h) dưới µg/mL vào tất cả các CO2 trong 24 giờ
Tác dụng gây độc tế bào đối với tế bào ung thư
tác động của CO2 ở giếng ngoại trừ giếng cho quá trình tách
độ ẩm 5% và 95% đối chứng.
phổi bằng tinh dầu

OD 540nm Bọc nhôm và duy trì ở 25 µl dung dịch MTT

đk nhiệt độ phòng từ và sau đó được pha
4-5 giờ loãng bằng PBS
Tác dụng gây độc tế bào đối với tế bào ung thư
phổi bằng tinh dầu
Các khuẩn lạc hình thành
sau khi xử lý với nồng độ
tăng dần (10, 20 và 40
µg/mL) trong 24 giờ M.
splendens EO và 10 ngày
tăng trưởng.
Nhuộm DAPI và Phalloidin/FITC
Nồng độ 10, 20 sự giảm thể tích tế
bào, có sự tích lũy DAPI trong nhân
nhiều hơn, cho thấy sự phân mảnh
DNA và ngưng tụ chất nhiễm sắc.
Nồng độ 40 µg/mL, sự làm tròn, co
rút tế bào chất và nhân, bên cạnh
hiện tượng ngưng tụ chất nhiễm sắc
và phân mảnh DNA.